环氧化酶2基因多态性和口腔癌危险性关系研究

蓝旭华+陈宁+樊彤海

[摘要] 目的 本文旨在研究环氧化酶2（COX-2）基因多态性与口腔癌发生风险的相关性。 方法 选取我院口腔中心2010年6月～2013年8月收治的56例口腔癌患者作为病例组，并按照1∶2的比例选取112例无口腔疾病研究对象作为对照组，应用聚合酶链反应限制性片段长度多态性技术测定COX-2基因多态性，并采用多因素Logistic回归分析。 结果 -1195A>G位点基因频率在病例组中分别为AA（27.27%）、AG（54.55%）、GG（18.18%），对照组分别为AA（21.82%）、AG（63.44%）、GG（14.55%），两组基因分布差异无统计学意义（P=0.341）。-765G>C位点基因频率在病例组中分别为GG（88.68%）、GC（11.32%）、CC（0），对照组分别为GG（93.33%）、GC（6.67%）、CC（0），两组基因分布差异无统计学意义（P=0.707）。8473T>C位点基因频率在病例组中分别为TT（68.63%）、CC（27.45%）、TC（3.92%），对照中分别为TT（60.75%）、CC（29.91%）、TC（9.35%），两组基因分布差异无统计学意义（P=0.539）。1795G>A位点基因频率在病例组中分别为GG（94.44%）、GA（5.56%）、AA（0%），对照中分别为GG（92.59%）、GA（7.41%）、AA（0），两组基因分布差异无统计学意义（P=0.104）。 结论 本研究结果显示，SNP基因位点-1195A>G、-765G>C、8473T>C、1795G>A位点的各种基因型改变与口腔癌的发生易感性之间不存在显著的统计学联系。

[关键词] 环氧化酶2；基因多态性；口腔癌；风险

[中图分类号] R739.8 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2014）32-0005-04

Study on the risk relationship between cyclooxygenase 2 gene polymorphism and oral cancer

LAN Xuhua1 CHEN Ning2 FAN Tonghai1

1.Department of Stomatology， Lishui People's Hospital in Zhejiang Province， Lishui 323000， China； 2.Department of Stomatology， the Affiliated Stomatological Hospital of Nanjing Medical University， Nanjing 210029， China

[Abstract] Objective To study the risk relationship between cyclooxygenase 2（COX-2） gene polymorphism and the oral cancer. Methods Selected 56 cases of oral cancer patients in our hospital from 2010 June to 2013 August center of Stomatology Hospital as the case group， and according to the ratio of 1∶2 to select 112 cases of no study of oral diseases as control group， used polymerase chain reaction restriction fragment length polymorphismtechnique for determination of COX-2 gene polymorphism， and the multi factors logistic regression analysis. Results Gene frequency of -1195A>G in case group were AA （27.27%）， AG（54.55%）， GG （18.18%）， respectively in control group of AA controls （21.82%）， AG（63.44%）， GG （14.55%）， the differences of gene distribution between the two groups were not significant （P=0.341）. Gene frequency of -765G>C in case group were GG （88.68%）， GC（11.32%）， CC （0）， respectively GG （93.33%）， GC （6.67%）， CC（0）， the differences of gene distribution between the two groups were not significant（P=0.707）. Gene frequency of 8473T>C in case groupwere TT （68.63%）， CC （27.45%）， TC （3.92%）， respectively TT（60.75%）， CC （29.91%）， TC （9.35%）， the differences of gene distribution between the two groups were not significant （P=0.539）. Gene frequency of 1795G>A in case group were GG （94.44%）， GA （5.56%）， AA （0%）， respectively GG（92.59%）， GA （7.41%）， AA （0）， the differences of gene distribution between the two groups were not significant （P=0.104）. Conclusion The results of this study show there is no significant correlation between susceptibility gene change of oral cancer and SNP gene loci -1195A>G，-765G>C， 8473T>C， 1795G>A loci.

[Key words] Cyclooxygenase 2； Gene polymorphism； Oral cancer； Risk

口腔癌特指发病于口腔内的恶性肿瘤，具体而言可分为牙龈癌、软硬腭癌、颌骨癌、唇癌、舌癌、口咽癌、涎腺癌、口底癌以及上颌窦癌等。多数口腔癌为鳞状上皮细胞癌，其发病机制可能与遗传因素及环境因素有关。环氧化酶2（COX-2）是花生四烯酸内的限速酶环氧化酶（COX）的一个亚型，COX-2过表达是肿瘤进一步发展的重要因素[1]。已有研究证实，COX-2在肠癌、肺癌、皮肤鳞状细胞癌中存在过表达情况，但其在口腔癌中的表达规律研究较少。因此，笔者选取我院口腔中心2010年6月～2013年8月收治的56例口腔癌患者进行如下研究，旨在探讨COX-2基因多态性与口腔癌发生风险的相关性。

1资料与方法

1.1一般资料

选取我院口腔中心2010年6月～2013年8月收治的56例口腔癌患者及112例无口腔疾病研究对象作为对照组。纳入标准：①口腔癌患者的确诊由临床医生检查与组织病理学检查相结合；②对照组的研究人群为经过临床体检的健康人群。排除标准：参加本次研究前接受过相关放疗或化疗的口腔癌患者。所有患者均签订知情同意书后开始本次研究。

本次研究共纳入168例研究对象，其中病例组患者56例，男 41例、女 15例，年龄44～68岁，平均 （54.8±7.3）岁；对照组112例，男 78例、女 34例，年龄48～71岁，平均（56.4±5.7）岁；两组研究对象的一般资料差异不具有统计学意义（P>0.05），见表1。

表1 两组研究对象一般资料比较

1.2试剂与仪器

试剂如下：选用广东西陇化工有限公司生产的NaCl及NaAc试剂盒；选用大连TaKaRa生物公司生产的2×Premix Ex Taq酶套、限制性内切酶及DNAMarker；选用德国Sigma 公司生产的蛋白酶K；选用南京骥骜生物技术公司生产的TaqMan引物。

仪器如下：选用德国eppendorf公司生产的Eppendorf AG 22331 型PCR扩增仪；选用美国Bio-Rad公司生产的Bio-Rad Douerpae 电泳仪；选用美国ABI公司生产的7900荧光定量PCR仪及孔板高透过光度盖膜；选用美国AxyGen公司生产的光学384孔反应板。

1.3试验方法

取患者2 mL血标本，根据DNAMarker试剂盒说明书提取外周血细胞内的基因组DNA。选用限制性酶切片段长度分析法检测COX-2基因765G>C多态性。对所提取的DNA进行PCR扩增，上游引物设计为：5-CCGCT-TCCTTTGTCCATCAG-3；下游引物设计为：5-GGCTG-TATATCTGCTCTATATGC-3。扩增条件如下：于94℃下行预变性1 min，于94℃环境下循环30 s，之后于62℃环境下过度30 s，72℃环境下完善30 s，共循环35次，最后于72℃环境中延伸1 min，即得到PCR扩增产物。选用限制性内切酶对扩增产物进行酶切反应，并水浴、电泳，电泳完毕即行拍照操作，根据照片结果确定基因型。

1.4调查方法

采用统一设计的调查表进行流行病学问卷调查，调查内容主要包括：患者的一般资料（年龄、性别）、吸烟情况、饮酒情况、肿瘤部位及病理类型。数据调查完整后录入Epidata，整理后导入SPSS10.0中进行统计分析。

1.5 统计学方法

所有数据在SPSS 10.0软件中进行统计学分析。计量资料以（x±s）表示，采用两样本独立t检验、危险因素的分析采用多因素Logistic回归分析，检验水准取α=0.05。

2结果

对COX-2的基因多态性研究中，共纳入4个SNP基因位点：-1195A>G、-765G>C、8473T>C、1795G>A位点的各种基因型在病例组和对照组中的分布情况见表1。-1195A>G位点基因频率在病例组中分别为AA（27.27%）、AG（54.55%）、GG（18.18%），对照组中分别为AA（21.82%）、AG（63.44%）、GG（14.55%），两组基因分布差异无统计学意义（P=0.341）。

-765G>C位点基因频率在病例组中分别为GG（88.68%）、GC（11.32%）、CC（0），对照组中分别为GG（93.33%）、GC（6.67%）、CC（0），两组基因分布差异无统计学意义（P=0.707）。

8473T>C位点基因频率在病例组中分别为TT（68.63%）、CC（27.45%）、TC（3.92%），对照组中分别为TT（60.75%）、CC（29.91%）、TC（9.35%），两组基因分布差异无统计学意义（P=0.539）。

1795G>A位点基因频率在病例组中分别为GG（94.44%）、GA（5.56%）、AA（0），对照组中分别为GG（92.59%）、GA（7.41%）、AA（0），两组基因分布差异无统计学意义（P=0.104）。COX-2基因多态性的四个基因位点各种基因型在病例组和对照组中的分布情况见表2。

3 讨论

口腔癌发病因素主要表现为：长期嗜烟、酒，口腔卫生较差，牙根、尖锐牙尖、不匹配的假牙长期刺激，营养不良，长期口腔溃疡等。早期口腔癌患者无明显症状，随着疾病发展，患者将出现肿块、结节、白色鳞状斑块、溃疡、炎症等，部分患者将出现口齿不清、吞咽困难症状，严重影响患者生活质量[2]。吸烟作为口腔癌的重要危险因素，患者将吸入大量的氧自由基，氧自由基可与细胞内的靶分子相互作用，并导致靶细胞损伤，损伤的靶细胞氧化还原电势将被干扰，其核酸及DNA链也将被氧自由基攻击，最终DNA链出现断链及碱基修饰情况，此时癌基因将逐步显露，细胞周期开始突变，最终癌变[3]。环氧化酶2（COX-2）被称为管家酶或要素酶，是前列腺素（PGs）合成所必须的酶，该物质主要分布于血管、肾、胃组织内，是上述细胞癌变中的重要参与物质，正常情况下COX-2并无活性，而在某些因子的刺激下，COX-2可快速激活，激活后的COX-2可诱使细胞黏附，抑制细胞凋亡，加速癌细胞的增殖及转录[4]。COX-2定位于人类1号染色体长臂上，其长为8.3kb，共存有10个外显子。已有研究证实，COX-2基因-765G/C与哮喘、胃癌、结肠癌、食管癌等疾病存在极大相关性[5]。而颈动脉中层厚度及纤维蛋白原、C-反应蛋白和白细胞介素-6等炎症标志物与COX-2基因-765G/C多态性存在明显相关性[6]。无症状高血脂的-765C基因携带患者其COX-2表达显著较低，患者亚临床动脉粥样硬化及全身性炎症反应率显著下降，提示C等位基因具有较强的动脉粥样硬化保护及抗炎作用[7]。而炎性反应是口腔癌的重要标志及结果，炎性病变可增强多形核嗜中性白细胞和其他吞噬细胞内氧自由基O2及H2O2的活性，这将导致抗氧化酶结构损伤，DNA链进一步断裂，机体自由基清除能力下降，脂质过氧化产物增加并参与到肿瘤的发生和发展中[8]。

本次研究中，两组患者AA、AG、GG中的-1195A>G位点基因频率近似；而GG、GC、CC中-765G>C位点基因出现频率也无明显差异。此外，两组患者TT、CC、TC内的8473T>C位点基因出现频率及GG、GA、AA内的1795G>A位点基因出现频率也无明显差异，这表明SNP基因位点-1195A>G、-765G>C、8473T>C、1795G>A位点的各种基因型改变与口腔癌的发生易感性之间无明显相关性。欧洲学者研究发现，东欧人群8473T>C位点内的T-C碱基变化与口腔癌、喉癌、咽癌也无明显相关性[9]，与本次研究结论近似。但是需要注意的是，不同人群的同一SNP位点的等位基因变化情况不同，其头颈部肿瘤发病风险也不同[10]。因此，我们认为口腔癌发病率与患者种族人群遗传背景、致癌因素暴露程度等相关，也与研究人员研究方案、实验基因分型、研究样本基数及未知因素影响等相关。

综上所述，口腔癌易感性受多因素影响，但与SNP基因位点-1195A>G、-765G>C、8473T>C、1795G>A位点的各种基因型改变无明显相关性。

[参考文献]

[1] 闫怡轩，李伟忠. 塞来昔布提高耐长春新碱细胞株KB/VCR细胞化疗敏感性的研究[J]. 华西口腔医学杂志， 2013， 31（4）：403-407.

[2] 廖汶晓，闫怡轩，黄艳青，等. 塞来昔布增强口腔癌化疗敏感性与阻滞周期进程的相关性[J]. 南方医科大学学报，2013，33（6）：885-888.

[3] 刘宇，黄楷，杨辞秋，等. 动脉粥样硬化组织中环氧化酶-2的表达以及选择性环氧化酶-2抑制剂塞来昔布对人血管平滑肌细胞增殖与凋亡的作用[J]. 中华实验外科杂志，2013，30（10）：2088-2091.

[4] 王晓波，赵志宇，张玉芹，等. 环氧化酶2和Ki-67在口腔鳞状细胞癌中的表达及相关性研究[J]. 中国医药，2012， 7（8）：1036-1038.

[5] Hema L，Ramkumar，Jingsheng，Tuo，De F，Shen. Nutrient supplementation with n3 polyunsaturated fatty acids， lutein， and zeaxanthin decrease A2E accumulation and VEGF expression in the retinas of Ccl2/Cx3cr1-deficient mice on Crb1rd8 background[J]. The Journal of Nutrition， 2013，143（7）：1129-1135.

[6] 于肖鹏，时立芬，李晓光. 涎腺黏液表皮样癌COX-2表达与肿瘤血管生成的研究[J]. 泰山医学院学报，2011， 32（10）：727-730.

[7] 平高峰，张明鑫，袁梅琴，等. COX-2、VEGF在腹腔粘连组织中的表达及其意义[J]. 浙江临床医学，2011，13（1）：1-4.

[8] Moses K，Donkor，Elaine，ct al. Mammary tumor heterogeneity in the expansion of myeloid-derived suppressor cells[J]. International Immunopharmacology，2009，9（7-8）：937-948.

[9] 崔晓博，杨春梅，罗强，等. 环氧化酶-2选择性抑制剂NS-398逆转HCT-8/FU细胞多药耐药及其机制探讨[J].中国现代医学杂志，2011，21（24）：2945-2948，2951.

[10] 莫显超，李伟忠. siRNA沉默COX-2基因与增强口腔癌耐药株KB/VCR细胞化疗敏感性的相关性[J]. 南方医科大学学报，2014，1（5）：718-722.

（收稿日期：2014-07-31）

本次研究中，两组患者AA、AG、GG中的-1195A>G位点基因频率近似；而GG、GC、CC中-765G>C位点基因出现频率也无明显差异。此外，两组患者TT、CC、TC内的8473T>C位点基因出现频率及GG、GA、AA内的1795G>A位点基因出现频率也无明显差异，这表明SNP基因位点-1195A>G、-765G>C、8473T>C、1795G>A位点的各种基因型改变与口腔癌的发生易感性之间无明显相关性。欧洲学者研究发现，东欧人群8473T>C位点内的T-C碱基变化与口腔癌、喉癌、咽癌也无明显相关性[9]，与本次研究结论近似。但是需要注意的是，不同人群的同一SNP位点的等位基因变化情况不同，其头颈部肿瘤发病风险也不同[10]。因此，我们认为口腔癌发病率与患者种族人群遗传背景、致癌因素暴露程度等相关，也与研究人员研究方案、实验基因分型、研究样本基数及未知因素影响等相关。

综上所述，口腔癌易感性受多因素影响，但与SNP基因位点-1195A>G、-765G>C、8473T>C、1795G>A位点的各种基因型改变无明显相关性。

[参考文献]

[1] 闫怡轩，李伟忠. 塞来昔布提高耐长春新碱细胞株KB/VCR细胞化疗敏感性的研究[J]. 华西口腔医学杂志， 2013， 31（4）：403-407.

[2] 廖汶晓，闫怡轩，黄艳青，等. 塞来昔布增强口腔癌化疗敏感性与阻滞周期进程的相关性[J]. 南方医科大学学报，2013，33（6）：885-888.

[3] 刘宇，黄楷，杨辞秋，等. 动脉粥样硬化组织中环氧化酶-2的表达以及选择性环氧化酶-2抑制剂塞来昔布对人血管平滑肌细胞增殖与凋亡的作用[J]. 中华实验外科杂志，2013，30（10）：2088-2091.

[4] 王晓波，赵志宇，张玉芹，等. 环氧化酶2和Ki-67在口腔鳞状细胞癌中的表达及相关性研究[J]. 中国医药，2012， 7（8）：1036-1038.

[5] Hema L，Ramkumar，Jingsheng，Tuo，De F，Shen. Nutrient supplementation with n3 polyunsaturated fatty acids， lutein， and zeaxanthin decrease A2E accumulation and VEGF expression in the retinas of Ccl2/Cx3cr1-deficient mice on Crb1rd8 background[J]. The Journal of Nutrition， 2013，143（7）：1129-1135.

[6] 于肖鹏，时立芬，李晓光. 涎腺黏液表皮样癌COX-2表达与肿瘤血管生成的研究[J]. 泰山医学院学报，2011， 32（10）：727-730.

[7] 平高峰，张明鑫，袁梅琴，等. COX-2、VEGF在腹腔粘连组织中的表达及其意义[J]. 浙江临床医学，2011，13（1）：1-4.

[8] Moses K，Donkor，Elaine，ct al. Mammary tumor heterogeneity in the expansion of myeloid-derived suppressor cells[J]. International Immunopharmacology，2009，9（7-8）：937-948.

[9] 崔晓博，杨春梅，罗强，等. 环氧化酶-2选择性抑制剂NS-398逆转HCT-8/FU细胞多药耐药及其机制探讨[J].中国现代医学杂志，2011，21（24）：2945-2948，2951.

[10] 莫显超，李伟忠. siRNA沉默COX-2基因与增强口腔癌耐药株KB/VCR细胞化疗敏感性的相关性[J]. 南方医科大学学报，2014，1（5）：718-722.

（收稿日期：2014-07-31）

本次研究中，两组患者AA、AG、GG中的-1195A>G位点基因频率近似；而GG、GC、CC中-765G>C位点基因出现频率也无明显差异。此外，两组患者TT、CC、TC内的8473T>C位点基因出现频率及GG、GA、AA内的1795G>A位点基因出现频率也无明显差异，这表明SNP基因位点-1195A>G、-765G>C、8473T>C、1795G>A位点的各种基因型改变与口腔癌的发生易感性之间无明显相关性。欧洲学者研究发现，东欧人群8473T>C位点内的T-C碱基变化与口腔癌、喉癌、咽癌也无明显相关性[9]，与本次研究结论近似。但是需要注意的是，不同人群的同一SNP位点的等位基因变化情况不同，其头颈部肿瘤发病风险也不同[10]。因此，我们认为口腔癌发病率与患者种族人群遗传背景、致癌因素暴露程度等相关，也与研究人员研究方案、实验基因分型、研究样本基数及未知因素影响等相关。

综上所述，口腔癌易感性受多因素影响，但与SNP基因位点-1195A>G、-765G>C、8473T>C、1795G>A位点的各种基因型改变无明显相关性。

[参考文献]

[1] 闫怡轩，李伟忠. 塞来昔布提高耐长春新碱细胞株KB/VCR细胞化疗敏感性的研究[J]. 华西口腔医学杂志， 2013， 31（4）：403-407.

[2] 廖汶晓，闫怡轩，黄艳青，等. 塞来昔布增强口腔癌化疗敏感性与阻滞周期进程的相关性[J]. 南方医科大学学报，2013，33（6）：885-888.

[3] 刘宇，黄楷，杨辞秋，等. 动脉粥样硬化组织中环氧化酶-2的表达以及选择性环氧化酶-2抑制剂塞来昔布对人血管平滑肌细胞增殖与凋亡的作用[J]. 中华实验外科杂志，2013，30（10）：2088-2091.

[4] 王晓波，赵志宇，张玉芹，等. 环氧化酶2和Ki-67在口腔鳞状细胞癌中的表达及相关性研究[J]. 中国医药，2012， 7（8）：1036-1038.

[5] Hema L，Ramkumar，Jingsheng，Tuo，De F，Shen. Nutrient supplementation with n3 polyunsaturated fatty acids， lutein， and zeaxanthin decrease A2E accumulation and VEGF expression in the retinas of Ccl2/Cx3cr1-deficient mice on Crb1rd8 background[J]. The Journal of Nutrition， 2013，143（7）：1129-1135.

[6] 于肖鹏，时立芬，李晓光. 涎腺黏液表皮样癌COX-2表达与肿瘤血管生成的研究[J]. 泰山医学院学报，2011， 32（10）：727-730.

[7] 平高峰，张明鑫，袁梅琴，等. COX-2、VEGF在腹腔粘连组织中的表达及其意义[J]. 浙江临床医学，2011，13（1）：1-4.

[8] Moses K，Donkor，Elaine，ct al. Mammary tumor heterogeneity in the expansion of myeloid-derived suppressor cells[J]. International Immunopharmacology，2009，9（7-8）：937-948.

[9] 崔晓博，杨春梅，罗强，等. 环氧化酶-2选择性抑制剂NS-398逆转HCT-8/FU细胞多药耐药及其机制探讨[J].中国现代医学杂志，2011，21（24）：2945-2948，2951.

[10] 莫显超，李伟忠. siRNA沉默COX-2基因与增强口腔癌耐药株KB/VCR细胞化疗敏感性的相关性[J]. 南方医科大学学报，2014，1（5）：718-722.

（收稿日期：2014-07-31）