HLC法测定芪蜂降糖胶囊中白杨素、高良姜素的含量

徐金凤 张洪娟

（黑龙江澳利达奈德制药有限公司·152400）

芪蜂降糖胶囊是在多年临床基础上开发而成的现代中药制剂，处方由黄芪、蜂胶、山茱萸、山药等十余味中药组成，其中蜂胶为主要药味，白杨素和高良姜素等黄酮类成分是蜂胶的主要活性成分[1]，也是蜂胶质量控制的主要指标之一[2][3]。收载于《中华人民共和国药典》蜂胶含量测定项下均以白杨素和高良姜素含量为指标，因此以该成分作为含量测定指标比较合理[4]，其研究内容报告如下：

1 白杨素、高良姜素含量测定方法

1.1 仪器与药品

岛津LC-2010CHT高效液相色谱仪；KQ-300DB型超声仪；十万分之一电子天平；恒温水浴。甲醇为色谱纯，其他试剂为分析纯，水为超纯水；白杨素、高良姜素对照品（含量测定用）购自中国药品生物制品检定所；药品：由黑龙江省中医医院制剂室提供。

1.2 色谱条件

DiamonsilC18（4.6mm×250mm5μm）色谱柱及同性能色谱柱；以甲醇—0.15%磷酸溶液（64：36）为流动相；流速0.8ml/min；检测波长268nm；柱温：25OC；理论板数按白杨素峰计算应不低于6000。

1.3 测定方法

对照品溶液的制备 取白杨素对照品、高良姜素对照品适量，精密称定，加甲醇分别制成每1ml含白杨素30μg、高良姜素20μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备 取本品内容物约0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量并用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法 分别精密吸取上述两种对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

2 白杨素、高良姜素含量测定方法学研究

方法学研究参照2010年版《中华人民共和国药典》一部附录ⅩⅧA中药品质量标准分析方法验证指导原则要求和文献资料设计，主要进行了方法的稳定性、准确度、精密度、专属性、线性、范围等研究内容。

2.1 供试品溶液的稳定性试验

取内容物混匀，约0.3g，精密称定，按指标性成分含量测定方下制备供试品溶液，每2h进样10μl，测定峰面积，经计算白杨素RSD=1.06%、高良姜素RSD=1.45%，表明被测溶液中白杨素、高良姜素两种成分在室温下12小时内测定结果稳定。

2.2 准确度试验

取已知含量的同批样品6份，精密称定，分别精密加入白杨素、高良姜素对照品适量，按供试品制备方法处理，测定白杨素、高良姜素含量，计算回收率，结果见表1、2。

表1 白杨素加样回收率结果

表2 高良姜素加样回收率结果

由表可见，白杨素加样回收率为102.91%，RSD=1.83%，高良姜素加样回收率为103.39%，RSD=1.38%，表明该方法测定结果准确。

2.3 精密度试验

2.3.1 重复性 精密吸取同批次供试品溶液10μl，按上述色谱条件测定，连续进样6次，测定峰面积，经计算白杨素RSD=0.96%，高良姜RSD=1.95%，表明精密度良好。

2.3.2 中间精密度 精密吸取同批次供试品溶液10μl，按上述色谱条件测定，用同一实验室Agelient1100型高效液相色谱仪（DAD检测器）连续进样6次，测定峰面积，经计算白杨素RSD=1.45%，高良姜素RSD=1.78%，表明精密度良好。

2.4 专属性试验

产品配方中去掉蜂胶按照产品的制备工艺制成不含蜂胶模拟样品，以下操作同供试品溶液制备方法得蜂胶空白对照液。按照指示性成分含量测定方法，分别吸取蜂胶空白对照液、供试品溶液及白杨素、高良姜素对照品溶液各进样10μl，测定结果表明，空白对照液色谱图在白杨素、高良姜素出峰位置上未见有吸收峰，说明空白无干扰。

2.5 线性

精密称取置五氧化二磷减压干燥器中干燥12小时以上的白杨素对照品8.35mg，高良姜素对照品5.90mg，置100ml容量瓶中，加入适量的甲醇使其溶解，加甲醇稀释至刻度，作为白杨素对照品高良姜素对照品储备液。分别精密吸取上述对照品溶液1、2、4、6、8ml于10ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，再吸取上述各对照品溶液10μl分别注入高效液相色谱仪，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标绘制标准曲线。白杨素 线性回归方程： Y=107325X+20629，r=0.9999高良姜素 线性回归方程：Y=57364X-870，r=0.9996

2.6 范围

通过精密度、准确度以及线性关系测定，结果表明：线性回归白杨素r=0.9999，高良姜素r=0.9996，白杨素在0.0835－0.6680μg之间，高良姜素在0.1180－0.5900μg之间均呈良好的线性关系，故确定两种成分含量按此测定方法白杨素在0.0835－0.6680μg之间，高良姜素在0.1180－0.5900μg之间范围内测定数据可靠。

2.7 成分指标值的确定：

三批中试产品指标性成分白杨素、高良姜素含量测定结果见表3。

表3 三批中试样品含量测定结果

指标性成分限量值的确定：白杨素和高良姜素指标值的确定是在三批中试样品实测数据的基础上适当下浮而得出的。根据测定数据规定本品每100g含白杨素不得少于0.53g,高良姜素不得少于0.50g。

3 讨论

人类对蜂胶的认识和应用有着十分悠久的历史，蜂胶的应用研究在我国开始于20世纪七十年代。蜂胶作为既食又药物品，至今已经有百余种各种剂型的产品上市，功效涵盖增强免疫力、辅助降血糖、辅助降血脂、抗疲劳、对胃粘膜辅助保护作用、抗突变、抗氧化等多种功能。收载于《中华人民共和国药典》2010年版一部，并明确指出蜂胶不能直接服用，需要经过炮制制成酒制蜂胶才可以服用，本产品以酒炙蜂胶入药。

本产品在质量标准研究中考虑，考虑由于目前国内外蜂胶市场混乱，重点进行了处方中蜂胶质量标准提高试验研究，采用高效液相色谱法建立了产品中指标性成分白杨素、高良姜素含量测定方法，方法简便可行，即可有效控制产品质量，又可以避免原料蜂胶的掺假和劣质蜂胶使用，因此对提高和控制产品质量具有一定的意义。

[1] 曹炜，符军放，索志荣,等.蜂胶中白杨素和高良姜素的HPLC分析[J].药物分析杂志，2007，27（4）：522-524.

[2] 王欢，胡红刚，黄小键.HPLC法测定蜂胶片中两种有效成分的含量[J].江西中医药，2008，139（12）：79.

[3] 宋爱清，刘杰.HPLC法测定蜂胶中黄酮类化合物的含量[J].中国养蜂，2001，52（3）：10-11.

[4] 国家药典委员会编，中国医药科技出版社出版，《中华人民共和国药典》2010年版一部