保健食品中11种西地那非类药物的检测

李航，陈小泉，杜钢，姜卫东

（四川省食品药品检验检测院，成都 611731）

随着中国经济和社会的发展，人民越来越关注健康和养生问题，保健食品的开发顺应了这个需求，也给人民带来了益处。但随着商业竞争的加剧和人们对保健功效作用的看重，不良生产企业向保健食品中非法添加药物的行为愈演愈烈。为了有效打击和查处此种行为，保障人民食用保健食品的安全，维护保健食品市场的正常秩序，本文拟建立抗疲劳保健食品中非法添加西地那非类药物的检测方法。

对保健食品中西地那非类药物的检测，传统的分析方法还是采用反相高效液相色谱，用保留时间结合光谱扫描图谱来定性，用峰面积外标法定量测定。随着分析仪器技术的发展，现在更趋向于液质联用定性、定量同时测定，不管是三重四级杆质谱还是离子阱质谱等，对定性的准确判定都起到了确证的作用[1]。对保健食品中西地那非类药物的非法添加检测，国内普遍还是做一个或几个化合物，本文同时检测11个化合物。

1 仪器、试剂、样品

LC-Agilent 1200 /MS- QQQ 6460 （美国安捷伦科技有限公司）

甲醇、乙腈为色谱纯(Fisher Chemicals)，水为超纯水，其余试剂为分析纯，那红地那非（Toronto Research Chemicals, lot:14-MVI-133-2 ）、红地那非（Toronto Research Chemicals, lot:11-MVI-164-1 ）、氨基他达拉非（Toronto Research Chemicals, lot:4-WSM-124-1 ）、羟基豪莫西地那非（Toronto Research Chemicals, lot:4-MVP-122-2）、盐酸伐地那非三水合物（Dr.Ehrenstorfer GmbH, lot:91222）、豪莫西地那非（Toronto Research Chemicals, lot:11-MVI-176-1）、硫代艾地那非（广州奕源生物科技有限公司，批号201009001）、那莫西地那非（Toronto Research Chemicals, lot:14-MVI-127-1）、枸橼酸西地那非（Toronto Research Chemicals, lot:3-ARP-69-1 ）、他达拉非（Toronto Research Chemicals, lot:8-SSR-172-1）、伪伐地那非（Toronto Research Chemicals, lot:1-BIN-18-2）。

样品：具有抗疲劳功能的保健品（A、B、C、D）

2 实验方法

2.1 混合对照工作液的制备

精密称取上述11种对照品，分别置各量瓶中，加甲醇适量，超声溶解并定容至刻度，摇匀，作为对照品储备液。取各对照品储备液适量，置同一量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得混合对照品工作液（各对照品浓度分别约为5 μg/ml）。

2.2 样品制备

2.2.1 固体制剂

取样品混匀，研细，取相当于一次口服剂量的样品，置25mL量瓶中，加乙腈20mL，超声处理15分钟，放置至室温，用乙腈稀释至刻度，摇匀，过0.22μm滤膜，即得。

2.2.2 液体制剂

取相当于一次口服剂量的样品，置50mL量瓶中，加乙腈适量，振摇3分钟，用乙腈稀释至刻度，摇匀，过0.22μm滤膜，即得。

2.3 液相分析条件建立

通过优化流动相及液相洗脱梯度达到11种化合物的基线分离[2][5]。

色谱柱：Agilent，XDB-C18，5μm，4.6×250mm，[进样量]20 μl；

柱温：35℃；流速：0.8 ml/min；检测波长：230nm；分流比：液相-质谱= 3：2；

流动相 A： 甲醇（含15%乙腈）；

B：0.02mol/L 乙酸铵溶液（含15%乙腈、0.1%乙酸）

表1 液相梯度洗脱程序

2.4 液质联用分析条件建立

通过优化质谱离子源参数及一级、二级质谱扫描参数，对11种化合物进行质谱检测[3][4][6]，见表2~表4。

2.5 数据采集及定性判定

对照品溶液和供试品溶液各进样20 μl，按上述仪器条件记录UV和MS信号。

表2 ESI离子源参数（正模式）

表3 一级质谱扫描参数

表4 二级质谱扫描参数

2.6 定量计算及检出限

若定性判定检出，则用液相色谱数据外标校正因子法计算检出目标化合物的浓度。

若定性判定未检出，则取混合对照溶液稀释2倍注入LCMS，测得信噪比。按S/N=3:1，计算检出限。

2.7 实样检测

将市售具有抗疲劳功能的保健品（A、B、C）按上述建立的方法，进样20 μl，LC-MS联用分析。

3 结果与分析

3.1 混合对照

由图1看出，11种对照品在一个液相梯度洗脱条件下，各色谱峰均达到基线分离，说明优化后采用的色谱条件适合11种化合物的同时分离。

图1 11种对照品化合物的HPLC图

图2 11种化合物的EIC图

从图2提取离子色谱峰看出，通过色谱峰的保留时间及特征质量数的离子可以初步判断样品中是否含有目标化合物。即若样品中出现的色谱峰，其保留时间及离子的特征质量数与对照品都一致，则做二级质谱进一步确证。

3.2 检出限

表5 11种化合物的检出限

保健食品中非法添加化学药物，为了达到效果一般都要加入至微量以上的水平，由表5看出，建立的液相色谱外标法定量方法，其检测限浓度均在1μg/ml以下的水平，完全满足含量测定的定量要求。

3.3 样品测定结果

图3 4批样品的TIC-VWD图

由图3看出，样品A及样品C在与对照品出峰的相同保留时间处未见色谱峰，判定为未检出所查的11种化合物。样品B出现2个与对照品保留时间相同的色谱峰，疑似检出2个对照品化合物。

图4 样品B的一级质谱图

由图4看出，样品B中的西地那非及他达拉非一级质谱图与对照品的一级质谱图一致，初步判定样品中检出上述2个化合物。

图5 对照品的二级质谱图

图6 样品B的二级质谱图

由图5、图6看出，样品B中的西地那非及他达拉非二级质谱图与对照品的二级质谱图一致，确证判定样品中检出上述2个化合物。

表6 4批样品定性检测结果

表7 样品B 所查化合物定量检测结果

4 讨论与结论

保健食品中违法添加的检测和查处，一直是保健食品分析检测的一项重要任务和有难度的工作。为了让保健食品具有标识的功效，不法生产企业会向产品中添加药用化学成分。为了准确的定性定量，本文采取了液质联用，同时定性定量检测的分析方法，快速高效。基于高通量检测的需要及考虑保健食品生产工艺的基本特点，本文从样品快速制备到准确分析检测整个过程作了有益的尝试，建立的方法符合食品检测法规的技术要求，测定了几批市场上的实际样品，结果准确可靠。

本方法对标识具有抗疲劳功效的保健食品非法添加西地那非类药物的分析检测具有参考意义，对保健食品中非法添加其他化学成份的分析检测提供一定的方法思路借鉴。

[1]陈安珍, 王尊文, 杨钊, 等. UPLC-MS/MS检测补肾壮阳类中成药及保健品中添加的化学药. 中成药, 2009,31(11): 1712-1714.

[2]邢俊波, 曹红, 张炯, 等. 高效液相色谱法同时测定补肾壮阳类中成药及保健食品中非法添加7 种化药成分. 时珍国医国药,2014,25(2): 451-453.

[3]高咏莉, 邬晓鸥, 肖丽和, 等. HPLC-MS/MS法测定补肾壮阳类药品或保健品中非法添加羟基豪莫西地那非的研究. 中成药,2009,31(7): 1058-1060.

[4]张翠英, 李振国, 徐金铃. UPLC/MS/MS法检测补肾壮阳类中成药中非法添加枸橼酸西地那非的定性定量研究. 中国卫生检验杂志, 2007,17(10): 1741-1743.

[5]来国防, 程宾. 补肾壮阳类中药制剂中非法添加化学药物成分的检测. 中国药业, 2010,19(22): 32-34.

[6]刘畅, 夏晶, 胡青, 等. LC/MS(n)法检测补肾壮阳类中成药和保健食品中非法添加5种性功能类化学药品. 中成药, 2009,31(9):1371-1374.