p85α基因在卵巢癌中表达及临床意义研究

刘俊毅

[摘要] 目的 观察p85α基因在卵巢癌组织中的表达，探讨其与卵巢癌发生的关系及用于卵巢癌的早期诊断与治疗的临床意义。方法 选取检测卵巢癌组织（66例）、癌旁组织（66例）及正常卵巢组织（17例）三个不同组织作为检测对象，采用免疫组化检测技术检测p85α基因表达产物及探讨p85α基因表达与卵巢癌临床特征的关系。结果 p85α基因在卵巢癌组织、癌旁组织、正常卵巢组织中的表达率分别为68.2%、59.1%、11.8%，即为该基因在卵巢癌组织中与癌旁组织、正常卵巢组织相比都较高，差异有统计学意义（P<0.05），p85α基因表达与卵巢癌的发病年龄关系差异无统计学意义（P>0.05），而与不同的临床分期、淋巴结的转移情况比较，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 PI3K p85α基因的异常表达可以作为卵巢癌早期诊断和判断其生物学特性的指标。

[关键词] p85α基因；卵巢癌；表达率；临床意义

[中图分类号] R737.31 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2014）07（c）-0017-02

[Abstract] Objective To observe the expression of p85α gene in ovarian cancer tissues and explore its relationship with the occurrence of ovarian cancer and its clinical significance for the early diagnosis and treatment of ovarian cancer. Methods We chose ovarian cancer tissues （66 cases）， ovarian cancer adjacent tissues （66 cases） and normal ovarian tissues （17 cases）， three different kinds of tissues as the detection objects. Immunohistochemical technique was used to detect p85α gene expression. The relationship between p85α gene expression and the clinical features of ovarian cancer was investigated. Results The expression rate of p85α gene in ovarian cancer tissues， ovarian adjacent cancer tissues and normal ovarian tissues was 68.2%， 59.1%， 11.8%， respectively， the expression rate of p85α gene in ovarian cancer tissues was higher than that in the ovarian adjacent cancer tissues and normal ovarian tissues， the difference was statistically significant （P<0.05）； p85α gene expression had no significant correlation with the age of onset of ovarian cancer （P>0.05）， but in clinical stage and lymph node metastasis there was statistical significance （P<0.05）. Conclusion The abnormal expression of PI3K p85α genes can be used as the indicator for early diagnosis of ovarian cancer and determination of its biological characteristics.

[Key words] p85α gene； Ovarian cancer； Expression rate； Clinical significance

经研究表明，磷脂酸肌醇-3激酶（PI3Ks）和Ras通路与肿瘤疾病的发生发展关系较为密切，它是在Ras通路之后被发现的又一新的信号传导通路[1]。该通路调节肿瘤细胞的增殖与分化，其活性异常不仅能导致正常细胞恶化，而且还与癌变细胞的粘附、迁移、肿瘤血管生成以及细胞外基质的降解等相关[2]。在PI3K家族中，IA型PI3K能被细胞表面酪氨酸激酶受体激活，它是由p85调节亚基和p110催化亚基组成，p85调节亚基和p110催化亚基具有协同作用，其中p85调节亚基对于p110催化亚基的稳定、聚集以及IA型PI3K的激活是必不可少的，PI3K基因的家族中表达最活跃的也为p85α基因，通过PIK3R1进行编码；该基因在体内的表达或者突变都可对PI3K的传导产生影响，与肿瘤的发生密切相关[3-4]。为观察p85α基因在卵巢癌组织中的表达，探讨其与卵巢癌发生的关系及用于卵巢癌的早期诊断与治疗的临床意义，该研究选取2010年12月—2012年12月间该院患者结合p85α基因在卵巢癌中的表达，现报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象

收集妇产科卵巢癌手术切除病例66例，行全面分期手术，年龄35～77岁，平均年龄48.6岁。以上所有病例均经术后病理证实。取材后液氮保存。按照FIGO 2000年修订的国际妇产科联盟分期标准进行临床分期： II期38例，III期28例；全部标本在手术前均没有接受过化疗和放疗，所有组织均先用10%福尔马林溶液固定，然后再用石蜡予以包埋，分别进行HE染色和免疫组织化学染色。取非肿瘤性原因切除的正常卵巢组织标本17例作为正常对照，浓缩型羊抗人ZNF217多克隆抗体和免疫组化试剂盒分别由abcam生物公司及北京中杉金桥公司生产。endprint

1.2 免疫组化法

按即用型二步法检测试剂盒说明进行抗PI3Kp85α（1：100）免疫组织化学染色，阴性对照组通过PBS来替代一抗。

1.3 结果评估标准

PI3Kp85α蛋白的颜色为棕黄色的颗粒物质。不同的染色颜色其计分的标准也不一致，无色、淡黄色、棕黄色、棕褐色分别计分为0、1、2、3分；在物镜一致的条件下根据阳性细胞数计分标准如下：≤25%记1分，26%～50%为记2分，51%～75%记3分，>75%记4分。最终的计分结果为上述两种方式分数的乘积，结果为阴性、弱阳性（+）、中等阳性（++）、强阳性（+++）所对应的分值分别为0、1～3、4～5、>5分。

1.4 统计方法

使用SPSS13.0对研究数据进行统计分析，所有的资料都服从正态分布，通过t检验分析计量资料间的差异，χ2检验分析计数资料之间的差异。

2 结果

2.1 不同组织中p85α基因的表达

p85α基因在卵巢癌组织、癌旁组织、正常卵巢组织中的表达率分别为68.2%、59.1%、11.8%，即在卵巢癌组织中的表达率明显高于癌旁组织和正常卵巢组织，差异有统计学意义（χ2=4.31，P<0.05），见表1。

3 讨论

卵巢癌是发生于卵巢表面体腔上肢和其下方卵巢间质的恶性肿瘤，常发生于中年妇女，发病率仅次于子宫体癌和子宫颈癌，位居危害妇女健康疾病的第3位，目前该病的发生率有增无减，由于肿瘤细胞易扩散而使得化疗不能彻底，也增加了靶向治疗的难度，提高了卵巢癌患者的死亡率，这给妇女的生命健康带来严重威胁[5]。卵巢癌的病因尚不清楚，早期亦无明显症状、体征，现今也缺乏早期诊断方法，虽然国内外有报道应用卵巢癌单克隆抗体等技术可发现早期病灶，但尚未普及，故大部分卵巢癌患者就诊时已属晚期。其发病可能与年龄、生育、血型、精神因素及环境等有关目前治疗主要以手术为主[6]。

研究发现，PI3K基因的家族中表达最活跃的也为p85α基因，通过PIK3R1进行编码；该基因在体内的表达或者突变都可对PI3K的传导产生影响，与肿瘤的发生密切相关。激活PI3K基因可生成PIP3这一第二信使，接着在细胞中与信号蛋白AKT以及PDK 1相结合，从而活化AKT。研究发现，胃癌等很多恶性肿瘤的发生都与IA型的PI3K及其下游分子中所含的蛋白激酶（指的是PI3K/Akt通路）关系密切。尤其是PI3K/Akt通路，研究者观察到在肺癌以及乳腺癌等肿瘤中其表达升高[7-8]。发生的机制是在DNA水平上其关键分子位置存在的编码基因发生结构的改变，进而导致PI3K的活化，例如p85α基因在大肠癌或卵巢癌患者中其iSH2的区域部位发生突变或缺失都会引起PI3K的活化。也有文献记载，某些信号蛋白如NF-ka-ppaB/p65及PI3K等在大肠癌、非小细胞肺癌等恶性肿瘤中发生稳定、持续的活化，并且表达量显著上升[9-10]。p110和Akt2在乳腺癌、卵巢癌和胰腺癌等多种肿瘤中编码基因发生突变或表达量增高，而抑制PI3K活性后细胞的增殖则被受阻，表现为细胞周期阻滞、Rb的磷酸化及CDK4表达量减少等，这种细胞周期的阻滞现象能在细胞中活性Akt及其下游分子p70S6K表达的情况下得以恢复，提示PI3K可能在这些肿瘤中的原癌基因。

该研究的结果表明，卵巢癌患者与健康者卵巢组织中PI3Kp85α蛋白的表达差异很大，前者表现为过表达状态，后者为低表达水平。提示该基因与卵巢癌的发生发展关系较为密切，临床上在疾病发生的早期通过检测PI3K p85α的水平，有助于及时筛选出卵巢癌。另外该研究还对PI3Kp85α蛋白的具体表达情况与卵巢癌疾病的生物学特征之间的联系进行了深入分析。研究结果表明PI3Kp85α蛋白的表达水平上升与卵巢癌的不同临床分期及转移有关（P<0.05），而与患者性别、年龄差异无统计学意义（P>0.05）。由此可提示PI3Kp85α蛋白的表达水平上升其肿瘤病人出现恶化的可能性与程度也显著增高，瘤细胞扩散好的范围更广。以往的研究表明，RNA干扰术对PI3Kp85α表达可产生抑制作用，以此对卵巢癌细胞的快速增殖以及分化进行抑制，说明可以以干预p85α基因的表达来治疗卵巢癌，即其具有广阔的应用前景。

[参考文献]

[1] 沈文洁，邢福祺，鲁永鲜.印迹基因Lot在卵巢上皮性癌组织中的表达及其甲基化的研究[J].中华妇产科杂志，2007，42（5）：339-342.

[2] 褚艳.PTEN和卵巢肿瘤[J].河北医药，2009，31（23）：3292-3294.

[3] Schondorfd T，Distal A，Grabmann J， et al. Single mutation of the PTEN gene imrecurrent ovarian carcinomas[J].Soc Gynecol invest，2000，34（7）：31-36.

[4] 瞿永宁，徐玲，沈悦.稳定转染PTEN基因后对卵巢上皮性癌细胞磷酸酰肌醇3激酶、蛋白激酶B信号传导通路的影响[J].中华妇产科杂，2010，45（9）：682-685.

[5] 郝明.第17号染色体基因变异与卵巢癌相关性研究[J].国际检验医学杂志，2008，29（2）：151- 154.

[6] Jinsong L，Weiwei S. Epithelial ovarian cancer Focus on genetics and animal models[J] .Landes Bioscience， 2009，8（5）：731-735.

[7] 沈文静，戴冬秋，郭科军.上皮性卵巢癌HIC1基因异常甲基化的检测及其临床意义的研究[J].中国现代医学杂志，2009，19 （4）：590-592.

[8] 段再康，粱建芳，郑绘霞.HIC1、HOXA9基因启动子甲基化在卵巢癌早期诊断中的意义[J].中国药物与临床，2010，10（6）：615-618.

[9] 夏立平，刘晓力，陈国平，等.TGF2J31、TGF2J3R1、Smad4在乳腺癌发生、发展中的作用及其相互关系[J].海南医学院学报，2010，16（6）：693-696.

[10] 王莉，惠宁，唐亮.GPC3在卵巢癌中的表达及其临床意义[J].解放军医学杂志，2007，32（10）：1017-1020.

（收稿日期：2014-04-25）endprint

1.2 免疫组化法

按即用型二步法检测试剂盒说明进行抗PI3Kp85α（1：100）免疫组织化学染色，阴性对照组通过PBS来替代一抗。

1.3 结果评估标准

PI3Kp85α蛋白的颜色为棕黄色的颗粒物质。不同的染色颜色其计分的标准也不一致，无色、淡黄色、棕黄色、棕褐色分别计分为0、1、2、3分；在物镜一致的条件下根据阳性细胞数计分标准如下：≤25%记1分，26%～50%为记2分，51%～75%记3分，>75%记4分。最终的计分结果为上述两种方式分数的乘积，结果为阴性、弱阳性（+）、中等阳性（++）、强阳性（+++）所对应的分值分别为0、1～3、4～5、>5分。

1.4 统计方法

使用SPSS13.0对研究数据进行统计分析，所有的资料都服从正态分布，通过t检验分析计量资料间的差异，χ2检验分析计数资料之间的差异。

2 结果

2.1 不同组织中p85α基因的表达

p85α基因在卵巢癌组织、癌旁组织、正常卵巢组织中的表达率分别为68.2%、59.1%、11.8%，即在卵巢癌组织中的表达率明显高于癌旁组织和正常卵巢组织，差异有统计学意义（χ2=4.31，P<0.05），见表1。

3 讨论

卵巢癌是发生于卵巢表面体腔上肢和其下方卵巢间质的恶性肿瘤，常发生于中年妇女，发病率仅次于子宫体癌和子宫颈癌，位居危害妇女健康疾病的第3位，目前该病的发生率有增无减，由于肿瘤细胞易扩散而使得化疗不能彻底，也增加了靶向治疗的难度，提高了卵巢癌患者的死亡率，这给妇女的生命健康带来严重威胁[5]。卵巢癌的病因尚不清楚，早期亦无明显症状、体征，现今也缺乏早期诊断方法，虽然国内外有报道应用卵巢癌单克隆抗体等技术可发现早期病灶，但尚未普及，故大部分卵巢癌患者就诊时已属晚期。其发病可能与年龄、生育、血型、精神因素及环境等有关目前治疗主要以手术为主[6]。

研究发现，PI3K基因的家族中表达最活跃的也为p85α基因，通过PIK3R1进行编码；该基因在体内的表达或者突变都可对PI3K的传导产生影响，与肿瘤的发生密切相关。激活PI3K基因可生成PIP3这一第二信使，接着在细胞中与信号蛋白AKT以及PDK 1相结合，从而活化AKT。研究发现，胃癌等很多恶性肿瘤的发生都与IA型的PI3K及其下游分子中所含的蛋白激酶（指的是PI3K/Akt通路）关系密切。尤其是PI3K/Akt通路，研究者观察到在肺癌以及乳腺癌等肿瘤中其表达升高[7-8]。发生的机制是在DNA水平上其关键分子位置存在的编码基因发生结构的改变，进而导致PI3K的活化，例如p85α基因在大肠癌或卵巢癌患者中其iSH2的区域部位发生突变或缺失都会引起PI3K的活化。也有文献记载，某些信号蛋白如NF-ka-ppaB/p65及PI3K等在大肠癌、非小细胞肺癌等恶性肿瘤中发生稳定、持续的活化，并且表达量显著上升[9-10]。p110和Akt2在乳腺癌、卵巢癌和胰腺癌等多种肿瘤中编码基因发生突变或表达量增高，而抑制PI3K活性后细胞的增殖则被受阻，表现为细胞周期阻滞、Rb的磷酸化及CDK4表达量减少等，这种细胞周期的阻滞现象能在细胞中活性Akt及其下游分子p70S6K表达的情况下得以恢复，提示PI3K可能在这些肿瘤中的原癌基因。

该研究的结果表明，卵巢癌患者与健康者卵巢组织中PI3Kp85α蛋白的表达差异很大，前者表现为过表达状态，后者为低表达水平。提示该基因与卵巢癌的发生发展关系较为密切，临床上在疾病发生的早期通过检测PI3K p85α的水平，有助于及时筛选出卵巢癌。另外该研究还对PI3Kp85α蛋白的具体表达情况与卵巢癌疾病的生物学特征之间的联系进行了深入分析。研究结果表明PI3Kp85α蛋白的表达水平上升与卵巢癌的不同临床分期及转移有关（P<0.05），而与患者性别、年龄差异无统计学意义（P>0.05）。由此可提示PI3Kp85α蛋白的表达水平上升其肿瘤病人出现恶化的可能性与程度也显著增高，瘤细胞扩散好的范围更广。以往的研究表明，RNA干扰术对PI3Kp85α表达可产生抑制作用，以此对卵巢癌细胞的快速增殖以及分化进行抑制，说明可以以干预p85α基因的表达来治疗卵巢癌，即其具有广阔的应用前景。

[参考文献]

[1] 沈文洁，邢福祺，鲁永鲜.印迹基因Lot在卵巢上皮性癌组织中的表达及其甲基化的研究[J].中华妇产科杂志，2007，42（5）：339-342.

[2] 褚艳.PTEN和卵巢肿瘤[J].河北医药，2009，31（23）：3292-3294.

[3] Schondorfd T，Distal A，Grabmann J， et al. Single mutation of the PTEN gene imrecurrent ovarian carcinomas[J].Soc Gynecol invest，2000，34（7）：31-36.

[4] 瞿永宁，徐玲，沈悦.稳定转染PTEN基因后对卵巢上皮性癌细胞磷酸酰肌醇3激酶、蛋白激酶B信号传导通路的影响[J].中华妇产科杂，2010，45（9）：682-685.

[5] 郝明.第17号染色体基因变异与卵巢癌相关性研究[J].国际检验医学杂志，2008，29（2）：151- 154.

[6] Jinsong L，Weiwei S. Epithelial ovarian cancer Focus on genetics and animal models[J] .Landes Bioscience， 2009，8（5）：731-735.

[7] 沈文静，戴冬秋，郭科军.上皮性卵巢癌HIC1基因异常甲基化的检测及其临床意义的研究[J].中国现代医学杂志，2009，19 （4）：590-592.

[8] 段再康，粱建芳，郑绘霞.HIC1、HOXA9基因启动子甲基化在卵巢癌早期诊断中的意义[J].中国药物与临床，2010，10（6）：615-618.

[9] 夏立平，刘晓力，陈国平，等.TGF2J31、TGF2J3R1、Smad4在乳腺癌发生、发展中的作用及其相互关系[J].海南医学院学报，2010，16（6）：693-696.

[10] 王莉，惠宁，唐亮.GPC3在卵巢癌中的表达及其临床意义[J].解放军医学杂志，2007，32（10）：1017-1020.

（收稿日期：2014-04-25）endprint

1.2 免疫组化法

按即用型二步法检测试剂盒说明进行抗PI3Kp85α（1：100）免疫组织化学染色，阴性对照组通过PBS来替代一抗。

1.3 结果评估标准

PI3Kp85α蛋白的颜色为棕黄色的颗粒物质。不同的染色颜色其计分的标准也不一致，无色、淡黄色、棕黄色、棕褐色分别计分为0、1、2、3分；在物镜一致的条件下根据阳性细胞数计分标准如下：≤25%记1分，26%～50%为记2分，51%～75%记3分，>75%记4分。最终的计分结果为上述两种方式分数的乘积，结果为阴性、弱阳性（+）、中等阳性（++）、强阳性（+++）所对应的分值分别为0、1～3、4～5、>5分。

1.4 统计方法

使用SPSS13.0对研究数据进行统计分析，所有的资料都服从正态分布，通过t检验分析计量资料间的差异，χ2检验分析计数资料之间的差异。

2 结果

2.1 不同组织中p85α基因的表达

p85α基因在卵巢癌组织、癌旁组织、正常卵巢组织中的表达率分别为68.2%、59.1%、11.8%，即在卵巢癌组织中的表达率明显高于癌旁组织和正常卵巢组织，差异有统计学意义（χ2=4.31，P<0.05），见表1。

3 讨论

卵巢癌是发生于卵巢表面体腔上肢和其下方卵巢间质的恶性肿瘤，常发生于中年妇女，发病率仅次于子宫体癌和子宫颈癌，位居危害妇女健康疾病的第3位，目前该病的发生率有增无减，由于肿瘤细胞易扩散而使得化疗不能彻底，也增加了靶向治疗的难度，提高了卵巢癌患者的死亡率，这给妇女的生命健康带来严重威胁[5]。卵巢癌的病因尚不清楚，早期亦无明显症状、体征，现今也缺乏早期诊断方法，虽然国内外有报道应用卵巢癌单克隆抗体等技术可发现早期病灶，但尚未普及，故大部分卵巢癌患者就诊时已属晚期。其发病可能与年龄、生育、血型、精神因素及环境等有关目前治疗主要以手术为主[6]。

研究发现，PI3K基因的家族中表达最活跃的也为p85α基因，通过PIK3R1进行编码；该基因在体内的表达或者突变都可对PI3K的传导产生影响，与肿瘤的发生密切相关。激活PI3K基因可生成PIP3这一第二信使，接着在细胞中与信号蛋白AKT以及PDK 1相结合，从而活化AKT。研究发现，胃癌等很多恶性肿瘤的发生都与IA型的PI3K及其下游分子中所含的蛋白激酶（指的是PI3K/Akt通路）关系密切。尤其是PI3K/Akt通路，研究者观察到在肺癌以及乳腺癌等肿瘤中其表达升高[7-8]。发生的机制是在DNA水平上其关键分子位置存在的编码基因发生结构的改变，进而导致PI3K的活化，例如p85α基因在大肠癌或卵巢癌患者中其iSH2的区域部位发生突变或缺失都会引起PI3K的活化。也有文献记载，某些信号蛋白如NF-ka-ppaB/p65及PI3K等在大肠癌、非小细胞肺癌等恶性肿瘤中发生稳定、持续的活化，并且表达量显著上升[9-10]。p110和Akt2在乳腺癌、卵巢癌和胰腺癌等多种肿瘤中编码基因发生突变或表达量增高，而抑制PI3K活性后细胞的增殖则被受阻，表现为细胞周期阻滞、Rb的磷酸化及CDK4表达量减少等，这种细胞周期的阻滞现象能在细胞中活性Akt及其下游分子p70S6K表达的情况下得以恢复，提示PI3K可能在这些肿瘤中的原癌基因。

该研究的结果表明，卵巢癌患者与健康者卵巢组织中PI3Kp85α蛋白的表达差异很大，前者表现为过表达状态，后者为低表达水平。提示该基因与卵巢癌的发生发展关系较为密切，临床上在疾病发生的早期通过检测PI3K p85α的水平，有助于及时筛选出卵巢癌。另外该研究还对PI3Kp85α蛋白的具体表达情况与卵巢癌疾病的生物学特征之间的联系进行了深入分析。研究结果表明PI3Kp85α蛋白的表达水平上升与卵巢癌的不同临床分期及转移有关（P<0.05），而与患者性别、年龄差异无统计学意义（P>0.05）。由此可提示PI3Kp85α蛋白的表达水平上升其肿瘤病人出现恶化的可能性与程度也显著增高，瘤细胞扩散好的范围更广。以往的研究表明，RNA干扰术对PI3Kp85α表达可产生抑制作用，以此对卵巢癌细胞的快速增殖以及分化进行抑制，说明可以以干预p85α基因的表达来治疗卵巢癌，即其具有广阔的应用前景。

[参考文献]

[1] 沈文洁，邢福祺，鲁永鲜.印迹基因Lot在卵巢上皮性癌组织中的表达及其甲基化的研究[J].中华妇产科杂志，2007，42（5）：339-342.

[2] 褚艳.PTEN和卵巢肿瘤[J].河北医药，2009，31（23）：3292-3294.

[3] Schondorfd T，Distal A，Grabmann J， et al. Single mutation of the PTEN gene imrecurrent ovarian carcinomas[J].Soc Gynecol invest，2000，34（7）：31-36.

[4] 瞿永宁，徐玲，沈悦.稳定转染PTEN基因后对卵巢上皮性癌细胞磷酸酰肌醇3激酶、蛋白激酶B信号传导通路的影响[J].中华妇产科杂，2010，45（9）：682-685.

[5] 郝明.第17号染色体基因变异与卵巢癌相关性研究[J].国际检验医学杂志，2008，29（2）：151- 154.

[6] Jinsong L，Weiwei S. Epithelial ovarian cancer Focus on genetics and animal models[J] .Landes Bioscience， 2009，8（5）：731-735.

[7] 沈文静，戴冬秋，郭科军.上皮性卵巢癌HIC1基因异常甲基化的检测及其临床意义的研究[J].中国现代医学杂志，2009，19 （4）：590-592.

[8] 段再康，粱建芳，郑绘霞.HIC1、HOXA9基因启动子甲基化在卵巢癌早期诊断中的意义[J].中国药物与临床，2010，10（6）：615-618.

[9] 夏立平，刘晓力，陈国平，等.TGF2J31、TGF2J3R1、Smad4在乳腺癌发生、发展中的作用及其相互关系[J].海南医学院学报，2010，16（6）：693-696.

[10] 王莉，惠宁，唐亮.GPC3在卵巢癌中的表达及其临床意义[J].解放军医学杂志，2007，32（10）：1017-1020.

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