CD44v6、ADA、IFN-γ联合检测在胸腹水鉴别中的临床应用

孙玉真 孙前进

临床上胸腹水是多种疾病的常见并发症,不同的病因采取的治疗和对预后的评估完全不同,因此早期初筛有重要的临床意义。临床上经常需要加以鉴别的是结核性、恶性胸腹水, 因为二者的临床表现、影像表现、难以区分。因此,有时临床上会采取尝试治疗, 怀疑结核就对患者进行抗痨治疗, 如果有效即证明是结核引起的胸腹水。但是这种治疗带有盲目性, 很可能延误了患者的病情, 这是医患都不愿看到的结果。因此, 正确鉴别良恶性胸、腹水成为当前研究的主要课题。可溶性CD44v6(sCD44v6)表达于肿瘤细胞表面,经多种途径参与肿瘤发生、生长和转移, 胸腹水中腺苷脱氨酶(ADA)、干扰素-γ(IFN-γ)活性升高是诊断结核性胸腹膜炎重要的辅助指标之一。实验室分别用酶联免疫吸附试验(ELISA)及化学法检测胸腹水sCD44v6、ADA、IFN-γ水平,联合检测, 回顾分析, 评价其在良恶性胸腹水鉴别诊断中的临床价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2012年6月～2013年6月徐州市中医院呼吸内科、肿瘤内科、胸外科、外科、骨科患者80例,年龄28～79岁,平均年龄42.5岁, 结核性胸腹水28例(结核组)。结核诊断标准：①具有结核中毒症状； ②痰、胸腹水涂片或培养结核杆菌阳性；③X线或CT发现结核病灶；④胸腹水符合渗出液的改变；⑤经穿刺抽液及抗痨治疗2～4周有效。 恶性胸腹水32例(恶性组), 卵巢癌10例, 胃癌10例,肺癌8例, 肝癌4例, 均经细胞学检查、病理等确诊。炎性胸腹水20例(炎性组), 经胸腹水常规、生化检查确诊。

1.2 方法

1.2.1 标本采集 胸腹水采集, 有专用穿刺包, 经胸腹腔穿刺术, 专用无菌抗凝试管, 标本采集后, 3000 r/min离心15 min,取上清液,按每次用量分装后,立即置-70℃冰箱冻存待测。

1.2.2 sCD44v6、ADA、IFN-r的测定 sCD44v6试剂盒由奥地利BMD公司提供,操作步骤严格按照说明书进行,采用ELISA法测定样本中sCD44v6水平,阳性判断标准: sCD44v6>60.5 ng/ml；ADA试剂盒由浙江康特生物技术有限公司提供,仪器由西门子有限公司提供。ADA活性检测方法严格按照试剂盒操作说明进行,应用速率法检测,阳性判断标准:ADA>45 U/L；IFN-γ试剂盒由晶美生物工程有限公司提供,应用ELISA法测定, 阳性判断标准：IFN-r>240 pg/ml。

1.3 统计学方法 用SPSS19.0 统计软件进行统计分析。计量资料以均数± 标准差(±s)表示, 采用t检验；计数资料采用χ2检验。以 P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

三组胸腹水中sCD44v6、ADA、IFN-γ测定结果及比较：恶性组sCD44v6活性高于结核组及炎性组,差异有统计学意义(P<0.05)；结核组ADA的活性明显高于恶性组及炎性组,差异有统计学意义(P<0.05)。IFN-γ在结核性胸腹水中明显增高, 其增高程度高于ADA, 差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。各项目诊断阳性率比较见表2。

表1 三组胸腹水标本sCD44v6、ADA、IFN-γ的检测结果(±s)

表1 三组胸腹水标本sCD44v6、ADA、IFN-γ的检测结果(±s)

注：与结核组及炎性组比较, aP<0.05；与恶性组及炎性组比较, bP<0.05, cP<0.05 ；与本组ADA比较dP<0.05

组别 例数 sCD44v6(ng/ml)ADA(U/L)IFN-γ (pg/mL)结核组 28 41±10 98±19b 557±55cd恶性组 32 95±26a 18±8 49±13.2炎性组 20 39±6 23±10 52±11.3

表2 三组胸腹水标本sCD44v6、ADA、IFN-γ测定阳性率［n(%)］

3 讨论

CD44是一种分布在细胞表面的跨膜糖蛋白,主要参与细胞与细胞、细胞与基质之间的特异性黏附过程。近年来发现CD44表达状况与肿瘤的发生、发展,尤其与肿瘤转移关系密切［1］, CD44v6是CD44的拼接变异体,参与肿瘤细胞与血管或淋巴管内皮细胞之间、肿瘤细胞与基膜之间、肿瘤细胞穿出基膜与器官组成细胞之间的黏附, CD44v6可通过蛋白水解酶的作用从细胞膜上脱落到血液或体液中［2］,所以血液或体液中(腹水或胸水)可检测到sCD44v6。sCD44v6对恶性胸腹水具有较高的敏感性(87.1%)和特异性(85.9%)［3］。本试验结果发现,恶性胸腹水sCD44v6水平显著高于良性胸腹水,恶性胸腹水的阳性检出率高达87.5%, 与报道相吻合。

ADA广泛分布于人体各组织中,尤其在淋巴细胞中含量高,而T细胞的含量高于B细胞,其活性与免疫功能密切相关。结核是T淋巴细胞介导的细胞免疫,淋巴细胞内的ADA进入血液,结核性胸膜炎时可渗出至胸液中,在胸水中的含量明显增多［4］。Castro等［5］研究认为,胸水ADA测定在诊断结核性胸膜炎中有较大的意义,结核性胸腔积液ADA明显高于癌性积液,癌性积液时T细胞增殖受抑制,ADA活性明显降低。国内报道［6］,如胸腔积液中ADA>40 U/L应考虑为结核性的。Bhargava等发现结核性胸腹水患者血清及胸腹水中ADA活性均明显升高。随后Gupta等［7］报道通过检测胸腹水中ADA活性诊断结核性胸腹水的敏感性均为100%,特异性为94.1%～99%。本组测定结果发现:结核性胸腹水中ADA含量明显高于恶性胸腹水,二者差异有统计学意义(P<0.05)。胸、腹水ADA测定对鉴别结核性胸腹水与恶性胸腹水有重要的临床价值。

胸腹膜在结核杆菌感染后会产生针对其抗原成分的变态反应,使血管通透性增加形成渗出性胸腹腔积液［7］。在此过程中IFN-γ促进巨噬细胞吞噬结核杆菌,故结核性胸腹腔积液中IFN-γ的高水平表达是其胸腹腔局部细胞免疫增强的表现。本研究中28例结核性胸腹腔积液患者,阳性检出率为96.4%(27/28),更加证实IFN-γ是鉴定结核性胸腹水的特异性指标。

试验中发现, 炎性胸腹水中ADA亦有一定的阳性率, 经审核, 几例胸腹水中都存在血性外观情况, 溶血对ADA的测定影响不容小觑, 这就造成了ADA测定对诊断结核的特异性大大降低。IFN-γ试剂盒的出现, 弥补了这一缺陷。IFN-γ测定受溶血影响较小, 大大提高测定的特异性, 对临床诊断结核性胸腹水提供了有力可靠的依据。

综上所述, sCD44v6、ADA、IFN-γ联合检测,其敏感性和特异性较单项检测均有提高,故几项联合检测在临床诊断中有一定的互补性,可提高诊断的符合率, 为患者的快速诊断提供依据。胸、腹水sCD44v6在一定程度上反映肿瘤生物学行为,检测sCD44v6为临床胸腹水的定性诊断提供了一种简单、快速、敏感性高、特异性强的新方法;胸腹水中ADA、IFN-γ检测对鉴别结核性胸腹水及恶性胸腹水有较高的临床价值, 特别是IFN-γ, 在发现ADA的测定受溶血的影响较大而影响诊断时, 适时的弥补这一缺陷, 效果确切。sCD44v6、ADA、IFN-γ联合检测对于良、恶性胸腹水的鉴别诊断具有重要的临床价值。

［1］Dammrich J,Vollmers HP, Heider KH, et al.Importance of different CD44v6 expression in human gastric intestinal and diffuse type cancers for metastatic lymphogenic spreading.Mol Med, 2008,73(8):395-401.

［2］Joth S.CD44 and its partners in metastasis.Clinical and Experimental Metastasis, 2003,20(3):195-201.

［3］孙晓敏,董卫国,高礼层,等.恶性腹水中可溶性CD44v6的检测及意义.中华检验医学杂志, 2003,26(11):662-664.

［4］叶飞,张辉,钟晶,等.腺苷脱氨酶在结核性胸膜炎鉴别诊断中的意义.成都医药杂志, 2004,30(2):77-78.

［5］Castro DJ, Nuevo GD, Perez-Rodriguez E, et al.Diagnostic value of adenosine deaminase in nontuberulous lymphocytic pleural effusions.Eur respire J, 2003,21(2):220-224.

［6］李嫣红,谢灿茂.结核性胸膜炎的发病机制研究进展.国外医学内科学分册, 2009,29(9):373-376.

［7］Gupta VK, Mukherjee S, Dutta SK, et al.Diagnostic evaluation of ascetic adenosine deaminase activity in tubercular peritonitis.J Assoc Physicians India, 2008,40(6):387-389.