球孢白僵菌两种施用方式对侵染桔小实蝇的影响及田间的防治效果

潘志萍，李敦松，黄少华，曾 玲

(1.广东省昆虫研究所，广州 510260;2.广东省农业科学院植物保护研究所，广州 510640;3.华南农业大学昆虫生态研究室，广州 510642)

桔小实蝇Bactrocera dorsalis (Hendel)，又称东方实蝇，食性杂、寄主广泛，可为害芒果、柑桔、柚子、番石榴、杨桃等250 多种水果和蔬菜，是东南亚及太平洋地区主要果蔬害虫之一(Bateman，1972;Shukla and Prasad，1985;Vargas and Janmes，1990)。由于其幼虫蛀食瓜果果肉而导致果实变质腐烂，对热带、亚热带瓜果造成了严重的危害，被许多国家列为检疫性害虫(Southwood and Comins，1976)。目前桔小实蝇的防治仍是一个难题，许多受害水果均必须套袋才能有收成，因此寻找防控桔小实蝇新的有效途径迫在眉睫。

球孢白僵菌Beauveria bassiana Vuillemin 为一种重要的杀虫真菌，在害虫微生物防治的基础与应用研究中备受注目(Feng et al.，1994)。目前应用白僵菌防治桔小实蝇尚处研究的初步阶段(潘志萍等，2006;潘志萍等，2008;章玉苹等，2009)。尽管室内对球孢白僵菌B6 菌株对桔小实蝇成虫具有较强的致病力，对蛹与老熟幼虫也有明显的致病作用，但果园温、湿度条件与室内差异较大，成虫飞翔能力强，菌液一般较难直接喷施到虫体，而老熟幼虫在果园土表或落果化蛹，菌液未必能接触到蛹或老熟幼虫。因此，有必要对球孢白僵菌防治桔小实蝇的施菌方法和田间防效进一步的研究，以探索施菌的最佳时间、最佳施药方式和最佳方案。

1 材料与方法

1.1 供试虫源、菌种及试验地

从田间采集被桔小实蝇为害的杨桃、番石榴等果实，收集桔小实蝇幼虫，置于温度 (25±3)℃，相对湿度75%-90%，光周期12 L∶12D的室内养虫室用人工饲料饲养2 代后供试。

从蚊子上分离到的球孢白僵菌，由中国农业科学院农业环境与可持续发展研究所真菌农药创制实验室提供，经本研究用桔小实蝇成虫与蛹筛选确认该菌对桔小实蝇具有较高的致病力。

冰箱保存的试管斜面菌种，移至新鲜的SDAY斜面培养基上，在25℃、L∶D=8 h∶16 h 培养箱中培养10-15 d 后备用。

新鲜孢子粉的准备:新鲜培养的试管斜面孢子粉接种到广口瓶斜面SDAY 培养基上扩繁，在25℃、L∶D=8 h∶16 h 培养箱中培养后备用。

试验材料:将室外采回的河沙过筛、洗净后晾干，于150℃烘箱中消毒2 h，冷却后调节含水量为5%备用。

试验地:位于广东省博罗县石龙镇番石榴果园，面积约2000 m2，约有60-70 株番石榴果树，树高3-4 m。果树周围地面长有一些杂草，周围是连片的番石榴林。

1.2 方法

1.2.1 球孢白僵菌诱集侵染桔小实蝇成虫的方式比较

在40 cm×40 cm×40 cm 的养虫笼中引入30头羽化3-5 d 的成虫(♀∶=1∶1)，并做如下处理:

处理1:在饲料(酵母∶白糖=1∶3)中加适量的桔小实蝇性引诱剂和2mL 孢子悬浮液，混匀。

处理2:在饲料(酵母∶白糖=1∶3)中加入2 mL 孢子悬浮液，混匀。

CK:在饲料(酵母∶白糖=1∶3)中加入2 mL清水，混匀。

每个处理重复3 次，置于培养箱25± 1℃，RH ＞70%条件下培养，每5 d 更换一次饲料，记录，并将死虫移出进行保湿培养，以虫体表面长出菌丝为有效致死，观察20 d，统计死亡率。

1.2.2 三种施用方式侵染桔小实蝇幼虫的效果比较

将100 头的桔小实蝇老熟幼虫挑入盛有高度为5 cm 细沙的36 cm×50 cm 托盘中，采取以下方式进行处理:

处理1:喷施500 mL 1.2×108孢子/mL 的球孢白僵菌孢子悬浮液。

处理2:在细沙表面放置新鲜的表面长有菌丝的僵虫30 头，然后喷施500 mL 清水。

处理3:在细沙表面施用麦麸培养的白僵菌菌粉50 g，然后喷施500 mL 清水。

CK:喷施500 mL 清水。

处理完毕后覆盖上一层报纸，并喷施清水保湿，置于60 cm×80 cm 笼子中，置于室外自然变温为15-28℃中培养。每处理3 次重复。每天保湿，观察20 d，记录并统计各处理中的化蛹率、羽化率及成虫死亡率。

1.3 施用球孢白僵菌果园喷施效果调查

在果实挂果中后期，选取4 个处理区进行试验，每个小区选5 株果树，在每株树上按东、南、西、北、中五个方位随机选取生长较一致的30 个果实，进行挂牌，分别对小区做以下处理:

处理1:喷施浓度约2.0×108孢子/mL 球孢白僵菌孢子悬浮液进行防治，除了对树冠进行喷施外，还对果树周围的地面进行喷施，再覆盖干草进行保湿。

处理2:对树冠及周围进行喷施40%乐斯本2500 倍进行防治;

处理3:对树冠及周围进行喷施4.5%高效氯氰菊酯2500 倍进行防治;

对照区:对树冠及周围进行喷施清水。

处理后，每隔3 d 调查一次番石榴被害率，持续20 d。同时在果园四周离地面1.5 m 的地方挂诱集瓶10 个，每隔3 d 调查一次，监测桔小实蝇成虫种群动态。

1.4 评价方法与数据分析

采用简化后的干扰作用控制指数(Interference Index of Population Control，IIPC)作为评价指标。当IIPC＜1 时，表明施菌方式对桔小实蝇实验种群有一定的影响，影响作用的大小可以用IIPC 值的大小进行估计，IIPC 越小，表明对桔小实蝇实验种群的影响作用就越大;IIPC=1 时，表明与对照作用一致;IIPC ＞1 时，表明施菌方式对桔小实蝇实验种群有促进的作用。其计算方法如式(1)或式(2):

式(1)中N0tr、N0ck分别为处理及对照成虫起始卵量。

式(2)中I 为种群趋势指数，I'为受作用因式分解干扰i 后的种群趋势指数。

对于处理小区分别按下式公式计算防治效果:

2 结果与分析

2.1 球孢白僵菌不同施用方式对侵染桔小实蝇的影响

2.1.1 不同施菌方式球孢白僵菌侵染桔小实蝇成虫的效果

据表1 可知，在两种诱集感染方式处理下，桔小实蝇成虫存活率分别为40%、41.7%，但差异不显著，说明添加了性引诱剂在白僵菌侵染桔小实蝇的过程中并没有起到明显地促进地桔小实蝇感病的作用。IIPC 处于0.41-0.44，说明这两种诱集感染方式对桔实蝇成虫有一定的控制作用。

表1 两种施用方式球孢白僵菌侵染桔小实蝇成虫的效果Table 1 Infecting effect of B.bassiana to B.dorsalis adults at two types of spraying

2.1.2 不同施菌方式球孢白僵菌侵染桔小实蝇成虫的速效性比较

从桔小实蝇成虫被侵染到死亡时间来看，处理1 (饲料+性诱剂+白僵菌菌液)成虫发病的时间明显地比处理2 (饲料+白僵菌菌液)成虫发病时间提前(见图1)。也就是说性引诱剂有吸引桔小实蝇成虫取食的作用，并加速了白僵菌B6 菌株进入昆虫体内的时间，导致桔小实蝇成虫发病死亡，从而缩短了病程。

图1 不同施菌方式球孢白僵菌侵染桔小实蝇成虫的速效性比较Fig.1 Comparison of infecting speeds of Beauveria bassiana to Bactrocera dorsalis adults when two spraying methods used

2.1.3 三种施菌方式下球孢白僵菌侵染桔小实蝇幼虫的效果

除了处理1 与对照在化蛹率方面差异不显著，三种施菌方式在羽化率、成虫存活率方面与对照差异均显著(见表2)。因此可知，喷施孢子悬浮液、接入新鲜的僵虫与施用麦麸培养的菌粉这三种施菌方式均可明显地降低桔小实蝇种群的数量，减轻其为害，但处理组之间差异均不显著。

以IIPC 为评价指标，施菌方式对各因子的影响大小顺序为:成虫存活率 ＞羽化率＞化蛹率，其中以对成虫存活率的影响最大。

2.2 应用球孢白僵菌田间防治桔小实蝇的效果

从喷施球孢白僵菌B6 菌株的孢子悬浮液至试验结束的这段期间，温度变化范围为14.8-31.9℃，最低日均温16.5℃，最高日均温28.3℃，平均日均温21.9℃。从降雨情况看，共有10 个降雨日，其中日降雨不超过10 mm 的小雨日7 d，10-25 mm 中雨日2 d，25-50 mm 大雨日1 d，总降雨量为93.9 mm，日最大降雨量为26.5 mm，日均降雨量为4.7 mm，日均相对湿度为85.3%。

表2 三种施菌方式下球孢白僵菌侵染桔小实蝇幼虫的效果Table 2 Effect of three spaying ways on Beauveria bassiana in fection to Bactrocera dorsalis larvae

各处理的果实平均被害率随时间变化的观察值见表3 所示。在果实开始成熟的初期，各处理区的防治效果差异不明显，但随着时间的推移，各处理区的果实被害率明显地低于对照区，说明三种处理方法均对番石榴果园中桔小实蝇种群具有明显的控制作用。

用不同处理方法进行防治，取得的效果也明显不同。从表3 防治效果可知，效果最好的是用乐斯本进行喷雾防治的小区，持效期长，控制作用明显;其次是喷施球孢白僵菌孢子悬浮液与施用高效氯氰菊酯的小区。后两种处理防治情形相似，前期防治效果基本一致，但是随着时间的推移与雨水的冲刷，白僵菌防治的优点变得更为突出，防治效果时间更长。这说明在适宜的温、湿度条件下，桔小实蝇接触球孢白僵菌分生孢子后便能很快地侵入虫体，不易被雨水冲冼失效，从而保证了球孢白僵菌的防治效果。

表3 果园球孢白僵菌防治桔小实蝇的试验结果Table 3 Results of treatment on Beauveria bassiana control Bactrocera dorsalis in orchard

3 结论与讨论

对于实蝇类害虫来说，均有落地化蛹的习性。这时害虫处于静止期，是利用虫生真菌防治的理想时期。应用球孢白僵菌防治桔小实蝇，因幼虫为钻蛀为害，与释放菌株接触机会更多的是成虫或蛹，因此寻找适宜的球孢白僵菌施菌方式，合理地评价其对桔小实蝇田间防效是非常必要的。在白僵菌侵染寄主的影响因素中，温湿度是至关重要的(林华峰等，1999)。在田间施用白僵菌时，应充分地考虑到分生孢子易受温湿度、紫外线等因素的影响而失活。本试验中用麦麸培养的菌粉，孢子能在麦麸上保存一段时间，不易分解失活且有保湿的作用，加上雨水冲冼沉淀，使分生孢子容易接触到桔小实蝇的蛹，因此防治效果较好;在接入了新鲜的僵虫时，除了分生孢子能在僵虫体内存活一段时间外，僵虫还能不断地产生新的分生孢子，加上雨水冲冼沉淀在沙土中，也较易接触到在沙土中化蛹的桔小实蝇，但费时工作量大，不宜提倡田间使用。而直接喷施白僵菌孢子悬子浮液时，由于分生孢子直接裸露在大气中，易受温湿度、紫外线等因素的影响使孢子失活，因此，应采用适宜的保护剂如荧光素钠、七叶灵和小孽碱等，与适当的载体如滑石粉、高岭土、凹凸棒土、硅藻土等来增加孢子在环境中的稳定性，才能取得良好的防治效果。

球孢白僵菌分生孢子萌发和侵染的适宜温度为20-25℃，对其他环境条件的要求较高，如湿度较低，孢子不能正常萌发，致病效果较差;如果连续降雨或喷药后一次性较大的降雨也可直接影响白僵菌孢子粉的附着，降低田间防治效果(应盛华和冯明光，2001;许寿涛等，2002;濮小英等，2004)。本试验中，气温始终既适合桔小实蝇的繁衍，也适宜球孢白僵菌侵染，而且喷施球孢白僵菌孢子悬浮液后多为阴雨天气，有利于桔小实蝇感染发病，因而获得了较为理想的防治效果。尤其值得关注的是，本试验田间防治在完全自然的条件下进行，证实了使用球孢白僵菌防治桔小实蝇为害的可能性。广东省春季温度较高、水雨较多，是多种作物的生长季节和害虫的盛发季节，也正是最适合使用球孢白僵菌控制这些害虫的季节。

本试验结果表明白僵菌能在土壤保持较稳定的致病力，能侵染土壤中落地化蛹的桔小实蝇，这对尤其是具有土壤生活史的实蝇的控制具有重要的意义。因此，适宜的温湿度条件下，在桔小实蝇化蛹高峰期，适时施用白僵菌与高效低毒杀虫剂混用、轮用或与其它防治措施配合使用，有利于控制该虫发生。果园的小气候相对较稳定，喷施的白僵菌较容易定殖，不易散失，而且果园的环境条件可人为地创造，形成一个有利于白僵菌流行的环境，提高白僵菌可持续的防治效果。

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