思密达延迟给药对百草枯中毒大鼠血浆百草枯浓度的影响

姜银松　王占青　马玉英

[摘要] 目的 观察延迟思密达（Smecta）给药对百草枯（Paraquat，PQ）中毒大鼠血浆百草枯浓度、影响，分析其作用机理。方法 SPF级SD大鼠76只随机分为生理盐水对照组（A组）6只、30 min百草枯灌胃染毒对照组（B组，30只）、30 min思密达灌胃干预组（C组，30只）。B组、C组中毒后2、6、24、48、72 h分批处死存活的大鼠，每次6只，测定血浆PQ浓度。结果 各组大鼠无自然死亡，染毒大鼠血浆百草枯浓度随时间延长而迅速下降，B组PQ血浆浓度（ng/ml）范围（4 269.237 6±356.757 7，456.556 0±78.062 5）；C组与B组在同一时间点相比，中毒后2、6 h血浆浓度明显降低（P<0.05），其他时间点差异无统计学意义。结论 中毒后30 min思密达灌胃能在一定程度上降低大鼠血浆百草枯浓度。

[关键词] 思密达；百草枯；血浆浓度；病理变化；治疗作用

[中图分类号] R459.7 [文献标识码]A [文章编号]1674-0742（2014）03（c）-0039-02

PQ对人毒性极强且中毒事件频发，在亚洲国家尤为严重。研究报道，人口服PQ致死量为1～3 g（20%PQ溶液5～15 ml或者30 mg/kg[1]。虽然国内外学者一直致力于PQ的基础和临床研究[2]，但仍未探索到效的治疗方法，死亡率居高不下。临床研究证实血浆百草枯浓度是决定患者预后最重要的因素之一，及时清除、阻断口服百草枯由胃进入小肠，防止百草枯经血液循环到达重要脏器，是目前提高患者生存率的关键。思密达具有显著的胃肠道保护作用，在临床得到广泛的应用[3]，报道显示其对酒精、有机农药中毒有着独特的疗效，但目前仍少见思密达对百草枯中毒患者血浆浓度影响的研究。我们课题组前期研究发现在百草枯中毒后10 min给予大鼠思密达灌胃，干预组大鼠的血浆浓度比染毒对照组明显改善，基于此，我们继续在大鼠百草枯中毒后30 min延迟给予思密达灌胃进行干预，进一步观察思密达对百草枯中毒大鼠血浆浓度的影响，为治疗百草枯中毒探索有效途径。

1 材料与方法

1.1 动物、试剂及仪器

SPF级成年SD大鼠76只，购自新疆乌鲁木齐市疾病防治和控制中心动物科，批号 SCXK（新）2003-0002，重量200-250 g；20%百草枯水剂（江苏南通先正达农药公司） ；PQ标准品（HPLC）99.9area%，100mg，美国SIGMA-ALDRICH ）；乙腈（色谱纯）、甲醇（色谱纯）、三乙胺（分析纯）、磷酸（分析纯）均购自天津光复试剂有限公司；庚烷磺酸钠，分析纯，purity≥98%，20g （加拿大BBI），编号S2068，上海生工生物工程公司提供；思密达（博福-益普生天津制药有限公司生产）；HC-C18色谱柱（250×4.6×5 mm，美国，Agilent）；日本岛津高效液相色谱仪（编号07007324；LC-20AT泵；CBM-20A控制器；SPD-M20A检测器；SIL-20A自动进样器；CTO-10AS VP 柱温箱；CLASS-LC10工作站）

1.2 方法

1.2.1 动物分组、标本采集 实验参照文献[4]进行。大鼠按随机数字表法分为生理盐水对照组（A组）6只、30 min染毒组对照组（B组）30只、30 min思密达干预组（C组）30只。B、C组给予PQ（50 mg/kg）稀释至l ml灌胃染毒，A组同时给予l ml生理盐水灌胃。C组染毒后30 min给予思密达400 mg/kg（浓度60 mg/ml）灌胃，A组和B组同时等量生理盐水灌胃。B组、C组分别于中毒后2、6、24、48、72 h处理存活的大鼠，每次6只。氯胺酮注射液150 mg/kg 腹腔注射麻醉，下腔静脉取血3 ml，5 000 rpm离心5 min取血浆，-70 ℃冻存待测[5-6]，A组于实验结束后按同样方法一并处理。

1.2.2 血浆百革枯含量检测 精确称取百草枯标准品10 mg于l0 ml容量瓶中，加水稀释至刻度，得浓度为1.0 mg/ml浓标液。浓标液储存于4 ℃冰箱中，工作液在使用前由浓标液逐级稀释制得。仪器分析条件：Agilent （HC-C18，250×4.6×5 mm）色谱柱；流动相： 乙腈：75 mmol/L庚烷磺酸钠（12：88，V/V，用三乙胺调PH=3.0）；流速为1.0 ml/min；柱温为室温；检测波长为258 nm。吸取血浆上清液0.5 ml置于试管中，加入体积分数为35%的高氯酸100 ml，蜗旋1 min。高速离心12 000 rpm5 min，取上清液20 ml迸样进行HPLC分析，记录实验数据。精确配制百草枯浓度为20、50、100、500、1 000、5 000 ng/ml范围内的6个空白对照血浆样品，在本色谱条件下.按样品处理方法处理后，测其峰面积，由百草枯峰面积（y）对百草枯浓度（x）进行线性回归。计算百草枯样品的回归方程，依据百草桔回归方程可得血浆百草枯浓度（ng/ml）。

1.3 统计方法

采用SPSS17.0进行统计学处理。计量资料用均数±标准差（x-±s）表示。数据通过正态分布和方差齐性检验，浓度比较采用两样本t检验；病理评分采用完全随机设计单因素方差分析，并采用LSD检验进行两组之间比较。

2 结果

2.1 百草枯线性关系及血浆百草桔含量

血浆PQ回归方程：Y=98.821 0x+5 707.540 7。PQ在20～ 5 000 ng/ml范围内线性关系良好，PQ最低检测限为20 ng/mL。B组血浆PQ浓度随时间延长而逐渐下降，中毒后2 h浓度最高，6 h仍保持较高水平，24 h后开始明显下降，72 h浓度最低。C组在同一时间点与B组相比，中毒后2、6 h组大鼠血浆百草枯浓度比B组显著降低，差异有统计学意义（P<0.05），其他时间点差异无统计学意义（P<0.05），见表1。

3 讨论

国内外学者积极使用血液净化、白陶土等方法降低血浆PQ浓度、逆转百草枯所致的肺纤维化 [7-9]，虽取得了一定成效，但临床病死率仍无明显改善。寻找更加高效结合胃肠道PQ的吸附剂，降低PQ吸收的剂量，成为治疗PQ中毒一个基本而又重要的探索方向。根据PQ遇土钝化的理化特性以及思密达高效的吸附能力，该实验使用思密达在大鼠PQ中毒后30 min给予灌胃，观察思密达对PQ中毒大鼠血浆浓度的保护作用。

人口服PQ中毒后0.5～4 h内血浆PQ浓度达到峰值，之后进入血浆浓度迅速下降期、百草枯广泛分布到全身各处，其中胃、肠道、肺等脏器中浓度最高，蓄积时间最长。PQ在大鼠体内的代谢过程和人的不尽相同[10]。赵波将50 mg/kgPQ原液（20%）加蒸馏水稀释至1 ml给予大鼠灌胃染毒，于染毒后8、24、48 h等时间点使用高效液相法检测血浆PQ浓度，结果发现中毒后8 h血浆浓度最高，72 h已经检测不到百草枯[4]。该实验结果显示染毒组大鼠血浆PQ浓度随着时间的延长发生动态改变。该实验中大鼠血浆浓度的代谢动力学基本和以上研究一致，但是关于大鼠血浆中PQ浓度最终消失的时间存在分歧，这可能和实验中大鼠差异、浓度检测条件不同等有。中毒后30 min给予思密达处理的大鼠与30 min PQ染毒对照组相比，血浆百草枯浓度在中毒后2、6 h有所降低（P<0.05），其他时间点浓度有所降低，差异无统计学意义，这说明中毒后30 min给予染毒大鼠思密达处理，思密达对百草枯有一定吸附作用，但降低血浆百草枯浓度的作用有限。分析思密达降低血浆百草枯浓度以及其作用受限的机理如下：①思密达主要成分为八面体蒙脱石微粒，表面积大。思密达与PQ在胃内充分接触、混合，高效地吸附了胃肠道内毒物，而且结合物不进入血液循环，直接经消化道排出体外，保证了思密达吸附毒物的有效性，降低血浆PQ浓度。体外研究[11]显示思密达比白陶土和活性炭有更强的吸附能力，对救治百草枯中毒更有力治疗百草枯中毒。②思密达能够减少农药中毒所致机体胃肠功能不全的发生率，恢复胃肠蠕动，缩短毒物在消化道的停留时间[3]，避免再吸收。③口服PQ为水溶性制剂，在中毒后30 min后大鼠胃中的PQ已经大量进入肠道被吸收，此时给予思密达灌胃，只能结合胃内残留和空肠尚未吸收的PQ，思密达的吸附作用受到限制。我们前期研究显示在PQ中毒大鼠胃排空之前（百草枯中毒后10 min）进行思密达灌胃，思密达干预组的大鼠PQ血浆浓度较染毒对照组均显著降低（P<0.05或 P<0.01），有力证实思密达发挥吸附毒物的作用与给药时间密切相关，给药越早，降低血浆浓度作用越明显[12]。

综上，该实验证实P在大鼠PQ中毒后30 min给予思密达灌胃能够在一定程度上降低血浆PQ浓度，但不如中毒后10 min思密达灌胃对百草枯中毒大鼠的保护作用理想，实验证实PQ中毒的预后与阻断毒物吸收的救治时间密切相关，提示PQ中毒后必须在机体胃排空之前使用思密达等吸附剂进行彻底的洗胃，才能有效改善患者预后。

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（收稿日期：2013-12-10）