黎族通瘀去炎汤的药效学初步和急性毒性实验研究

张一云　唐菲　高雨等

【摘要】目的：探讨通瘀去炎汤对小鼠急性毒性实验、抗炎、止血及化瘀的作用。方法：采用最大给药量测定方法评价通瘀去炎汤的毒性，采用小鼠耳廓肿胀测定方法和玻片法分别测定通瘀去炎汤的抗炎作用及凝血时间，采用鸡红细胞吞噬法对化瘀作用进行评价。结果：通瘀去炎汤达到最大给药量160g/kg时未见毒性反应；通瘀去炎汤高、中、低剂量组（16 g/kg、8g/kg、4g/kg）均能明显抑制二甲苯所致的小鼠耳廓肿胀（P<0.05）、能加速小鼠凝血的时间（P<0.05）、显著提升小鼠巨噬细胞吞噬能力，增加吞噬率与吞噬指数（P<0.05）。结论：通瘀去炎方具有良好的抗炎、止血、化瘀作用，且安全阈值较高。

【关键词】黎药；通瘀去炎汤；药效学；急性毒性；实验研究

【中图分类号】R29【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2014）17-0002-03

A preliminary pharmacodynamic and acute toxicity study of Tongyuquyantang of LiZhang Yi-yun1， Tang Fei1， Gao Yu1， Hou Shi-feng1，Yang Li-na2

1.Pharmaceutical institute of Hainan Province， Hainan Province，Haikou 571100，China；

2.Hainan Li Nationality Folk Medicine Research Association， Hainan Province，Haikou 572200，ChinaAbstract：Objective To study acute toxicity and pharmacodynamic effects of anti-inflammatory， hemostasia and removing blood stasis of Tongyuquyantang（TYQY）. Methods Acute toxicity of TYQY was evaluated by determination of maximum dose，the anti-inflammatory effect and clotting time were determined by mouse ear swelling and slide method，and stasis effect was evaluated by chicken erythrocytes phagocytosis. Results The maximum dose of TYQY（160g/kg） has no toxicity. TYQY（16g/kg、8g/kg、4g/kg） could significantly inhibit mouse ear edema induced by dimethylbenzene （P<0.05），accelerate clotting time（P<0.05），significantly improve the ability of murine macrophage phagocytosis，increase phagocytic rate and phagocytic index （P<0.05）. Conclusion TYQY has a good effect of anti-inflammatory， hemostasis ，removing blood stasis， and has the advantages of high safety threshold.

Keywords：Li medicine；Tongyuquyantang；pharmacodynamic； Acute toxicity；Experiment study

黎族民间医药作为中国传统民族用药的一种，用药历史具有3000多年[1]，但由于信息沟通方面的问题，一直未能得到有效的传承和发展[4]。本课题研究的是黎族杞方言地区（五指山）药王使用的通瘀去炎汤，由黎族民间医药研究协会杨丽娜女士提供，该方由4味药组成，原植物皆产在海拔100～500米的丘陵和山地，在当地主治各类急性炎症及内外出血。为进一步开发该方，对处方进行了急性毒性研究和药效学的初步研究，为该方的临床应用提供了实验数据。

1实验材料与方法

1.1实验材料

1.1.1实验动物KM小鼠，体重18～20g，雌雄各半，由长沙市天勤生物技术有限公司提供，许可证号：SCXK（湘）2009-0012，SPF动物房饲养。

1.1.2实验药物通瘀去炎汤由4味药组成，取通瘀去炎汤处方药材粉碎，用8倍量的水提取半小时，滤过，余下的药渣用6倍量的水继续提取半小时，合并滤液，浓缩至2g/ml（每ml含生药材2g），备用；云南白药胶囊，0.25g/粒，国药准字Z53020799，由云南白药集团股份有限公司生产，批号：ZBA1305；阿莫西林克林维酸钾片：片剂，0.375g/片，国药准字H20043183，由石药集团中诺药业（石家庄）有限公司生产，批号：160130108。

1.1.3试剂及仪器二甲苯、50ul移液枪、生物通风安全柜、离心机、显微镜、灌胃针、干净载玻片、剪刀、镊子、1ml注射针、生理盐水、瑞氏染液、1%鸡红细胞。

1.2实验方法

1.2.1急性毒性试验[2-3] 经预实验，按最大体积（40ml/kg），最大浓度（2g/ml）灌胃给药小鼠，未发现动物死亡，遂进行最大给药量实验。取18～20gKM种小鼠40只，雌雄各半，随机分成两组，即正常对照组和通瘀去炎汤组，每组20只，于实验前禁食1晚，通瘀去炎汤组按40ml/kg体重，2g/ml药物浓度，一天内灌服2次，正常对照组灌服等量容积的蒸馏水，给药后连续观察14d小鼠的活动、体重及饮食状况，并详细记录，计算最大给药量。选择最大给药量的1/10、1/20、1/40分别作为药效学实验药物的高、中、低剂量组。endprint

1.2.2抗急性炎症实验[2-3]取健康昆明种小鼠，18～20g，雌雄各半，随机分为5组，每组10只动物，即空白对照组（给以相应容积的蒸馏水）、阿莫西林克林维酸钾片组（0.21g/kg）、通瘀去炎汤高剂量组（16g/kg）、中剂量组（8g/kg）、低剂量组（4g/kg），小鼠按0.2ml/10g/d灌胃给药1次，连续给药4d，末次给药30min后，以移液枪在小鼠右耳涂以二甲苯0.05ml/只，左耳作为对照不进行任何处理，15min后处死动物，用直径8mm的打孔器将左右双耳同部位等面积切下，以万分之一天平精密称量，按以下公式计算并比较肿胀值、肿胀率及抑制率，，以此评价药物的抗炎作用：肿胀值=右耳片重量-左耳片重量；肿胀率（%）=（肿胀值/左耳重量）×100%；抑制率（%）=（给药组平均肿胀率-对照组平均肿胀率）/对照组平均肿胀率×100%。

1.2.3止血实验[2-3]取健康昆明种小鼠，18～20g，雌雄各半，随机分为5组，每组10只动物，即空白对照组（给以相应容积的蒸馏水）、云南白药组（0.26g/kg）、通瘀去炎汤高剂量组（16g/kg）、中剂量组（8g/kg）、低剂量组（4g/kg），各组小鼠按0.2ml/10g/d灌胃给药1次，连续给药4d，末次给药30min后，用毛细管从小鼠球后静脉丛取血于载玻片，血滴直径约为5mm，立即用秒表计时。每隔10s（second）用清洁大头针自血滴边缘向里轻轻挑动一次，并观察有无血丝挑起。从采血开始至挑起血丝止为凝血时间，比较各组凝血时间的差异。

1.2.4化瘀实验[2-3]取健康昆明种小鼠，18～20g，雌雄各半，随机分为5组，每组10只动物，即空白对照组（给以相应容积的蒸馏水）、云南白药组（0.26g/kg）、通瘀去炎汤高剂量组（16g/kg）、中剂量组（8g/kg）、低剂量组（4g/kg），各组小鼠按0.2ml/10g/d灌胃给药1次，连续给药5d。给药第2天开始腹腔注射6%淀粉溶液1ml，连续3d。末次给药后，小鼠腹腔注射1%鸡红细胞悬液2ml，轻揉腹部使之分散。30min后脱椎处死小鼠，腹腔注射生理盐水2ml，剪开腹部用吸管吸取腹腔液，滴加一滴于干净载玻片上，再滴加一滴生理盐水稀释。10min后弃去生理盐水，待标本稍微干燥，在其上滴加3～4滴瑞氏染液染色5min，甩去染液，蒸馏水温柔冲洗，晾干后置于显微镜下观察。观察并统计40X镜下5个视野内的巨噬细胞的总数、吞噬了红细胞的巨噬细胞数及每个巨噬细胞吞噬的红细胞数。按照如下公式计算并比较吞噬率及吞噬指数。吞噬率=（吞噬红细胞的巨噬细胞/总计数巨噬细胞）×100%；吞噬指数=总吞噬的红细胞数/吞噬红细胞的巨噬细胞数。

1.2.5统计方法数据以“均数±标准差”（x±s）表示，数据呈正态分布时进行t检验，不呈正态分布采用非参数检验。以P<0.05表示差异具有统计学意义。

2结果

2.1急性毒性实验（最大给药量试验） 在无法测出小鼠LD50情况下，进行了最大给药量实验。实验中观察到正常对照组和通瘀去炎汤组小鼠均于给药后10min内活动稍有缓慢，30min恢复正常，给药14天内，动物均无死亡，活动及饮食皆正常，眼、鼻、口无粘液性分泌物。对体重和进食量进行了统计，与对照组比较，差异无统计学意义（P>0.05）。计算最大给药量为 160g/kg，相当于临床人日用生药量（即生药0.5g/kg体重）的320倍。

3讨论

黎族杞方言地区通瘀去炎汤主要由四味药材组成，其中一味为海南草珊瑚，其他三种皆为产在海南热带雨林地区较为常见的草药[5]。本文对通瘀去炎汤进行了急性毒性实验和抗炎、止血、化瘀的药效学研究。结果表明，通瘀去炎汤的最大给药量为160g/kg，相当于临床人日用生药量（即生药0.5g/kg体重）的320倍，安全阈值较高。同时，通瘀去炎汤高、中、低剂量组（16 g/kg、8g/kg、4g/kg）均能明显抑制二甲苯所致的小鼠耳廓肿胀（P<0.05）、能加速小鼠凝血的时间（P<0.05）、显著提升小鼠巨噬细胞吞噬能力，增加吞噬率与吞噬指数（P<0.05）。其抗炎作用与与阿莫西林克林维酸钾片（0.21g/kg）效果相当，止血作用与云南白药胶囊（0.26g/kg）相当，而在化瘀作用上，通瘀去炎汤高、中剂量（16 g/kg、8g/kg）明显强于云南白药胶囊（0.26g/kg），通瘀去炎汤低剂量（4g/kg）与云南白药胶囊（0.26g/kg）的效果相当。研究结果提示，本处方具有较好的抗炎止血作用，特别在清除由血管损伤，红细胞外溢所引起的淤青和肿胀方面强于云南白药。而对于本处方药效实验的深入研究、长期毒性实验及机制研究等将在接下来的工作中进行进一步的探讨。

参考文献

[1]《黎族简史》编写组.黎族简史[M].广州：广东人民出版社，1980.

[2]陈奇.中药药理研究方法学[M].北京：人民卫生出版社，2006：656-658.

[3]徐叔云.药理实验方法学[M].北京：人民卫生出版社，1991.

[4]郑才成.海南黎药发展研究概况[J].中国民族医药杂志，2007，13（5）：2-3.

[5]郑希龙，陈红锋，李榕涛，等.海南润方言黎族药用民族植物学研究[J].云南植物研究，2008，30（2）：195-210.

[6]关亚丽，潘琴，黄敏仁.民族植物学与海南黎药资源开发[J].南京林业大学学报（自然科学版），2009，33（4）：145-149.

（收稿日期：2014.07.16）endprint