丹参滴注液清洁验证检验方法的确认研究

夏蕴琼

(上海华源安徽锦辉制药有限公司，安徽阜阳 236018)

丹参具有袪瘀止痛、活血通经、清心除烦的作用，主治冠心病、心绞痛、心烦不眠、月经不调、闭经、痛经等症［1］。其化学成分主要为脂溶性的二萜类成分和水溶性的酚酸类成分［2］。水溶性化合物主要有丹参素(Danshensu)、原儿茶醛(Procatechualdehyde)、丹酚酸(Salvianolic acid)［3］等。丹参水溶性成分检测采用HPLC法，指标性成分主要是丹参素钠、原儿茶醛和丹酚酸B等［4-7］。本实验是对丹参滴注液清洁验证残留活性成分的检验方法进行确认。同时对丹参滴注液清洁验证的取样回收率进行确认。

1 设备、材料和试剂

1.1 设备 车间生产所使用的设备按照与产品接触的情况，可分为三类:直接接触产品的设备(浓配罐、稀配罐、配液系统循环管路、灌装机贮液罐);非接触产品的设备(浓配罐外表面、稀配罐外表面、配液系统循环管路外表面、灌装机外表面、加塞机外表面);非直接接触产品的设备(振动理塞斗、理塞轨道、加塞杆)。

1.2 检验仪器与试药 检验仪器:安捷伦1260高效液相色谱仪(G1311C四元泵，G1314F VWD紫外检测器，G1329B ALS自动进样器，安捷伦液相色谱系统工作站);电子分析天平AE240(梅特勒)。

试药:丹参素钠对照品，购自上海源叶生物科技有限公司;原儿茶醛对照品，购自中国药品生物制品检定所;甲醇(色谱纯)、冰醋酸(分析纯)购自国药集团化学试剂有限公司。

2 方法

2.1 清洁设备的确认 清洁验证对象:直接接触产品的设备。设备清洁方式:在线清洁、手动清洁。所用清洁剂:注射用水、1%氢氧化钠溶液、1%枸橼酸溶液。

2.2 配液系统及灌装机清洁方法的确认

2.2.1 预洗 浓配系统:经清洗球淋洗浓配罐内壁循环5 min后，通过罐底排污阀门排尽淋洗液。

稀配系统及罐装机组:开启循环泵，经稀配管路、钛棒过滤器、折叠滤芯过滤器、灌封管道循环5 min后，经终端过滤器、储液缸灌封机36个灌装工位排尽淋洗液。

2.2.2 清洗 于浓配罐中注入1%氢氧化钠溶液，开启循环泵经循环管路及清洗球淋洗浓配罐10 min后，泵入稀配罐，开启循环泵，使1%氢氧化钠溶液经稀配管路、钛棒过滤器、折叠滤芯过滤器、灌封管道循环10 min后，经终端过滤器、储液缸，灌封机36个灌装工位排尽，再打开各排污阀，排尽罐内、钛棒过滤器、折叠过滤器中的1%氢氧化钠溶液;再于浓配罐中注入5 kg枸橼酸，配制成1%枸橼酸溶液，开启循环泵经循环管路及清洗球淋洗浓配罐10 min后，泵入稀配罐;开启稀配循环泵，使1%枸橼酸溶液经稀配管路、钛棒过滤器、折叠滤芯过滤器、灌封管道循环10 min后，经终端过滤器、储液缸、灌封机36个灌装工位排尽，再打开各排污阀，排尽罐内、钛棒过滤器、折叠过滤器中的1%枸橼酸溶液;酸碱冲洗结束后，注入注射用水于浓配罐中，开启循环泵经循环管路及清洗球淋洗浓配罐10 min后，打开浓配罐和砂棒过滤器底部的排污隔膜阀，再打开排污阀，排尽罐内及砂棒过滤器中的注射用水;注入注射用水于浓配罐中开启循环泵，使注射用水经清洗球淋洗浓配管路循环10 min后，泵入稀配罐，开启循环泵，让注射用水溶液经稀配管路、钛棒过滤器、折叠滤芯过滤器、灌封管道环10 min，经终端过滤器、储液缸循后，灌封机36个灌装工位排尽，再打开各排污阀，排尽罐内、钛棒过滤器、折叠过滤器中的注射用水，此操作共3遍。配液管路系统和灌封机组的清洁有效期为10 h。

2.3 色谱条件 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇—0.5%冰醋酸溶液(5∶95)为流动相，流速1.0 mL·min-1，检测波长为281 nm，理论板数按丹参素钠峰计算应不低于5 000。

2.4 对照品溶液的制备 精密称取含量为98.0%的丹参素钠对照品14.21 mg置100 mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取20 mL置50 mL量瓶中，加水至刻度，摇匀。得丹参素钠浓度为55.7 mg·L-1的对照品溶液。

精密称取原儿茶醛对照品10.76 mg置100 mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5 mL置100 mL量瓶中，加水至刻度，摇匀。得浓度5.38 mg·L-1的对照品溶液。

3 清洁验证检验方法与结果

3.1 线性关系考察 分别取2.4项下丹参素钠、原儿茶醛对照品贮备液1、2、3、4、5 mL 置 10 mL 量瓶中，分别加水稀释至刻度，摇匀，作为供试液。精密量取供试液各20 μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，记录峰面积，由溶液浓度(C)对峰面积(A)线性回归，得回归方程:A=13.426C-1.655，r=0.999 9，A=83.203C-0.306 6，r=0.999 9。

3.2 检测限 取空白基线一段，计算其噪音峰高，再将丹参素钠对照品溶液(浓度为55.70 mg·L-1)、原儿茶醛对照品溶液(浓度为5.38 mg·L-1)用水稀释到适当的浓度进样，使其峰高为噪音峰高的3倍，经试验，此时的进样浓度为27.85、5.38 μg·L-1，即最低检出量为 0.6、0.1 ng。

3.3 精密度试验 取丹参素钠对照品溶液、原儿茶醛对照品溶液，对低(5.57、0.538 mg·L-1)、中(16.71、1.614 mg·L-1)、高(55.70、2.690 mg·L-1)浓度的样品溶液均分别平行测定了5次，以峰面积来考察精密度，计算低、中、高浓度组RSD分别为0.1% 、0.9%，0.1%、0.3%，0.1%、0.3%。表明仪器的精密度很好。

3.4 重复性试验 取同一批样品分别制成6份供试液，按含量测定的方法测定含量。结果丹参素钠、原儿茶醛含量的平均值为8.86、1.94 mg·L-1，RSD为0.3%、1.2%。

3.5 准确度试验 取已知丹参素钠含量为442.80 mg·L-1、原儿茶醛含量为94.86 mg·L-1的丹参滴注液样品1份，加入9份浓度约为55.70 mg·L-1的丹参素钠对照品溶液、浓度约为5.38 mg·L-1的原儿茶醛对照品溶液，分别混合均匀作为供试液，按丹参滴注液成品中丹参素钠含量检验方法检验，取此供试液进样2次。制备两份供试液，检测丹参素钠、原儿茶醛的含量分别为94.60、14.29、94.43、14.36 mg·L-1，平均回收率为100.21%、99.94%。

3.6 样品的检测 丹参素钠对照品溶液的制备:精密称取丹参素钠对照品(含量98.0%)0.012 16 g，置100 mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，从中精密量取2 mL置25 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得每1 mL中含丹参素钠为9.53 μg的对照品溶液。

原儿茶醛对照品溶液的制备:精密称取原儿茶醛对照品0.013 84 g，置100 mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，从中精密量取5 mL置100 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得每1mL中含原儿茶醛6.92 μg的对照品溶液。

表1 清洁水中丹参素钠和原儿茶醛的含量

测定法:分别精密吸取上述两种对照品溶液与清洁水各20 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得。

按上述色谱条件测定方法，测定了清洁水中丹参素钠和原儿茶醛的含量，结果见表1。

3.7 擦拭取样方法及取样回收率 棉签擦拭取样:取三块与设备类似的洁净的316L不锈钢板，分别在钢板上划出5 cm×5 cm的区域，用移液管精密量取丹参素钠、原儿茶醛对照品溶液(浓度约为100 mg·L-1)1 mL，将其尽量均匀地涂布在5 cm×5 cm区域内，晾干。取一支洁净的棉签，用注射用水充分润湿，握住棉签柄，以30°角与取样表面接触，用力使其稍弯曲，呈Z字形平稳而缓慢的擦拭取样表面。在向前移动的同时将其翻转从一边移到另一边，擦拭过程应覆盖整个表面，翻转棉签，让另一面也进行擦拭，但与前次擦拭移动方向垂直，如图1所示。

擦拭完成后，将棉签头剪下放入洁净瓶中，往瓶中精密加入25 mL注射用水，超声15 min，取此溶液为供试液，按丹参滴注液成品中丹参素钠、原儿茶醛含量检验方法检测丹参素钠、原儿茶醛的含量。计算回收率，丹参素钠及原儿茶醛的取样回收率均不得低于80%。

图1 擦拭示意图

4 讨论

丹参滴注液为静脉滴注，生产结束后清洁剂为1%氢氧化钠溶液、1%枸橼酸溶液和注射用水，清洁后残留物限度≤10 mg·L-1［8-11］。本实验结果表明，该清洁方法能够满足丹参滴注液生产结束后的清洁要求，该实验条件能够满足丹参滴注液清洁验证残留物检测;结合TOC和电导率的检测，能够准确有效的判断丹参滴注液清洁验证的有效性、可靠性、重现性。

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