川丹通脉片质量标准研究

汪涛胡卫东刘一佳李育芳曾凡波

(1.解放军武汉疗养院，430074；2.第二炮兵指挥学院训练部，430012；3.华中科技大学同济医学院药学院，430030)

川丹通脉片质量标准研究

汪涛1胡卫东1刘一佳2李育芳1曾凡波3

(1.解放军武汉疗养院，430074；2.第二炮兵指挥学院训练部，430012；3.华中科技大学同济医学院药学院，430030)

目的 建立川丹通脉片的质量控制方法。方法 用TLC法对川芎、丹参进行定性鉴别；HPLC法测定川丹通脉片中丹参所含丹参素钠的量，选用Nova-pak ODS(250 mm×4.6 mm，5 μm)色谱柱，流动相为甲醇-0.5%磷酸二氢钾溶液(0.1%磷酸溶液调pH至4.0，15∶85)检测波长：280 nm。结果 TLC检出了川芎、丹参特征斑点，丹参素钠检测浓度在10.0～100.0 μg/mL范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系(r＝1.00)，加样回收率为98.58%，RSD为0.74%。结论 质量控制方法简便、稳定、可靠，可作为本品的质量控制方法。

川丹通脉片；质量标准；高效液相色谱法；薄层色谱法

川丹通脉片为解放军武汉疗养院研制开发的纯中药制剂，于2011年取得军队医疗机构制剂临床研究批准文号：广L2011001，具有活血化瘀，祛痰开窍，扩张血管、增进心脑动脉血流量的作用。用于治疗心绞痛，心肌梗死，脑血栓，脑卒中后的偏瘫，失语，口眼歪斜，头痛头晕等症。为更好地控制产品质量，对川芎、丹参两味药材进行了薄层色谱鉴别，并采用高效液相色谱法(HPLC)对方中丹参所含丹参素钠进行了含量测定，为该制剂建立完善的质量标准提供了依据。现总结如下。

1 仪器与试药

日本岛津LC-20A高效液相色谱仪(SPD-M20A紫外-可见光检测器，SIL-20AC自动进样器，CTO-20AC柱温箱)；电子天平(CP225D，1/10万)；KQ-500B型超声波清洗器(江苏省昆山市超声仪器有限公司)。

丹参素钠对照品(供含量测定用，批号：110855-200508)、丹参酮ⅡA对照品(批号：110766-200214)由中国药品生物制品检定所提供。川丹通脉片 (批号为：130114、130221、130310、130403、130517)由解放军武汉疗养院提供。硅胶H薄层板、硅胶G薄层板均由青岛海洋化工厂分厂提供。乙腈(色谱纯，美国Fisher公司)；水为纯水机净化水(纯水机型号Millipore Milli-Qbiocel型纯水器)。其余试剂均为分析纯。

2 薄层色谱鉴别

2.1 川芎 取本品20片，研细，称取2 g，加乙醚20 mL，加热回流1 h，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯2 mL使溶解，作为供试品(样品)溶液。另取川芎对照药材0.3 g，同法制成对照品溶液。再取缺川芎的模拟片20片，按供试品(样品)溶液制备法制备阴性液。照薄层色谱法[1]附录(ⅥB)34试验，吸取上述3种溶液各10 μL分别点于同一硅胶G254薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(3∶1)为展开剂，展开，晾干，置紫外灯(254 nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的一个荧光主斑点，阴性液无此斑点[2]。

2.2 丹参 取本品20片，研碎，称取粉末4 g，加乙醚5 mL，振摇，放置1 h，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1 mL使溶解，作为供试品(样品)溶液。另取丹参酮ⅡA对照品，加乙酸乙酯制成1 mL含2 mg的溶液，作为对照品溶液。再取缺丹参的模拟片20片，按供试品(样品)溶液制备法制备阴性液。照薄层色谱法[1]附录(ⅥB)34试验，吸取上述两种溶液各5 μL分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同的暗红色斑点[3]。

3 丹参素钠的测定[4]

3.1 对照品溶液的制备 取丹参素钠对照品适量，精密称定，加甲醇制成浓度为50.0 μg/mL的溶液，摇匀，即得。

3.2 供试品溶液的制备 取本品20片，研碎置分液漏斗中，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，密塞，称重，超声处理30 min，放冷，再称重，用上述溶剂补足失重，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

3.3 阴性对照溶液的制备 按处方比例及工艺条件制备缺丹参的阴性样品，按“3.2”项下方法制备阴性对照溶液。

3.4 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱：Nova-pak ODS(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：甲醇-0.5%磷酸二氢钾溶液(0.1%磷酸溶液调pH至4.0，15∶85)；流速：1.0 mL/min；检测波长：280 nm；进样量：10 μL。理论塔板数按丹参素钠峰计算应不低于4 000。在上述色谱条件下取丹参素钠对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各10 μL进样，结果表明样品中其他成分对丹参素钠的测定无干扰。色谱(图1)。

3.5 标准曲线的制备 精密称取丹参素钠对照品5.0 mg，置25 mL量瓶中，加50%甲醇溶解并稀释至刻度。精密吸取上述溶液0.5、1、1.5、2、3、5 mL，置10 mL量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀。按上述色谱条件取10 μL进样，记录色谱图。以检测浓度(X)为横坐标，峰面积积分值(Y)为纵坐标，制备标准曲线，得回归方程为Y＝12.127X－17.331(r＝1.00)。结果表明，丹参素钠检测浓度在10.0～100.0 μg/mL范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。

图1 高效液相色谱图

3.6 精密度试验 精密吸取对照品溶液，按照上述色谱条件连续进样5次，测定峰面积。结果，RSD＝0.89%，表明仪器精密度良好。

3.7 重复性试验 取同批次样品，按照“3.2”项下方法制备6份供试品溶液，测定并计算其含量。结果，丹参素钠平均含量为2.05 mg/粒，RSD＝2.04%，表明方法重复性良好。

3.8 稳定性试验 取同一供试品溶液，于室温下放置，在不同时间段(0、2、4、8、16、24、48 h)按上述色谱条件进样测定。结果，RSD＝1.93%，表明供试品溶液在48 h稳定性良好。

3.9 加样回收率试验 精密称取已知含丹参素钠为2.01 mg的6份川丹通脉片研碎细粉，分别精密加入不同质量的丹参素钠对照品，每个质量平行2份，按照“3.2.2”项下方法制备供试品溶液，测定并计算其含量和加样回收率，结果(表1)。

3.10 样品含量测定 取5批样品，分别按照“3.2”项下方法制备供试品溶液，测定并计算其含量，结果(表2)。

表1 加样回收率试验结果(n＝6)

表2 样品测定结果

4 讨论

本制剂中丹参是经水提取干燥后制成片剂，因此用超声提取方法进行含量测定操作简便，经与回流提取比较，提取效果无差别；提取溶剂选择了提取效果较好的50%乙醇。

采用薄层色谱法对川丹通脉片中川芎、丹参两味药材进行鉴别，并采用高效液相色谱法对方中丹参所含丹参素钠进行含量测定，方法简便，专属性、重复性好，且结果稳定[5]，可用于川丹通脉片的质量控制。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[Z].北京：中国医药科技出版社，2010.

[2]张永玲.冠心康胶囊质量标准研究[J].中国医药指南，2010，8(5)：44-46.

[3]崔淑云，王登旭.益肝康口服液的制备及质量标准研究[J].中国药房，2008，19(3)：192.

[4]李华，李明，钟雪梅，等.复方心安软胶囊质量标准研究[J].中国药房，2010，21(11)：1027-1029.

[5]邹蔼珍.乐脉颗粒的质量标准研究[J].中国药房，2005，16(15)：1178.

2013-08-12)

1005-619X(2014)03-0235-02

10.13517/j.cnki.ccm.2014.03.026