SOX2在脑胶质瘤组织中的表达及其与临床病理特征的关系

刘晓晗

(枣庄市立第四医院，山东枣庄277500)

脑胶质瘤是中枢神经系统最常见的原发性肿瘤，具有侵袭性生长、无控性增殖、易复发的特点［1，2］。其本质上是一种多基因异常疾病，通过原癌基因的过表达，同时伴随抑癌基因的突变缺失，从而使肿瘤细胞逃避正常生长的调控机制。以脑胶质瘤发生、发展相关基因为靶点的基因治疗已成为医学研究领域的热点［3］。SOX基因具有一个HMG-box基序保守区，SOX2属于其中B亚族中的一员，SOX2可能通过下调细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)及磷酸化Rb蛋白表达、上调p27蛋白表达，抑制胃癌上皮细胞增殖，导致细胞周期阻滞和细胞凋亡［4］。2013年10月，我们观察了60例脑胶质瘤患者瘤组织中SOX2基因及蛋白的表达情况，现分析结果，探讨其与脑胶质瘤临床病理特征及预后的关系。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2004年9月～2010年1月在我院手术治疗的脑胶质瘤患者60例，男32例，女28例，年龄17～73岁，平均42.3岁，肿瘤直径≤5 cm 44例，＞5 cm 16例。术中留取脑胶质瘤标本60例为脑胶质瘤组，相应瘤旁组织标本60例为对照组，组织标本经液氮速冻后 -80℃保存。按照WHO标准(2008年修改版)Ⅰ期18例，Ⅱ期22例，Ⅲ期12例，Ⅳ期8例。患者术前均未行放疗及化疗。本研究征得患者同意并签署知情同意书，经我院伦理委员会批准。

1.2 相关指标检测

1.2.1 SOX2 mRNA表达 采用 RT-PCR法。Trizol法提取细胞总RNA，合成cDNA。采用Oligo6.0软件设计引物及探针序列，引物、GAPDH及探针均由上海生工生物工程有限公司合成。20 μL反应体系包括Platinum Quantitative PCR SuperMix-UDG 10 μL、上下游引物各10 μmol/L、TaqMan 探针0.4 μL。PCR反应条件为50℃温育2 min，95℃预变性3 min，95 ℃ 变性 30 s、60 ℃ 1 min，共 40 个循环。△CT值为各样本中目的基因的CT值与管家基因GAPDH的CT值之差，计算SOX2 mRNA的相对表达量。

1.2.2 SOX2蛋白表达 采用Western blot法。制备4%浓缩胶和10%分离胶的聚丙烯酰胺垂直平板凝胶，40 μg总蛋白经80 V电压电泳3 h后，电转70 V 3 h转印至PVDF膜。TBS-T(pH 8.3)室温封闭1 h后加入兔抗人SOX2一抗，4℃平摇过夜，TBS-T洗膜6次后加入辣根过氧化物酶标记的抗兔二抗，室温孵育1 h，TBS-T洗膜6次，显色1～2 min，曝光X胶片。BIO-RAD ChemiDocXRS凝胶成像系统(BIO-RAD公司)照相并分析。

1.2.3 SOX2表达与脑胶质瘤患者临床病理特征及预后的关系分析 分析SOX2 mRNA表达与脑胶质瘤临床病理特征的关系。对患者进行5年以上随访，每3个月随访1次，以患者达到5年随访期或发生转移或死亡为终点，计算各组5年无病生存率(DFS)，设计受试者工作特征曲线(ROC曲线)，分析SOX2 mRNA表达与脑胶质瘤患者预后的关系。

1.3 统计学方法 采用SPSS16.0统计软件。基于ROC曲线，选择使敏感性和特异性同时达到最大的值作为SOX2 mRNA表达水平的阈值，分别将脑胶质瘤组织中SOX2 mRNA分为高表达组和低表达组。计量数据以±s表示，组间比较采用独立样本t检验，多组比较采用方差分析，计数资料采用χ2检验。Kaplan-Merier生存曲线分析SOX2 mRNA表达水平与患者5年DFS的关系，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 SOX2 mRNA及SOX2蛋白表达 脑胶质瘤组及对照组SOX2 mRNA相对表达量分别为4.47±0.08、2.16 ±0.04(P ＜0.02)，SOX 蛋白相对表达量分别为4.02 ±0.32、3.19 ±0.82(P ＜0.05)。

2.2 SOX2表达与脑胶质瘤临床病理特征的关系脑胶质瘤组病理分级为Ⅲ、Ⅳ级者SOX2 mRNA的表达高于Ⅱ期者，肿瘤直径＞2 cm者SOX2 mRNA表达高于直径≤2 cm者(P均＜0.05)。见表1。

表1 SOX2 mRNA表达与脑胶质瘤临床病理特征的关系［例(%)］

2.3 SOX2 mRNA表达与脑胶质瘤患者预后的关系Kaplan-Merier生存分析结果示SOX2 mRNA表达量与脑胶质瘤患者5年DFS相关，SOX2 mRNA高表达者5年DFS低于低表达者(P＜0.05)。见图1。

3 讨论

图1 SOX2 mRNA高表达与低表达者5年DFS比较

脑胶质瘤是一类具有高度异质性的肿瘤，组织形态学相同、临床分期相近的肿瘤，常具有不同的生物学行为及治疗敏感性。SOX2是维持干细胞自我更新的关键基因，参与广泛的发育调节［5］。SOX2与其他基因(如Oct-4、Nanog)共同调节胚胎干细胞的多潜能性，是多种胚胎干细胞管家基因的共同靶基因，与许多肿瘤的发生、发展有关［6，7］。研究发现，SOX2在中枢神经系统未成熟畸胎瘤组织中呈高表达［8］;SOX2在基底样表型的乳腺癌组织中高表达，是肿瘤干细胞的一种驱动蛋白，可促进肿瘤浸润和复发［9］。Tsukamoto 等［10］发现在胃癌等肿瘤中SOX2也呈高表达。Park等［11］报道SOX2在黏液腺癌及印戒细胞癌中呈高表达，而在非黏液腺癌和管状腺癌中很少表达。Done等［12］研究发现，小细胞肺癌患者血清中SOX2表达水平增高。在前列腺瘤细胞中SOX2的表达水平也高于正常细胞［13］。推测SOXS2是维持干细胞自我更新的关键因子之一，SOX2可能通过调节Wnt这一信号通路从而增强脑胶质瘤干细胞的功能，在肿瘤发生过程中发挥重要作用，但具体作用机制还需进一步研究证实。

本研究结果显示，SOX2 mRNA及其蛋白在脑胶质瘤组织中的表达显著高于瘤旁组织，且与患者的年龄、性别无关，而与肿瘤直径和病理分级有关，这与相关研究［13］结果一致，提示SOX2可能参与了脑胶质瘤的发生，是潜在的促癌基因。本研究结果还显示SOX2 mRNA表达量与脑胶质瘤患者5年DFS有关，且SOX2 mRNA高表达者5年DFS低于SOX2 mRNA低表达者，故认为脑胶质瘤组织中的SOX2 mRNA表达水平与患者预后有关，SOX2 mRNA可作为预后判断的候选肿瘤分子标记。

综上所述，SOX2在脑胶质瘤组织中高表达，SOX2 mRNA表达与肿瘤直径及病理分级有关，SOX2高表达者5年DFS较低。推测SOX2在脑胶质瘤的发生、发展中可能有潜在的促进作用。

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