埋线疗法对衰老模型大鼠皮肤的抗氧化作用

周双琳 张 聪 林 殷

(北京中医药大学，北京，100029)

皮肤老化是机体衰老外在表现。自由基学说己被认为人类衰老机制现代理论中具有代表性的学说之一，如何有效保护皮肤组织免受自由基攻击，是延缓皮肤衰老的途径之一。埋线疗法是将可吸收性外科缝线(主要是指羊肠线)置入穴位内，利用线对穴位产生的持续刺激作用以防治疾病[1]，近年来该疗法在经络美容、面部除皱、抗皮肤老化等方面疗效满意[2－4]。有研究表明[5]针刺疗法具有清除自由基，提高抗氧化酶的活性起到抗氧化的作用。作为一种长效针灸的埋线疗法是否同样对皮肤组织具有抗氧化作用?相关的实验研究文献少见报道，因此本课题以D－半乳糖致亚急性雌性衰老大鼠皮肤为研究对象，在背部皮下进行埋线，检测皮肤组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量和谷胱甘肽过氧化物酶(GHS－Px)活力，观察其对衰老大鼠皮肤的抗氧化作用效应，现将实验结果报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 随机选取3月龄雌性Wistar大鼠30只，体重(220.6±18)g，由维通利华实验动物技术有限公司提供(批号:SCXK京2011－0010)，饲养于中国中医科学院基础理论研究所实验动物室。

1.1.2 仪器设备 羊肠线(上海浦东金环医疗用品有限公司出品的00号铬制医用羊肠线);一次性使用埋线针(扬州市邗江国祥医疗器械厂出品的9号埋线针);试剂:D－半乳糖(上海试剂二厂);SOD试剂盒、MDA试剂盒、GHS－Px试剂盒(南京建成生物工程研究所)。

1.2 方法

1.2.1 衰老动物模型的制备 采用D－半乳糖致亚急性衰老法，将D－半乳糖50 g溶于500 mL生理盐水中，按注射剂量125 mg/(kg·d)(即每克体重0.01 mL)予大鼠腹腔内注射，造模时间为100 d，每周称重1次，依据末次称重的大鼠体重克数调整给药剂量，从而建立亚急性衰老大鼠模型。

1.2.2 埋线操作 使用眼科镊夹持羊肠线从埋线针尖端推入，至针尖外无线体外露;左手拇食指绷紧或提捏起进针皮肤，右手拇中指夹持埋线针针柄，食指轻压针芯帽，针尖斜面朝上，迅速将针刺入穴位皮下，左手拇、食指缓缓推动针芯，右手拇食中三指缓缓后退针管，待羊肠线完全植入后，立即出针，用干棉球压迫针孔片刻。

1.2.3 分组及治疗 空白对照组:大鼠10只，进行捆绑操作，不注射，不埋线;衰老模型组:大鼠10只，按照衰老动物模型的制备方法进行操作;埋线治疗组:大鼠10只，先在大鼠背部进行皮下埋线一次，大鼠背部皮肤选取9点(分3行，行距为1 cm;每行3点，点距为1 cm)，分别埋入0.5 cm羊肠线。然后每天按照衰老动物模型的制备方法进行操作。100 d后在各组大鼠背部皮肤取材，检测皮肤组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量和谷胱甘肽过氧化物酶(GHS－Px)活力。

1.2.4 指标检测 第100 d脱椎处死大鼠，立即脱毛后取背部皮肤组织约2 cm×3 cm，生理盐水漂洗后去除多余脂肪组织，制成10%的皮肤组织匀浆，做SOD活性、MDA含量、GHS－Px活力的测定。严格按照试剂盒说明书进行操作。

1.3 统计学方法 采用SPSS 10.0统计分析软件进行统计。数据均以(±s)表示，定量资料组间比较采用t检验。

表1 各组大鼠皮肤SOD、MDA和GHS－Px活力的含量(±s)

表1 各组大鼠皮肤SOD、MDA和GHS－Px活力的含量(±s)

注:与空白对照组比较，＊＊P＜0.01，与衰老模型组比较，*P＜0.05。

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2 结果

1)与空白对照组相比，模型组SOD活性、GHSPx活力明显低于空白组，差异具有统计学意义(P＜0.01)，模型组MDA含量明显高于空白组，差异具有统计学意义(P＜0.01)，可认为D－半乳糖致亚急性衰老动物模型造模成功;埋线治疗组皮肤组织中的SOD活性、GHS－Px活力及MDA含量无明显改变(P＞0.05)。(见表1)

2)与模型组相比，埋线治疗组SOD活性、GHSPx活力明显升高，MDA含量明显降低，差异有统计学意义(P＜0.05)。(见表1)

3 讨论

传统中医学认为，女性皮肤衰老过程中，三阳经气虚衰是根本原因。《素问·上古天真论》:女子“五七，阳明脉衰，面始焦……;六七，三阳脉衰于上，面皆焦”。阳明胃经为多气多血之经，阳明脉衰是气血虚衰之兆。气血不旺，不能上达于面，使皮肤失去濡养滋润，导致干枯、出现皱纹，呈现衰老的面貌。另一方面，机体气血虚衰不能推动血液运行，导致血瘀痰浊内停，血瘀痰浊停聚日久又成为新的致衰因素[6－7]。血瘀在皮肤衰老中会出现不同程度的老年斑、肌肤甲错。痰浊内停在皮肤衰老方面主要表现为面色晦暗或面色光亮如油，皮肤油垢明显，肌肉松软如绵等痰凝肌腠、痰留皮肤的病变[8]。因而衰老是一个慢性、渐进性过程，《灵枢·终始》:“久病者，邪气深，刺此病者，深内而久留之。”埋线疗法通过将线体留置于经穴内，长久疏通经络，起到平衡阴阳、激发气血化生之功，因而该疗法已被广泛应用于现代养生抗衰老领域。

现代医学关于衰老自由基学说是目前国内外普遍公认的衰老理论。该学说认为机体受内、外源性刺激作用可产生大量自由基如活性氧(ROS)等[9]。自由基具有极强的氧化能力，可使生物膜中不饱和脂类发生过氧化，形成过氧化脂质，经分解后产过氧化物丙二醛(MDA)。丙二醛(MDA)与蛋白质、肽类或脂类聚合交联可形成老年色素或脂褐质的积累。当自由基过度堆积，攻击皮肤组织细胞，导致细胞凋亡，从而引起皮肤老化[10]。由于机体存在自由基的防御系统，超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH－Px)是机体酶促防御系统的主要抗氧化酶，它们组成体内的第一道抗氧化防线，早期生成的自由基都会被它们所还原，从而保证机体不会受到损害，防止衰老。当机体的自由基超过了它们的清除能力时，它们的活性就会降低。因此抗氧化酶和过氧化产物的含量成为皮肤衰老与抗衰老研究的重要指标。本研究通过检测埋线后大鼠皮肤组织中的超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH－Px)，以及过氧化物丙二醛(MDA)含量情况来观察其对衰老大鼠皮肤的抗氧化作用效应.本研究采用D－半乳糖致衰的大鼠模型，通过连续注射D－半乳糖，影响细胞的渗透压，使细胞肿胀，进而使细胞功能障碍、代谢紊乱，最终导致机体衰老[9]。姜国良等[11]证实注射D－半乳糖可构建的建立稳定可靠的衰老大鼠模型，能在皮肤组织及其他多层面上反映出机体的衰老情况。本研究表1中显示，模型组SOD活性、GHS－Px活力明显低于空白组，MDA含量明显高于空白组，说明D－半乳糖可使机体产生严重氧化应激，导致急性衰老，可认为D－半乳糖致衰老动物模型造模成功。埋线治疗组大鼠虽经注射D－半乳糖，但组皮肤组织中的 SOD活性、GHS－Px活力及MDA含量与空白组相比无明显改变;与模型组相比，埋线治疗组SOD活性、GHS－Px活力明显升高，MDA含量降低，说明皮肤局部埋线有明显的抗氧化作用，通过提高抗氧化酶的活性提高清除自由基能力，降低皮肤组织内自由基的堆积从而保护皮肤。这可能是埋线疗法能有效抗皮肤老化的作用机制之一。

4 结论

本研究结果证明，埋线疗法对雌性衰老大鼠皮肤有明显的抗氧化效应，其抗皮肤老化作用机制可能与皮肤组织中SOD、MDA和GHS－Px活力的改变相关。

目前国内外关于埋线疗法抗皮肤老化的临床及基础研究较少，本研究仅从局部探讨了埋线后皮肤抗氧化方面的效应机制，对于埋线疗法整体的抗皮肤老化机制仍不明确，这将是我们下一步研究要关注的重点。

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