HPLC法测定救心丸中人参皂苷Rg1的含量

曾艳 杨义平 王晓彬 何健 井文广

(华佗国药股份有限公司,安徽亳州 236803)

HPLC法测定救心丸中人参皂苷Rg1的含量

曾艳 杨义平 王晓彬 何健 井文广

(华佗国药股份有限公司,安徽亳州 236803)

目的:建立救心丸的中人参皂苷Rg1。方法:采用高效液相色谱法对人参皂苷Rg1进行了含量测定。结果:用高效液相色谱法对人参皂苷Rg1进行了含量测定,人参皂苷Rg1在0.17384～0.8692μg范围内与峰面积有良好线性关系,回归方程为Y=270985X-723.9(r=0.9996),平均回收率为100.7%,RSD=1.7%。结论:方法专属性强,重现性好,回收率良好,可有效控制救心丸的产品质量。

救心丸 HPLC 人参皂苷Rg1含量测定

救心丸收载于卫生部药品标准中药成方制剂第十九册,具有活血化瘀、化痰通络的功能,由八味名贵药材人工麝香、人工牛黄、珍珠、人参茎叶总皂苷、牛胆膏粉、冰片、蟾酥、三七膏粉组成。目前质量标准中尚无含量测定,仅有显微、理化鉴别,为更好的控制产品质量,本实验采用HPLC法对方中人参茎叶总皂苷、三七膏粉中人参皂苷Rg1进行了含量测定,能进一步控制产品质量。

1 试验仪器与材料

仪器:LC-10ADvp高效液相色谱仪(日本岛津)。依利特牌C18色谱柱(5μm,250mm×4.6mm ID);SCL-10Avp二极管阵列检测器;756CRT紫外分光光度仪(上海分析仪器厂)。

试药:人参皂苷Rg1对照品由中国食品药品检定研究院提供(批号110703-200726,供含量测定用);乙腈为色谱纯(国药集团化学试剂有限公司);水为二次蒸馏水;其余试剂为分析纯。

2 方法与结果

参茎叶总皂苷双阴性的空白制剂,制得阴性对照溶液,分别精密吸取阴性对照溶液、对照品溶液和供试品溶液注入液相色谱仪。结果阴性对照溶液中在人参皂苷Rg1色谱峰处无相应色谱峰出现,而供试品溶液中在人参皂苷Rg1峰处有峰出现,说明对人参皂苷Rg1的测定无干扰。

(3)对照品溶液的制备。精密称取置人参皂苷Rg1对照品适量置量瓶中,加甲醇适量,加甲醇制成每1ml含0.04mg的溶液,即得。

(4)供试品的处理方法。取供试品20粒,精密称定重量,研细,称取样品0.1g,置25ml量瓶中,加入甲醇适量,超声提取30分钟,放冷后用甲醇定容至刻度,摇匀。过滤,弃其初滤液,取其续滤液,即得。

(5)精密度考察。按所选定的供试品溶液的制备方法制备供试液,精密吸取同一供试品溶液10μl,重复进样5次,注入液相色谱仪,测定人参皂苷Rg1峰面积值,结果见表1。

(1)色谱条件的确定。以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈-0.05%磷酸溶液(20:80)为流动相;检测波长为203nm;理论板数按人参皂苷Rg1峰计算应不低于4000。

(2)阴性干扰性检查。按本制剂处方组成,制备不含三七膏粉,人

表1 精密度测定结果

表2 人参皂苷Rg1线性关系测定结果

表3 重复性试验结果

表4 稳定性试验结果

RSD=0.57%,结果表明精密度良好。

(6)线性关系考察。精密称取人参皂苷Rg1对照品11.12mg,置25ml容量瓶中,用甲醇定容至刻度,摇匀,精密吸取2.5ml,置25ml容量瓶中,用甲醇稀释并定容至刻度,摇匀(C对=0.04346mg/ml),分别精密吸取4、8、12、16、20、10μl注入液相色谱仪,测得的峰面积值见表2。

以峰面积值(Y)对进样量(X)进行回归,得标准曲线方程Y=270 985X-723.9,r=0.9996。以峰面积值(Y)对进样量(X)作图(见下图)。以上结果表明,在0.17～0.87μg范围内,人参皂苷Rg1峰面积值与进样量有良好的线性关系。

(7)重复性考察。按标准中的含量测定方法,取同一批样品6份,分别按照供试品溶液的制法制备供试液,按拟定的色谱条件测定人参皂苷Rg1的含量,结果见表3。

人参皂苷Rg1含量RSD=0.65%,结果表明重复性良好。

(8)稳定性考察。按所选定的供试品溶液的制备方法,制备供试品溶液,分别在0,2,4,8,12,24小时进样,测定供试品溶液中人参皂苷Rg1峰面积,结果见表4。

0-12h,RSD=0.54%。0-24h,RSD=2.47%。结果表明样品在12小时内稳定性良好,而在24小时内不稳定。

(9)加样回收率试验。取一批成品按所选定的供试品溶液的制备方法,制备供试品溶液。分别对照品溶液(C对=0.3139mg/ml)和供试品溶液注入液相色谱仪。测定人参皂苷Rg1的含量为16.3mg/g。取此批样品约0.05g,共6份,精密称定,分别在其中精密加入浓度为0.3139mg/ml人参皂苷Rg1对照品溶液2.0ml,挥干溶剂,按照供试品溶液的制备方法制备供试品溶液,照样品测定法测定人参皂苷Rg1的含量,以下列公式计算回收率,结果见表5。

图1

表6 中试样品中人参皂苷Rg1含量测定结果

结果表明,平均回收率为100.7%,RSD=1.17%,加样回收率良好。

(10)三批样品测定。按已确定含量测定的方法对三批样品人参皂苷Rg1的含量进行测定,结果见表6。

根据上述十批样品测定结果,建议确定救心丸人参皂苷Rg1含量(本品每粒含人参皂苷Rg1,不得少于0.25mg)。

[1] 卫生部药品标准中药成方制剂第十九册.33.

[2] 张成义,陈曦,李贺,等.消渴灵冲剂降糖作用的研究[J].北华大学学报:自热科学版,2007,8(2):154—7.

[3] 中国药典2010年版一部.2010:285-286.