神经胶质瘤患者外周血淋巴细胞亚群检测的临床分析

朱琳燕

湖北黄石市中心医院肿瘤内三科 黄石 435000

神经胶质瘤占全部颅内肿瘤的40%～50%，是来源于神经上皮的一种肿瘤，具有低治愈率、高病死率、高复发率及高发病率特点［1］。神经胶质瘤的发生和发展与机体免疫状态有关，机体免疫监视功能减弱及免疫功能低下常相互作用，促进神经胶质瘤的发生及发展［2］。其中淋巴细胞亚群是其最重要的一种指标，其肿瘤的恶化程度与各亚群比例变化关系密切［3］。本文2011-12—2013-08在我院接受诊治的神经胶质瘤患者65例，采用流式细胞术对胶质瘤不同分级患者的外周血淋巴细胞亚群及调节T淋巴细胞（Treg）的比例进行分析，探讨与肿瘤恶化程度的关系。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2011-12—2013-08在我院接受诊治的神经胶质瘤患者65例为观察组，男42例，女23例；年龄29～80岁，平均（54.8±10.6）岁；根据胶质瘤恶性程度WHO分级，其中Ⅱ级～Ⅲ级作为A组，Ⅳ级作为B组。A组43例，男32例，女11例；年龄30～78岁，平均（55.1±11.2）岁；B组22例，男10例，女12例；年龄29～80岁，平均（54.2±10.3）岁。所有患者均经组织病理学检查确诊。选择同期在我院健康体检者43例作为对照组，男23例，女20例；年龄31～75岁，平均（53.9±9.6）岁。

1.2 主要试剂与仪器 美国Beckman Co uLter FC500流式细胞仪；试剂主要为CD4＋、CD25＋Treg试剂盒及Sim uL SET IMK Plus试剂盒，均为美国Beckman Co uLter公司生产。

1.3 淋巴细胞亚群检测及CD4＋CD25＋Treg检测 （1）淋巴细胞亚群检测：本组所有患者均在清晨空腹取静脉血2 000μL于乙二胺四乙酸（EDTA-K2）真空抗凝采血管内混匀，在室温条件下保存。取6种不同荧光标记抗体各20μL与100μL全血中，并将其混匀，避光孵育25min加入红细胞裂解液（Lysing Solution）1 000μL避光孵育12min加入450 μL PBS避光孵育12min，以1 200r／min离心6min，弃去上清，PBS洗涤2次，再加入500UPBS上机检测，记录CD3＋CD4＋、CD3＋CD8＋、CD4＋／CD8＋阳性细胞百分比。（2）CD4＋CD25＋Treg检测：在其中1支管中加入20μL IgG1-FITC、20μL IgG2a-PE，另外1只管中加入20μL CD4-FITC、20μL CD25-PE分别加入100μL全血中，并将其混匀，避光孵育25min加入红Lysing Solution 1000μL避光孵育12min加入450μL PBS避光孵育12min，以1 200r／min离心12min，弃去上清，PBS洗涤2次，再加入500μL PBS上机检测。

1.4 统计学处理 运用统计学软件SPSS 11.0进行分析，计量资料数据采用（±s）表示，两组样本均数对比采用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 2组外周血T淋巴亚群检测结果对比 观察组外周血中CD3＋CD4＋T细胞百分比较对照组显著降低（P＜0.05）；观察组外周血中CD3＋CD8＋T细胞百分比较对照组升高，但无显著性差异（P＞0.05）；观察组外周血中CD4＋／CD8＋比值较对照组显著降低（P＜0.05）。见表1。

表1 2组外周血淋巴细胞亚群检测结果对比 （±s，%）

表1 2组外周血淋巴细胞亚群检测结果对比 （±s，%）

注：与对照组比较，＊P＜0.05

组别 n CD3＋CD4＋ CD3＋CD8＋CD4＋／CD8＋观察组 65 36.9±4.6＊ 34.1±6.8 0.7±0.2＊对照组43 41.7±5.9 32.3±7.1 1.3±0.3

2.2 2组外周血淋巴细胞亚群检测结果对比 A组外周血中CD3＋CD4＋百分比、CD4＋／CD8＋比值均较B组显著降低（P＜0.05）；A组外周血中CD3＋CD8＋百分比较B组显著升高（P＜0.05）。见表2。

表2 2组外周血淋巴细胞亚群检测结果对比 （±s，%）

表2 2组外周血淋巴细胞亚群检测结果对比 （±s，%）

注：与B组比较，＊P＜0.05

组别 n CD3＋CD4＋ CD3＋CD8＋CD4＋／CD8＋A组 43 35.1±4.8＊34.6 ±6.9＊ 0.6±0.3＊B组22 40.4±6.9 31.7±6.8 1.2±0.4

2.3 2组T淋巴细胞与CD4＋CD25＋检测结果对比 观察组CD3＋T淋巴细胞百分比较对照组下降，但无显著差异（P＞0.05）；观察组CD4＋CD25＋Treg百分比较对照组显著升高（P＜0.05）。见表3。

表3 2组T淋巴细胞与CD4＋CD25＋Treg亚群百分比检测结果对比 （±s，%）

表3 2组T淋巴细胞与CD4＋CD25＋Treg亚群百分比检测结果对比 （±s，%）

注：与对照组比较，＊P＜0.05

组别 n CD3＋T淋巴细胞 CD4＋CD25＋Tre g观察组 65 63.3±8.3 7.3±2.9＊对照组43 66.1±8.7 5.6±3.5

2.4 2组T淋巴细胞与CD4＋CD25＋检测结果对比 A组CD3＋T淋巴细胞百分比较B组下降，但无显著差异（P＞0.05）；A组CD4＋CD25＋Treg百分比较B组显著升高（P＜0.05）。见表4。

表4 2组T淋巴细胞与CD4＋CD25＋检测结果对比 （±s，%）

表4 2组T淋巴细胞与CD4＋CD25＋检测结果对比 （±s，%）

注：与B组比较，＊P＜0.05

组别 n CD3＋T淋巴细胞 CD4＋CD25＋Tre g A组 43 63.5±7.6 9.5±4.1＊B组22 64.2±7.9 6.3±3.4

3 讨论

神经胶质瘤是常见的一种神经系统肿瘤，该肿瘤占神经系统原发性肿瘤一半以上。研究表明，在全年所有新发肿瘤中，胶质瘤占1.4%，其中病死率占所有肿瘤病死患者的2.4%，而患者的生存期与胶质瘤级别呈负相关，级别越高生存期越短。目前，手术难以将神经胶质瘤完全切除。同时胶质瘤患者由于增殖活性较高，术后易复发。而神经胶质瘤的发生和发展与机体免疫状态有关，抗肿瘤机体免疫包括细胞与体液两大免疫，而在杀伤肿瘤细胞及控制肿瘤生长方面，T细胞介导的细胞免疫具有重要作用。在神经胶质瘤患者发生及发展过程中，细胞增殖能力降低、T细胞亚群数量发生变化、细胞毒性降低及免疫功能失衡［4］。本文结果表明，观察组外周血中CD3＋CD4＋T细胞百分比较对照组显著降低，观察组外周血中CD3＋CD8＋T细胞百分比较对照组升高，观察组外周血中CD4＋／CD8＋比值较对照组显著降低。A组外周血中CD3＋CD4＋百分比、CD4＋／CD8＋比值均较B组显著降低，A组外周血中CD3＋CD8＋百分比较B组显著升高。由此表明，神经胶质肿瘤患者免疫功能处于抑制状态。

Treg细胞具有防止免疫过程过度损伤机体与维持自身耐受的作用，是具有负调节机体免疫反应的一群淋巴细胞，同时也参与肿瘤细胞逃避监视［5］。CD4＋CD25＋T细胞是天然产生的Treg细胞，研究表明，CD4＋CD25＋T细胞主要具有两大功能，包括免疫抑制和低反应性，这些抑制功能的发挥不是细胞因子依赖性抑制，而是接触式抑制［6］。活化的CD4＋CD25＋T细胞能够使CD4＋与CD8＋的T细胞表达IL-2受到抑制；而CD4＋CD25＋T细胞活化后由于CTLA-4分子表达增加，从而使得T细胞介导的免疫调节受到影响［7］。本文结果表明，观察组CD4＋CD25＋Treg百分比较对照组显著升高（P＜0.05）；A组CD4＋CD25＋Treg百分比较B组显著升高（P＜0.05）。由此表明，Treg细胞数目影响肿瘤的发生、增长。综上所述，Treg细胞可作为神经胶质瘤患者重要检测指标，有利于对神经胶质瘤患者恶性程度及疗效进行判断。

［1］迟林，李昊淼.恶性肿瘤患者外周血淋巴细胞亚群及Treg细胞检测的临床应用［J］.山东医药，2010，50（22）：59-60.

［2］齐红，刘玉侠，任林广，等.肺癌患者外周血淋巴细胞亚群与性别、年龄及临床分期的关系［J］.中国实验诊断学，2012，16（11）：2034-2037.

［3］马学华，张萱，滕雷，等.胶质瘤切除术对神经胶质瘤患者外周血淋巴细胞亚群及CD4＋CD25＋调节性T细胞的影响［J］.黑龙江医学，2013，37（4）：241-244.

［4］Kobayashi E，Mizukoshi E，Kishi H，et al.A new cloning and expression system yields and validates TCRs from blood lymphocytes of patients with cancer within 10days［J］.Nature Medicine，2013，19（11）：1542-1546.

［5］马学华，张萱，滕雷，等.神经胶质瘤患者外周血淋巴细胞亚群检测的临床意义［J］.国际检验医学杂志，2013，34（9）：1080-1082.

［6］Yang S，Karne NK，Goff SL，et al.A simple and effective method to generate lentiviral vectors for exvivo gene delivery to mature human peripheral blood lymphocytes［J］.Human Gene Therapy，2012，23（2）：73-83.

［7］赵晓，燕翔，孙胜杰，等.晚期肺腺癌患者外周血T淋巴细胞亚群检测的临床意义［J］.南方医科大学学报，2012，32（5）：752-754.