复方盐酸左氧氟沙星滴眼液的稳定性试验研究

刘世萍，柳玉杰，郭美华，白建海，张新建，王琪（.哈尔滨医科大学附属第一医院药学部，哈尔滨5000；.哈尔滨市食品药品监督管理局，哈尔滨 5008；.哈尔滨医科大学附属第一医院眼科，哈尔滨5000）

稳定性试验研究是评价药品质量的主要内容之一，在药品的研究、开发和注册管理中占有重要地位。通过稳定性试验，考察药物在不同环境条件（如温度、湿度、光线等）下药品特性随时间变化的规律，以认识和预测药品的稳定趋势，为药品生产、包装、贮存、运输条件、有效期的确定提供科学依据[1]。复方盐酸左氧氟沙星滴眼液系由盐酸左氧氟沙星、地塞米松磷酸钠、盐酸萘甲唑啉3种成分以适当比例组方，并辅以氯化钠及注射用水而制成的眼用制剂，可用于结膜炎、角膜炎、泪囊炎、白内障术后感染等外眼感染。笔者采用高效液相色谱（HPLC）法测定该制剂中的3种主药含量，并对其在强光照射及高温、加速等条件下的稳定性进行了研究，方法灵敏、准确、重复性好。

1 材料

1.1 仪器

Waters 600 HPLC系统，包括2996 PDA检测器、717自动进样器（美国Waters公司）；SB3200型超声波仪（上海必能信超声有限公司）；AE200型电子天平[梅特勒-托利多仪器（上海）限公司]。

1.2 药品与试剂

盐酸左氧氟沙星对照品（批号：130455-201005，纯度：100%）、盐酸萘甲唑啉对照品（批号：100111-201104，纯度：99.2%）、地塞米松磷酸钠对照品（批号：100016-201015，纯度：100%）均来自中国食品药品检定研究院；盐酸左氧氟沙星原料药（江西大地制药有限责任公司，批号：120716-2，纯度：97.8%）；盐酸萘甲唑啉原料药（天津天成制药股份有限公司，批号：120308，纯度：99.7%）；地塞米松磷酸钠原料药（扬州制药有限公司，批号：DL20120039，纯度：99.2%）；复方盐酸左氧氟沙星滴眼液（哈尔滨医科大学附属第一医院自制，批号：20120529、20120530、20120531，规格：5 ml/瓶）；甲醇、乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 处方

盐酸左氧氟沙星原料药3 g，地塞米松磷酸钠原料药1 g，盐酸萘甲唑啉原料药0.25 g，氯化钠8.5 g，注射用水适量，制成1000 ml。

2.2 制备

称取处方量盐酸左氧氟沙星原料药，加适量注射用水使其溶解，然后分别取处方量地塞米松磷酸钠、盐酸萘甲唑啉原料药和氯化钠，加适量注射用水使其溶解后加入到上述溶液中，再加注射用水至全量，用G3过滤器过滤，无菌条件下灌封，即可。

2.3 性状

本品为淡黄色的澄明液体。

2.4 鉴别

在“2.6.1”项色谱条件下，供试品中3种主药的保留时间与对照品溶液中3种对照品主峰的保留时间分别一致。

2.5 检查

参照2010年版《中国药典》（二部）附录ⅠG眼用制剂[2]项下要求制订本品的检查项目，包括pH、渗透压摩尔浓度、可见异物及无菌等项，均按相关步骤及原则执行。

2.6 含量测定

2.6.1 色谱条件。色谱柱：Kromasil 100-5 C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：三乙胺溶液（取三乙胺7.5 ml，加水稀释至14000 ml，用磷酸调节pH至3.5±0.05）-甲醇-乙腈（50∶45∶5，V/V/V），流速：1.0 ml/min；检测波长：222 nm；柱温：25 ℃；进样量：10 μl。

2.6.2 溶液的配制。对照品溶液：取盐酸左氧氟沙星、盐酸萘甲唑啉及地塞米松磷酸钠对照品适量，精密称定，加流动相制成0.1243、0.0113、0.0405 mg/ml的混合对照品溶液，即得。供试品溶液：精密量取本品1 ml，置于25 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得。阴性供试品溶液：分别依次取处方量的除盐酸左氧氟沙星、盐酸萘甲唑啉、地塞米松磷酸钠外的其他成分，按照供试品溶液的制备方法分别制成阴性供试品溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ。

2.6.3 方法专属性。分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性供试品溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ各10 μl，进样。结果基线平稳，3种主药及杂质峰之间分离度良好（分离度分别为4.0、7.2），各组分之间测定无干扰，柱效高（以盐酸左氧氟沙星计理论板数为2500），峰形理想。

2.6.4 线性关系考察。取对照品溶液适量，过滤后进样，分别以自动进样器依次进样1、2、4、8、16、20 µl，记录峰面积。以峰面积响应值（y）为纵坐标、对照品进样量（x，µg）为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程：盐酸左氧氟沙星y＝5.27×106x－2.66×105（r＝0.99998），线性范围为0.1243～2.4860 μg；盐酸萘甲唑啉y＝2.47×107x－3.37×104（r＝0.99996），线性范围为0.0113～0.2260 μg；地塞米松磷酸钠y＝2.18×106x－2.52×104（r＝0.99995），线性范围为0.0113～0.2260 μg。

2.6.5 回收率试验。分别精密量取阴性供试品溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ适量，分成3组，每组3份，每份1 ml，置于25 ml量瓶中，分别精密加入高、中、低3个水平量的盐酸左氧氟沙星对照品（2.3908、2.9885、3.5862 mg）、盐酸萘甲唑啉对照品（0.2048、0.2560、0.3072 mg）及地塞米松磷酸钠对照品（0.8004、1.0005、1.2006 mg），按“2.6.2”项下方法制备供试品溶液，进样分析，计算回收率。结果3种主药平均回收率分别为99.22%（RSD＝0.72%，n＝9）、99.87%（RSD＝0.86%，n＝9）、100.02%（RSD＝0.91%，n＝9）。

2.6.6 精密度试验。取同一份对照品溶液和同一份供试品溶液适量，分别在“2.6.1”项色谱条件下连续进样6次，计算峰面积的RSD。结果3种主药RSD分别为0.14%和0.32%、0.21%和0.48%、0.45%和0.64%（n＝6），说明精密度良好。

2.6.7 稳定性试验。取同一份供试品溶液适量，分别于0、1、2、4、6、8、10 h进样测定，测定峰面积。结果RSD 分别为0.41%、0.52%和0.85%（n＝7），可见溶液10 h内稳定性良好。

2.6.8 重复性试验。取同一批样品，共6份，在“2.6.1”项色谱条件下测定供试品溶液和对照品溶液的峰面积，计算含量。结果3种主药的平均含量分别为：3.01 mg/ml（RSD＝0.38%，n＝6）、0.255 mg/ml（RSD＝0.47%，n＝6）和1.02 mg/ml（RSD＝0.53%，n＝6）。

2.7 稳定性试验研究

2.7.1 影响因素试验。（1）强光照射试验：取样品3批，置于密封洁净容器中，于（4500±500）lx的光照箱内考察10 d，分别于第5天及第10天取样，考察性状、3种主药含量等指标的变化，详见表1（表中，＊：表示淡黄色的澄明液体，＊＊：表示黄色的澄明液体，+：表示符合规定，以下表格同）。

由表1可知，在此条件下样品的性状发生了变化，颜色有所加深，3种主药的含量均呈下降趋势，但仍在合格范围内（应为标示量的90.0%～110.0%），有待进一步考察研究。同时提示，本品应选择深色包材，以求遮光。

（2）高温试验：取样品3批，置于密封洁净容器中，置于恒温培养箱中（40、60℃），考察10 d，分别于第5天及第10天取样，考察性状、3种主药含量等指标的变化，详见表2、表3。

表1 强光照射试验结果（n＝3）Tab 1Results of highlight exposure test（n＝3）

表2 高温试验结果（40℃，n＝3）Tab 2Results of high temperature test（40℃，n＝3）

表3 高温试验结果（60℃，n＝3）Tab 3Results of high temperature test（60℃，n＝3）

由表2、表3可知，在40、60℃的条件下各项指标无明显变化。

2.7.2 加速试验。取样品3批，不除去外包装，保持内包装的完整性及密封性，于温度（40±2）℃、相对湿度（75±5）%的条件下分别放置1、2、3、6个月，按时取样，考察性状、3种主药含量等指标的变化。结果各项指标基本稳定，详见表4。

2.7.3 长期试验。取样品3批，不除去外包装，保持内包装的完整性及密封性，于温度（25±2）℃、相对湿度（60±10）%的条件下放置12个月。分别于放置0、3、6、9、12个月时，按时取样，考察性状、3种主药含量等指标的变化。结果各项指标未见明显改变，详见表5。

3 讨论

根据研究目的和条件的不同，稳定性试验研究内容可分为影响因素试验、加速试验和长期试验等。影响因素试验是在剧烈条件下探讨药物的稳定性、了解影响其稳定性的因素及所含成分的变化情况，其为制剂处方设计、工艺筛选、包装材料和容器的选择、贮存条件的确定、有关物质的控制提供依据[1]，并为加速试验和长期试验应采用的温度和湿度等条件提供参考。其中，高湿度试验目的是考察供试品的吸湿潮解性能，以吸湿增重的百分比进行考察，因本品为液体制剂，所以未进行高湿度试验。在强光照射试验中，样品的性状发生了变化，颜色有所加深，3种主药的含量均呈下降趋势，但在合格范围内，有待进一步考察研究提示本品应选择深色包材，遮光保存。在高温试验中，40、60℃放置，本品各指标无明显变化，提示本品应在低于40℃温度下保存。

表4 加速试验结果（40℃，n＝3）Tab 4Results of accelerated test（40℃，n＝3）

表5 长期试验结果（n＝3）Tab 5Results of long-term test（n＝3）

加速试验目的是在较短的时间内，了解制剂的化学、物理和生物学方面的变化。本品的各项考察指标均无明显变化，说明本制剂的工艺及包装等设计合理，符合制剂稳定性的要求。

长期试验是在接近药品的实际贮存条件下进行的稳定性试验，为制订药物的有效期提供依据。在设计的包装条件下室温留样12个月，结果显示各项指标基本稳定，与加速试验结果一致。所以本包装能够保证本产品质量，结合考察结果，可将本品有效期暂定为1年。

本试验的标准曲线是用体积定量法（自动进样器）进行绘制的。与传统方法相比较，采用不同体积产生不同响应值的办法获得标准曲线，简化步骤，方便快捷；其所获得曲线的相关系数（r）更好，可达到0.9999以上，曲线标准差（s）更小，精密度更高，更准确。用新方法定量未知样品时，采用体积进样，可以根据需要灵活调整，不受限制。

综上，笔者参照文献[2-5]建立的主药含量测定方法，简便易行，方法灵敏、准确、重复性好。

[1]郭美华，张新建，马妍妍，等.安神益心液的稳定性考察[J].中国药师，2011，14（8）：1149.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典：二部[S].2010年版.北京：中国医药科技出版社，2010：附录9、10、44、75、76、103.

[3]闫瑾，刘美欣，张蕊，等.复方盐酸左氧氟沙星丁卡因滴眼液的制备及其质量控制[J].中国药房，2012，23（29）：2729.

[4]胡正波，李航.HPLC法测定盐酸左氧氟沙星氯化钠注射液的含量[J].中国药师，2008，11（1）：108.

[5]蔡佳玉，孙树茂，孟永春，等.HPLC测定微球中盐酸左氧氟沙星的含量[J].中国现代应用药学，2012，29（5）：437.