血清TGF-β1和EGF检测对创伤性骨折愈合的影响

王磊，孙俊英

(1.苏州市立医院普外科;2.苏州大学第一附属医院骨科，江苏 苏州 215007)

骨折在日常生活中很常见，对患者的身体健康危害很大，严重影响患者的正常生活和工作，对于骨折，医生及患者最为关心的问题就是骨折的愈合［1］，而众多临床实践表明，骨折的愈合与多种因素有关［2-3］，血清TGF-β1 和EGF 水平是两种重要的血清标记物，本文对比观察了这两种血清学标志物在不同程度创伤性骨折中的表达，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

研究对象为2010 年7 月至2011 年7 月我院收治的38 例创伤性骨折患者(观察组)，将同期26例健康体检者设为对照组。观察组(38 例):男27 例，女11 例;年龄26～64 岁，平均年龄为(47.32 ±12.18)岁;上肢骨折24 例、下肢骨折14 例。对照组(26 例):男18 例，女8 例;年龄27～65 岁，平均年龄为(48.07 ±10.11)岁。

1.2 方法

观察组患者入院后根据骨折种类，分别行切开复位内固定手术。分别在入院时和骨折切开复位内固定手术后2 w，外周静脉采血检测。根据标本的要求选择EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂采集血浆样本，混合10～20 min 后，离心20 min 左右(2 000～3 000 转/分)。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA 法。实验原理为用抗人TGF-β1 (或EGF)单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的TGF-β1 (或EGF)与单抗结合，加入生物素化的抗人TGF-β1 (或EGF)，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin 与生物素结合，加入底物工作液显蓝色，最后加终止液硫酸，在450 nm 处测OD 值，TGF-β1 (或EGF)浓度与OD 值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中TGF-β1 (或EGF)浓度。

1.3 统计学分析

数据采用SPSS 统计软件对数据进行分析。治疗前后的比较采用配对资料的t 检验，两组间比较采用两独立样本的t 检验。

2 结 果

2.1 两组患者一般资料比较

两组患者在性别、年龄等方面无统计学差异，具有可比性(P ＞0.05)，结果见表1。

表1 两组患者一般资料比较

2.2 两组患者血清TGF-β1 及EGF 水平的比较。

观察组治疗前血清TGF-β1 及EGF 水平显著高于对照组(P ＜0.05);而治疗后，血清TGF-β1 及EGF 水平显著低于术前水平(P ＜0.05)，与对照组相比无显著差异(P ＞0.05)，结果见表2和表3。

表2 观察组治疗前后血清TGF-β1 及EGF 水平的比较

表3 两组血清TGF-β1 及EGF 水平的比较

3 讨 论

近年来，随着工业、农业和交通运输业的迅速发展，各种事故不断增多，创伤后发生骨折者非常多，特别是交通事故，常造成严重的开放性骨折，再加上内固定手术的开展，发生感染的机会的增多，导致创伤性骨折患者易并发创伤性骨髓炎，成为临床较为棘手的问题。然而骨折的愈合是需要一定时间的，并不会立竿见影。临床上将骨折的愈合分为4 期:(1)血肿机化期:骨折以后，骨膜、骨质和骨髓等组织损伤或断裂，同时损伤了骨骼周围的小血管，引起血管破裂、出血，形成血肿。伤后4～5 h，骨折部位血液开始凝固，形成含有网状纤维素的血凝块。骨折处的成纤维细胞、毛细血管等受到血肿的刺激而再生，且自骨折处生长深入血肿内，坏死组织及血凝块受到侵入，继而消除积血，肉芽组织增生，进而生成纤维组织，最终纤维愈合。这个过程叫血肿机化期，这一时期约2～3 w 完成;(2)骨痂形成期:在骨的表面有一层骨膜，它对骨的再生和生长有非常重要的作用。在骨折后1 w，骨膜内的成骨细胞开始大量分裂增生，形成新生骨，并从骨折两端沿着血肿机化后变成纤维组织，最后两端连接一起，将纤维组织变成骨组织。这一阶段大约在骨折后1 w 开始，4～6 w 完成。此时断裂的骨头被新生骨组织连接在一起，虽不会移位，但仍不能持重，否则容易发生成角变形;(3)骨性愈合期:骨痂内的新生骨小梁逐渐增加，骨折间隙的桥梁骨痂完全骨化，这就是愈合期。约在骨折后8～12 w，X 线片上显示骨折线消失，骨闸密度增加，髓腔为骨痂所充填，骨痂与皮质的界限已不清。此时骨折端之间已形成骨连接，外力作用时骨折部不再变形，故够负重活动;(4)塑形期:骨折治疗骨折的愈合过程中和愈合中的一定时期内，都通过成骨和破骨过程进行塑形。最后在形态和结构上恢复或接近和恢复到和正常骨一样。至此，骨折愈合过程方可完全结束。

而在整个骨折愈合过程中，血肿机化期尤为重要，此期骨折端坏死的骨细胞、成骨细胞以及被吸收的骨基质均向周围释放内源性生长因子，如胰岛素生长因子I、Ⅱ(IGF-I、IGF-Ⅱ)、血小板衍生生长因子(PDGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、内皮细胞生长因子(EGF)［4-9］、转化生长因子(TGF-β)［10-11］等，在炎症期刺激间充质细胞聚集、增殖及血管增生，并向成骨细胞转化。肉芽组织内成纤维细胞合成和分泌大量胶原纤维，转化为纤维结缔组织，使骨折两端连接起来，称为纤维连结。这一过程约在骨折后2 w 完成。同时，骨折端附近骨外膜的成骨细胞伤后不久即活跃增生，1 w 后即开始形成与骨干平行的骨样组织，并逐渐延伸增厚。骨内膜在稍晚时也发生同样改变。可见，各类内源性生长因子在病情演变及骨折愈合过程中起到至关重要的作用。

我们的研究发现创伤性骨折患者的血清TGFβ1 和EGF 水平显著高于正常人(P ＜0.05)，且治疗后血清TGF-β1 和EGF 水平显著下降(P ＜0.05)，接近正常水平。可见，血清TGF-β1 和EGF 在骨折愈合和重塑过程中起着十分重要的作用，如文献所叙述，此类生长因子在成骨细胞的增殖、分化、蛋白合成中发挥重要的调控作用，通过其各自的机制，始终严格调控着骨吸收和骨形成之间的平衡，它们共同作用刺激骨细胞的活性，参与调节骨修复和重塑的一系列过程，因此，它们水平的变化正可以有效反映创伤性骨折的严重情况及愈合情况，是创伤性骨折患者有效的监测指标，值得临床上推广应用。

［1］周远辉，唐向阳，吴定宇.骨折合并脑外伤患者血清中TGF-β1 含量分析［J］.中国临床实用医学，2010，4:119-120.

［2］傅捷.2 种固定方法治疗胫腓骨骨折对转化生长因子-β-1表达影响及疗效比较［J］.重庆医科大学学报，2010，35(7):1098-1100.

［3］张杰，李冀.香丹骨折端注射促进骨痂生长过程中TGF-β、bFGF 的表达及骨密度实验研究［J］.中国中医药咨讯，2012，4 (1):9-11.

［4］孔庆利，李明，孟令强，等.表皮生长因子含量表达与骨折愈合的关系［J］.中国组织工程研究与临床康复，2007，11(2):247-248.

［5］艾春芳，齐斌.细胞因子EGF 含量表达与骨折修复相关性的研究［J］.中国厂矿医学，2001，14 (4):270-271.

［6］李汉俊，黄志坚，张洪伟.创伤性骨折患者血清EGF 含量变化的临床观察［J］.放射免疫学杂志，2008，21 (2):123-124.

［7］熊辉，李前，谈立明，等.桃红四物汤有效成分的交互作用及其对骨痂VEGF 蛋白表达的影响［J］.中医正骨，2010，22 (8):13-15.

［8］李中锋，蒲建中，程卫东，等.骨健颗粒促进骨折早期愈合中对VEGF、NOS 及ALP 的影响［J］.中药药理与临床，2011，27 (6):82-85.

［9］刘国清，杨胜，赵亮.按骨灵胶囊对大鼠早期桡骨骨折愈合及VEGF 表达的影响［J］.中华实用中西医杂志，2010，2:44-45.

［10］万秋红，杨歧生.TGF-β 超家族信号传导机制的研究进展［J］.国外医学分子生物学分册，2000，22 (3):137-142.

［11］陆明，王玉玘.创伤性骨折患者治疗前后血清TGF-β1 和EGF 检测的临床意义［J］.放射免疫学杂志，2011，24(6):628-662.