E-钙黏蛋白在三阴性乳腺癌组织中的表达

孙 弢，姚宇锋，龚建平，秦建伟，唐金海

(1.滁州市第一人民医院普外科，安徽 滁州239000;2.江苏省肿瘤医院普外科，江苏 南京210009)

E-钙黏蛋白(E-cadherin，E-cad)是一种细胞黏附分子，具有维持组织结构的完整性等作用，其在乳腺癌组织中表达降低甚至缺失［1］，在肿瘤侵袭转移中发挥重要的作用［2］，作者回顾性分析本院经手术病理确诊的147 例三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer，TNBC)患者的临床病理资料，探讨E-cad 在TNBC 组织中的表达及其与临床病理特征和预后的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择我院2006年1月至2010年12月收治的TNBC 患者147 例，均为女性，中位年龄49(22 ～73)岁。所有患者均为初诊可手术患者并经术后病理确诊为浸润性乳腺癌，免疫组化检测确诊为ER、PR 和HER-2 的表达均为阴性。其中浸润性导管癌127 例，浸润性小叶癌12 例，其他类型8 例。术后病理学分期:I期81 例，Ⅱ期40 例，Ⅲ期26 例。所有病例术后均参照NCCN 指南进行规范化的化疗、放疗等综合治疗。

1.2 免疫组化染色 采用Envision 两步法完成免疫组化染色，检测ER、PR、HER-2 和E-cad 的表达情况。组织经体积分数10%甲醛固定、石蜡包埋，4 μm 连续切片，0.01 mmol·L-1枸橼酸盐(pH 6.0)抗原修复液中微波修复15 min，按试剂盒要求步骤进行操作。用已知阳性标本作为阳性对照，以PBS 代替一抗作为阴性对照。

1.3 结果判断 ER、PR 阳性定位于细胞核，E-cad、HER-2 阳性定位于细胞膜。阳性百分率采用计数估计半定量判断标准，即选取5 个不同高倍镜视野，计数500 个细胞，计算出其中阳性细胞数的百分率。ER、PR、E-cad 阳性细胞数≥10%为阳性，＜10%为阴性;HER-2 阳性细胞数＜10% 为(- )，10% ～25% 为(+)，26% ～50%为(++)，＞50%为(+++)，(-)和(+)为阴性，(++)和(+++)为阳性。

1.4 随访 所有患者接受定期随访复查，复查包括临床体检、肿瘤标志物检测、影像学检查等，随访至患者死亡或截至2011年12月，随访时间以月为单位。患者无病生存时间为手术日期至首次局部复发或远处转移确诊日期，总生存时间为手术日期至患者死亡日期。1.5 统计学处理 采用SPSS 13.0 进行统计分析，不同E-cad 表达组间临床病理资料比较采用χ2检验，生存曲线用寿命表法绘制，生存率间差异的比较用Wilcoxon 检验，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 E-cad 表达与临床病理特征的关系 147 例TNBC 中，E-cad 阳性表达率32%(47/147)，阴性表达率68%(100/147)。E-cad 表达与患者年龄、绝经状态、病理类型等因素无关(P ＞0.05)，而与肿块大小、组织学分级、淋巴结转移有关(P ＜0.05)。见表1。

2.2 E-cad 表达与患者预后的关系 所有病例均完成定期随访复查，截至2011年12月，中位随访时间为45(5 ～70)个月。寿命表法绘制生存曲线显示E-cad阴性表达组的5 a 无病生存率和5 a 总生存率分别为27%、61%，阳性表达组分别为65%、89%，2 组比较差异有统计学意义(P ＜0.05)。见图1、2。

3 讨论

TNBC 是ER、PR、HER-2 均阴性表达的乳腺癌亚型，在所有乳腺癌中占15% ～26%［3-4］。由于TNBC分化差、组织学分级高，因此临床上容易发生复发转移，预后不良［5］。目前TNBC 尚缺乏特异性的治疗靶点，不能从内分泌治疗及分子靶向治疗中获益，因此寻找有效的治疗靶点是TNBC 治疗的关键。

表1 E-cad 表达与临床病理特征的关系

图1 不同E-cad 表达TNBC 患者5 a 总生存曲线

E-cad 是一种细胞与细胞之间的钙调节黏附分子，在维持细胞上皮的正常结构、细胞增殖和侵袭中发挥重要的作用。既往研究［1-2］发现在约70%的原发性乳腺肿瘤中存在E-cad 的表达减少甚至缺失，E-cad下调是上皮间质化的标志，正是由于E-cad 的功能缺失导致细胞与细胞之间的黏附力下降，促使上皮间质化的发生，进而引起肿瘤转移。本文结果显示:在TNBC 组织中E-cad 的阳性表达率为32%(47/147)，阴性表达率68%(100/147)，存在较高的缺失表达，与文献［6-7］相符，说明E-cad 缺失在TNBC 的发展过程中具有重要作用。

图2 不同E-cad 表达TNBC 患者5 a 无病生存曲线

既往研究［8］发现，E-cad 水平的下降与乳腺癌的不良预后有关，但是其在TNBC 中的研究数据很少，且存在不同的结论。Kashiwagi 等［7］虽然没有发现E-cad的表达与TNBC 的临床病理特征之间关系，但是随访显示E-cad 缺失表达的患者具有较低的总生存率和较短的无病生存时间。作者发现在TNBC 中，E-cad 的缺失与不良预后相关因素有关，包括较大的肿瘤体积、较高的组织学分级、淋巴结转移等。在5 a 随访时间内，E-cad 阴性表达组的总生存率与无病生存率也显著低于E-cad 阳性表达组。

正是由于E-cad 在乳腺癌复发转移中的重要作用，重新恢复E-cad 的表达能够抑制肿瘤的侵袭转移。目前尚无针对E-cad 通路的特异性药物来诱导E-cad基因的表达，但是许多抗肿瘤药物能够通过各种机制上调E-cad 的表达，研究［9-10］显示阿霉素能够诱导乳腺癌细胞中E-cad 的表达，术前化疗也能增加E-cad的表达。雌激素受体拮抗剂三苯氧胺能上调E-cad 的表达，而雌二醇能下调E-cad 的表达［11-12］。因此在TNBC 中系统深入的研究E-cad 通路，研制特异性上调E-cad 表达的药物具有积极的意义。

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