肺癌及其癌旁组织、良性病变survivin的表达意义

马建梅，陈 承，黄 伟(.西安医学院临床医学院，陕西西安 700;.陕西省西安市第一医院，陕西 西安 7000)

在我国，肺癌年发病率为35/100 000，成为我国的第一大癌症［1］，危害极大。但目前肺癌的发生发展机制尚不明确，研究表明，肿瘤细胞凋亡抑制可能是肺癌发生、发展的关键。survivin是细胞凋亡抑制蛋白家族的成员，主要表达于发育中的胚胎组织，在许多恶性肿瘤组织高表达，但在分化成熟的组织中一般不表达［2］。本研究通过检测肺癌、癌旁组织、良性病变中survivin表达，探讨survivin及其亚细胞定位表达与肺癌发生、发展、预后的关系。

1 材料与方法

1.1 临床资料 西安交通大学第二医院、西安医学院附属医院2008年5月—2011年5月手术获得的肺癌标本60例，其中年龄52～76岁，平均65.5岁;肿瘤最大径 2～9 cm，平均7 cm;鳞癌32例，腺癌28例;高分化癌16例，中分化癌25例，低分化癌19例;有淋巴结转移29例，无淋巴结转移31例;肿瘤分期 I期 26例，Ⅱ期21例，III期13例;患者既往均无肿瘤病史，术前均未行包括放、化疗在内的各种抗肿瘤治疗。癌旁组织15例，均为距离肿瘤≤2 cm的组织，良性病变10例，包括结核病变6例，炎性病变4例，正常肺组织5例。肺癌患者手术后均进行了随访，随访率100%，随访起始时间为手术治疗开始日起，观察终止时间为2012年12月31日。

1.2 主要试剂 兔抗人survivin单克隆抗体，免疫组化 SP试剂盒，DAB显色试剂盒均购自武汉博士德生物工程有限公司。

1.3 survivin的检测 石蜡包埋组织做4 μm厚切片，脱蜡、水化，微波抗原修复，血清封闭;一抗4℃孵育过夜，生物素标记的二抗室温孵育30 min，滴加辣根过氧化物酶标记的链霉素卵白素工作液30 min，DAB显色5～10 min，苏木精复染后脱水、透明、封片，光镜下观察。用 PBS代替一抗作为阴性对照，采用试剂盒内提供的阳性切片作为阳性对照。

1.4 结果判定 两名经验丰富的病理科医师阅片，免疫组化染色强度分为弱阳性、中等阳性、强阳性，分别计为1、2、3分;选取5个高倍镜(×400)视野，每个视野计数100个肿瘤细胞中阳性染色的细胞数，分为五个等级计分:0分，＜5%;1分，5% ～25%;2分，26% ～50%;3分，51% ～ 75%;4分，≥75%;以染色强度分值与阳性细胞数分值的乘积作为每一例的积分，积分为0者为表达阴性，积分≥1者为阳性。survivin阳性染色为胞质或胞核出现棕黄色颗粒。

1.5 统计学处理 采用SPSS 13.0软件进行统计学分析，survivin及胞质表达的相关数据采用χ2检验，生存率计算采用Kaplan-Meier法，影响生存率单因素分析采用Logrank检验，用Cox比例危险度模型作多因素预后分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

survivin阳性染色主要位于细胞质，部分位于胞核，部分胞质和胞核均出现表达。见图1。

2.1 survivin在肺癌、癌旁组织、良性病变、正常组织的表达 60例肺癌中survivin阳性率为81.6%(49/60)，15例癌旁组织为survivin阳性率为13.3%(2/15)，10例良性病变survivin阳性率为0(0/10)，5例正常组织survivin阳性率为0(0/5)，进行 χ2检验，χ2=22.7，P ＜0.05，有统计学差异，故survivin表达在肺癌组织高表达，癌旁组织低表达，良性病变及正常组织不表达。

2.2 survivin胞质表达与肺癌的关系 49例survivin表达阳性的肺癌组织中胞质阳性占69.4%(34/49)，胞核阳性为14.3%(7/49)，胞核胞质均阳性16.3%(8/49)(将胞核表达与胞核胞质均表达认为非单纯胞质表达，本文简称“阴性”)，胞质表达与肺癌特征的关系见表1。

2.3 survivin胞质表达与肺癌患者生存率的关系 随访结果显示:34例胞质表达阳性的肺癌患者中死亡20例，失访或存活14例，中位生存时间(26±5.64)个月、生存率41.18%;15例胞质表达阴性的患者中死亡10例，失访和存活5例，其中位生存时间(13±4.08)个月、生存率33.33%;Kaplan-Meier生存分析显示肺癌survivin胞质表达阴性患者的生存率低于胞质表达阳性者，log-rank检验χ2值=4.47，P=0.0346(P ＜0.05)，差异有统计学意义。见表2，图2。

2.4 肺癌患者预后的多因素分析 分析肺癌预后的单因素相关因子，结果显示:其与survivin胞质阳性表达、淋巴结转移，分期有关，多因素Cox回归分析结果显示:survivin胞质表达、淋巴结转移是反映肺癌预后的独立危险因素，其危险度分别为18.882、3.546，见表3。

表1 survivin胞质表达与肺癌的关系

表2 Survivin胞质表达在肺癌患者生存时间的比较

表3 肺癌预后多因素Cox分析

3 讨论

survivin是1997年由耶鲁大学的Ambzosini等用效应蛋白酶受体-1(effector cell report-1，ERP-1)的cDNA在人类基因库中筛选克隆出的基因。survivin基因定位于不稳定性较高的染色体17q25上，由4个外显子和3个内含子组成，基因全长15Kb，编码142个氨基酸的蛋白，表达于细胞周期的G2/M期，定位于细胞有丝分裂的纺锤体。survivin表达常见于胚胎发育过程，与细胞分裂和增殖密切相关，其表达有利于胚胎组织的内稳和分化［3］。survivin在成人组织的表达仅见于胸腺、睾丸、分泌期子宫内膜，但其特异地高表达于恶性肿瘤中，研究发现 34.5%的胃癌，70.7%的乳腺癌，77.8%的膀胱癌，85.5%的非小细胞肺癌中都有不同程度的survivin mRNA表达。可见，survivin与肿瘤关系密切，那么，其与癌旁组织或良性病变有何关系?国外有学者发现胰腺癌细胞中的survivin表达率显著高于胰腺良性肿瘤;国内方艳秋［4］研究表明survivin在肝癌组织、癌旁组织及正常肝组织表达阳性率分别为76.67%，15%，0，本试验对比了60例肺癌组织、15例癌旁组织、10例良性病变、5例正常肺组织的survivin表达，发现survivin在肺癌高表达，癌旁组织低表达，良性病变、正常组织未见表达;与相关报道相似，故推测survivin表达与肿瘤的发生有关，可作为一种新的肿瘤标志物反映肿瘤的恶性程度。

近年研究发现survivin具有不同的剪切异构体，不同的剪切异构体有独特的亚细胞定位和功能。免疫组化染色可以区分细胞中不同分布的survivin，而且只有细胞浆可以和P34结合，P34-cyclin B磷酸化survivin是 survivin发挥抑制凋亡作用所必须的［5］，细胞核内的 survivin由于不能被 P34磷酸化，所以不能发挥凋亡抑制作用，从而可能会诱导凋亡，因此survivin亚细胞定位与肿瘤有密切的关系。李永平［6］报道:在淋巴结转移阳性的乳腺癌原发灶组织中 survivin细胞浆内表达阳性较细胞核内表达阳性多;相对在未发生淋巴结转移的原发灶中，survivin主要表达在细胞核，且二者差异有统计学意义，而survivin在乳腺癌亚细胞定位与其它临床病理特征，如病理分级、雌激素受体表达情况或肿瘤大小，均无显著关系;本研究发现60例肺癌标本中，34例呈胞质(浆)表达，胞质(浆)表达与年龄、肿瘤大小、分期、分化、组织类型无关，与淋巴结转移有关，综上所述，survivin胞质表达阳性与淋巴结转移密切相关。国内姚红［7］报道侵袭转移是导致肺癌患者治疗失败和死亡的主要原因之一，因此，survivin胞质表达和淋巴结转移的相关性与肺癌预后有关。林辉［8］报道:肝细胞癌中survivin胞质表达阳性组的生存率明显低于阴性组，且多因素Cox回归分析提示survivin基因阳性表达是肝癌预后的独立危险因素。Yao［9］在survivin与胃癌的研究中，发现survivin分布于胞核和胞浆(质)中，而且分析表明，核内表达与较好预后有关，胞浆(质)阳性提示预后差;本试验检测survivin主要在胞质(浆)表达，对比胞质(浆)表达阳性与阴性(非单纯胞质表达者)者生存率，阴性者生存率低于阳性者，且差异有统计学意义，因此推测survivin胞质(浆)表达与肺癌预后有关，且进行Cox多因素分析显示:淋巴结转移和survivin胞质内表达是肺癌预后的独立危险因素。国内吴志德［10］报道肿瘤标志物可作为治疗效果及复发监测的指标之一。survivin及其胞内定位表达与肺癌治疗效果的关系将是本试验进一步深入研究的方向。

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