儿童系统性红斑狼疮血清抗C1q抗体的检测及意义

尹芳蕊 庞春艳 白 力 王 馨 王永福

(包头医学院第一附属医院中心实验室，内蒙古包头014010)

系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，SLE)是全身结缔组织的自身免疫性疾病，遗传、体内激素水平的变化、环境等因素导致异常的免疫应答［1］，产生多种致病性自身抗体而引起组织和脏器损伤。儿童系统性红斑狼疮的发病率低，儿童占所有SLE患者的15% ～20%［2］，临床表现多种多样，有些患儿发病过程凶险，累及脏器的发生率更高，易误诊、漏诊，延误治疗。

随着免疫学的迅猛发展和先进实验手段的应用，风湿病学的实验室检查更加精准。标志性抗体的检测，为临床医生早期诊断疾病提供了有力证据。SLE患者血清中具有多种自身抗体，抗dsDNA抗体是SLE的标志性自身抗体之一。Clq是补体经典途径第一补体成分C1的一个亚基，是补体经典途径激活的始动因素，抗C1q抗体是针对C1q分子胶原样区的IgG型自身抗体，其与抗原结合，刺激机体免疫系统产生更多抗体，SLE活动时抗C1q抗体产生增多，最终由于形成免疫复合物，进而对人体重要脏器造成免疫性损伤。本研究探讨抗C1q抗体与儿童系统性红斑狼疮(SLE)的相关性及临床意义，为儿童SLE的早期诊断提供经验，观察其对儿童SLE的诊断价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料

1)SLE组(40例):均为包头医学院第一附属医院风湿免疫科2009年6月至2013年12月住院患儿，男6例，女34例，男女比例为1∶5.6;发病年龄3～18岁，平均年龄(14.77±2.80)岁。所有患者均符合1997年美国风湿病学会(American College of Rheumatology，ACR)修订的SLE诊断分类标准。2)健康对照组(20例):均来自同期医院体检的健康儿童，男10名，女10名，平均年龄(13.47±3.43)岁，两组性别、年龄比较，差异无统计学意义。

1.2 试剂与检测方法

抗dsDNA采用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)定量测定(上海科新生物技术股份有限公司)。测定步骤如下:用样本稀释缓冲液按1∶101的比例稀释。向已包被dsDNA的微孔板中加入稀释血清、质控血清、标准品，每孔加入100 μL，室温孵育30 min;冲洗3次后加入100 μL酶标记抗人IgG抗体，室温孵育30 min，再冲洗4次后加入100 μL底物显色剂，室温、避光孵育15 min;每孔加入50 μL终止液，在20 min内完成吸光度测定;测定主波长为450 nm，参考波长630 nm，并做标准曲线，求待测血清中抗dsDNA抗体浓度，参考试剂说明书:≥100 IU/mL为阳性。

抗C1q抗体检测采用酶联免疫吸附法来进行检测(Orgentec diagnostika GMBH公司，德国)，将样品稀释液进行1∶100的配比，稀释血清，在C1q酶标板上加进稀释血清、质控血清、标准品，每孔加入100 μL，在温室中孵育30 min，洗涤3次;加入酶标二抗，温室孵育15 min，洗涤3次，加入底物在温室黑暗处孵育15 min，加入终止液，测定波长为450 nm，参考试剂说明书:≥10 U/mL为抗C1q抗体阳性。

补体采用比浊法，抗核抗体(antinuclear antibody，ANA)、可提取性核抗原(extractable nuclear antigen，ENA)，包括 nRNP、Sm、Jo-1、抗 SSA 抗体、抗 SSB 抗体、scl-70检测试剂盒均购自德国欧蒙公司。

1.3 统计学方法

采用SPSS 13.0软件进行统计分析。定性资料用例数和百分数表示，组间比较采用χ2检验，定量资料用均数±标准差(±s)表示，组间比较采用独立样本t检验。采用敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值等诊断指标评价使用自身抗体诊断SLE的价值。采用Pearson线性相关系数描述自身抗体、SLE疾病活动指数、免疫学指标的相关性。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 SLE儿童血清抗C1q抗体检测的结果及其与抗dsDNA抗体和抗SM抗体敏感度、特异度的对比

40例SLE儿童抗C1q抗体阳性率为37.5%，而正常儿童组抗C1q抗体均为阴性，两组阳性率比较差异有统计学意义(χ2=8.1，P＜0.01)，抗C1q抗体对SLE儿童的诊断敏感度为37.5%，特异度为100%;抗dsDNA抗体对SLE儿童诊断的敏感度是62.5%，特异

度是95%;抗SM抗体对SLE儿童诊断的敏感度为22.5%，特异度是90%，详见表1～4。

2.2 抗C1q抗体与实验室免疫学指标的关系

抗C1q抗体阳性组的抗SM抗体、抗RNP抗体、抗SSA抗体、抗SSB抗体、补体C3、C4与抗C1q抗体阴性组比较，差异无统计学意义(P＞0.05);而抗ds-DNA抗体两组相比差异有统计学意义(χ2=5.98，P=0.02)，详见表5。

表1 抗C1q抗体在儿童SLE中的评价指标Tab.1 Diagnostic value of of C1q autoantibodies in children with SLE

表2 抗dsDNA抗体在儿童SLE中的敏感度和特异度Tab.2 Sensitivity and specificity of of dsDNA autoantibodies in children with SLE

表3 抗SM抗体在儿童SL中的的敏感度和特异度Tab.3 Sensitivity and specificity of of SM autoantibodies in children with SLE

表4 抗C1q抗体与抗dsDNA抗体和抗SM抗体在儿童SLE诊断中的评价指标比较Tab.4 Diagnostic value of anti-C1q antibodies in children with SLE compared with other autoantibodies

表5 抗C1q抗体与实验室指标的关系Tab.5 Associations of anti-C1q antibody with laboratory data in patients with SLE n(%)

2.3 抗C1q抗体与抗dsDNA抗体的相关性

40例SLE儿童的抗dsDNA抗体与抗C1q抗体采用Pearson进行相关分析，结果表明抗dsDNA抗体与抗C1q抗体呈正相关(r=0.51，P＜0.01)，详见图1。

图1 抗C1q抗体与抗dsDNA抗体的相关性Fig.1 Correlations of anti-C1q antibody with Anti-dsDNA antibody

3 讨论

儿童SLE中女性患儿发病率占绝对优势，但男性患儿比例明显高于成年人，提示青春发育期体内雌激素浓度较高，可能与内分泌因素的作用相关。本研究选取病例中男性6例，女性34例，男女比例为1∶5.6，与国内外文献报道［3-4］相符。目前抗核抗体(antinuclear antibody，ANA)、抗双链 DNA 抗体(antidouble strand DNA antibody)和抗SM抗体(antiSM antibody)是儿童SLE诊断的血清学指标，但临床上常可以见到抗dsDNA抗体和抗SM抗体阴性的SLE患儿。

C1q属于补体C1第一组分的第一个反应亚基，C1q在补体激活途径中发挥作用。1984年，Uwatoko等［5］在SLE患者的血清中发现抗C1q抗体，抗 C1q抗体发生抗原抗体反应的表位在 C1q分子的胶原区(college-like region，CLR)，CLR与抗 C1q抗体相结合，清除了免疫复合物障碍，使凋亡细胞的清除延缓，对机体的免疫系统进行刺激使其产生更多的抗体，是导致疾病活动的一项重要因素。目前国内外研究［5-11］表明，抗C1q抗体与成人的狼疮肾炎和其疾病活动度相关。儿童SLE的发病率较成年人低，有关的临床研究也相对较少。

本研究探讨抗C1q抗体检测在儿童SLE中的诊断价值。本研究发现SLE患儿的抗C1q抗体表达明显高于健康对照组患儿，两组阳性率比较，差异有统计学意义(χ2=8.1，P＜0.01)，抗C1q抗体对SLE患儿的诊断敏感度和特异度分别为37.5%、100%;抗C1q抗体特异度的结果与文献报道［12-14］相似。与抗dsDNA抗体和抗SM抗体相比，抗C1q抗体阳性率不理想，但特异度接近100%，因此联合检测抗C1q抗体有助于提高抗dsDNA抗体和抗SM抗体阴性的儿童SLE的诊断。

在实验室检查方面，发现抗C1q抗体阳性组与抗C1q抗体阴性组在补体 C3、C4、Anti-SSB、Anti-SSA、Anti-SM、Anti-nRNP等方面差异无统计学意义，但是与抗dsDNA抗体和疾病活动程度相关，提示抗C1q抗体可作为评价病情活动性指标之一，也提示SLE活动时抗C1q抗体产生增多，最终由于形成免疫复合物，进而人体重要脏器造成免疫性损伤，长期以来抗dsDNA抗体被认为是SLE最重要的抗体，但dsDNA并非是引起SLE的唯一免疫原。故诊断SLE时，抗C1q抗体的浓度水平是否也应作为参考指标，且其与病情活动的相关性值得关注［15-16］。C1q抗体水平与dsDNA抗体水平呈现正相关，联合检测抗C1q抗体和抗dsDNA抗体有助于医生掌握SLE病情发展。两组数据相互验证，可以有效降低漏诊率，对于SLE早期诊断、病情观察和临床治疗具有重要的指导作用。

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