安顺地区烤烟漂浮育苗TMV发生现状及致病因素分析

范成平 左锐 刘学辉

摘要 [目的]了解安顺地区漂浮育苗TMV病毒发生规律以及导致大棚内发生大面积侵染的原因。[方法]于2011～2013年对安顺市主要烤烟种植区（县）病毒检出率、育苗点不同大棚烟苗带毒率以及TMV高发大棚周边环境进行调查。[结果]安顺市各烟区所有检测批次的样品均有一定的带毒率，不同烟区烟苗风险样品率及高风险样品率不同，其中紫云县烟苗TMV阳性检出率为历年最高。漂浮苗带毒率与育苗棚管理水平密切相关。随着育苗集约化程度提高，烟苗TMV 阳性检出率提高，感染TMV的风险增大。设施不齐全、周边生态环境、育苗管理操作不到位为TMV传播提供了初侵染原和重要途径，导致烟苗带毒率大大增加。[结论]为防治烟草普通花叶病及提高烤烟的产量及品质提供了理论依据。

关键词 烟草普通花叶病;发生规律;原因分析

中图分类号 S572 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2014）33-11784-02

Occurring Situation and Pathogenic Factors of TMV for Tobacco Float Seedling Production in Anshun Area

FAN Cheng-ping1， ZUO Rui2*， LIU Xue-hui3

（1. Anshun Company of Guizhou Tobacco Company， Anshun， Guizhou 561000;2. Guizhou Institute of Biotechnology， Guiyang， Guizhou 550006;3. Guizhou Institute of Plant Protection， Guiyang， Guizhou 550006）

Abstract [Objective] The occurring law and pathogenic factors of TMV for tobacco float seedling production in Anshun area were understand. [Method] The detection rate of TMV from main flue-cured tobacco planting areas， virus carried rate of seedlings in different greenhouses of seedling points and the surrounding environment of TMV high-incidence greenhouse in Anshun were investigated from 2011 to 2013. [Result] All the samples from each tobacco planting area of Anshun had certain virus carried rate; the risk sample rate and high risk sample rate of seedlings were different in different areas， among them the positive detection rate of seedlings TMV from Ziyun County was the highest for each year. The virus carried rate of float seedlings was closely related with management level of greenhouse. With the improvement of seedling intensive degree， the positive detection rate of seedlings TMV increased， and then the risk of TMV infecting increased. The lack of facilities， surrounding environment and the lack of seedling management provided initial infective source and important way for TMV so as to lead the increase of virus carried rate of seedlings. [Conclusion] The results provide theoretical basis for control of TMV and improvement of tobacco yield and quality.

Key words TMV; Occurring law; Cause analysis

基金项目 烟草病毒病防治体系的建立（201118）。

作者简介 范成平（1980-），男，贵州安顺人，助理农艺师，从事烟草种植收购工作。*通讯作者，副研究员，从事植物保护及农药剂型研究。

收稿日期 2014-10-17

烟草普通花叶病（TMV）是世界各国烟草生产上的一类主要病害，在我国烟叶生产中，尤以贵州、云南、河南等省区受害较重，给烟叶生产带来严重损失[1]。烟草病毒病直接影响烟叶的产量、质量和种植效益，幼苗期感染或大田初期感染，损失可达30%～50%[2]。发生严重时，甚至可能造成烟田绝收。近年来，在贵州省大部分烟区，TMV的发生流行呈较快的上升趋势，安顺地区尤其严重。根据张崑等对安顺市烟草普通花叶病的调查，田间株发病率一般为30%～50%，部分田块烟草花叶病毒病的发生率高达90%以上[3]。它的发生及危害已成为烤煙生产向优质、适产、高效目标迈进的一个主要障碍[4-5]。

烟草普通花叶病为系统侵染性病害，烟株根、茎、叶均可带毒，通过机械接触传播，TMV具有较广泛的寄主范围，可侵染36个科的350多种植物[6]，且在常温条件下致病力可达数十年，在干燥病组织内存活30年以上[7]。据报道，剪叶是漂浮育苗中TMV引起的烟草普通花叶病在苗期传播的最主要、最有效的途径[8-9]。在苗盘、基质和池水中加入的TMV病叶汁液，在育苗过程中也可通过根部侵染烟苗[9]。研究表明，受TMV污染的水源、漂浮盘、营养液、基质及周边杂草不是TMV在漂浮育苗期间传播的主要途径，但却是病毒病传播的主要初侵染源，是TMV在漂浮育苗中传播的主要初侵染源[9-11]，剪叶过程中极少量的病苗就会导致烟草普通花叶病毒病的迅速传播[9]。笔者近3年来对安顺地区1区3县主要育苗点共计4 980个烟草样品进行了病毒检测，并对发病严重的大棚进行了致病原因分析，以期为提高烤烟的产量和品质提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

TMV检测试剂盒（含TMV包被抗血清、TMV碱性磷酸酶标记的酶标二抗、显色底物PNP、阳性质控物、ECI缓冲液、PBST缓冲液、GEB缓冲液、Tween-20、96孔酶标板）和阴性质控物均为美国Agdia公司产品;ELX800酶标仪为美国BioTeK公司产品。

1.2 方法

1.2.1

取样方法。2011～2013年对安顺烟区各个烤烟育苗点进行取样，其中，每个育苗点按小棚数量的10%～20%进行随机取样，单体大棚按每个棚育苗池数量的50%进行随机取样，联体大棚每个棚育苗池数量的100%进行随机取样。

采用5点定点取样，每个点周围取样5片中上部整叶，混合为1个烟样，共计25片。采用统一样品袋和记号笔，采集人员进入棚群必须使用一次性塑料袋套脚和一次性塑料手套，每采集完1个样必须更换一次手套。

样品于移栽前2～7 d进行大规模取样，样品烟叶平铺于样品袋中并封口保存（若24 h送样，样品于4～6 ℃保存）。

1.2.2

TMV检测方法。

参考Agdia试剂盒的说明书，采用抗原直接包被ELISA法进行病毒检测。在加入PNP底物显色后，用酶标仪在405 nm波长下测量OD值;当样品OD值/阴性对照OD值≥2为阳性结果。每批样品于采样后3 d内检测完毕。

1.2.3

TMV高发大棚调查。在TMV高发大棚进行实地调研，对大棚周围环境、水源进行勘察，最后取水样及周边植物样本进行TMV病毒检测。

2 结果与分析

2.1 安顺烟区烟苗带毒率检测分析

2011～2013年，安顺市1区3县共计检测样品4 980个，2011年1 276个样品，2012年1 634个样品，2013年2 070个样品，TMV阳性检出率分别为14.66%、21.30%和18.99%。安顺市各烟区所有检测批次的样品均有一定的带毒率，不同烟区烟苗风险样品率及高风险样品率不同。紫云县烟苗TMV阳性检出率为历年最高，分别为25.90%、29.98%、31.67%;阳性检出率最低的分别为2011年平坝县的6.08%、2012年普定县的10.99%、2013年西秀区的12.18%。各县（区）烟苗TMV阳性检出率年间有较大差异，紫云县病毒检出率呈现逐年增加的趋势，平坝县与西秀区2012年病毒检出率高于其他2年，普定县2012年病毒检出率最低。总体而言，2012年平均TMV阳性检出率高于各年度平均值（表1）。

表1 2011～2013年安顺地区各烤烟种植县区样品检测结果

2.2 不同大棚烟苗带毒率检测分析

2011～2013年安顺烤烟种植区育苗点包括育苗工场、小拱棚以及插地大棚。对不同棚型烟苗TMV检测结果表明，不同棚型培育烟苗TMV带毒率有明显差异，小拱棚及插地大棚烟苗TMV阳性检出率最低，随着育苗集中度的提高，烟苗感染TMV的风险增大。小拱棚以及插地大棚覆盖面积小，规模化程度低，基本不进行剪叶，病毒检出率相对较低。育苗工场烟苗覆盖整个安顺烤烟种植区的70%，规模化程度高，在烟苗移栽前一般要进行2～3次剪叶，大大提高了TMV病毒的感染几率，是重点检测对象。3年来，对10个主要烤烟育苗工场的样品检测结果显示，天龙育苗工场历年来病毒检出率最低，分别为3.13%、4.55%、2.33%。2011年白石岩育苗工场病毒检出率最高，为36.26%;2012年马场育苗工场、白石岩育苗工场均出现严重问题，病毒检出率均超过68%，所育种苗全部作废;2013年十字育苗工场和茅坡育苗工场出现较大问题，病毒检出率高达41.79%和46.15%（表2）。总体而言，2011年病毒检出率最低，2012年病毒检出率最高，主要原因是2012及2013年均出现TMV病毒毁灭性侵染的大棚。

表2 安顺主要烟区育苗工场样品检测结果

注：“-”表示无烟草样品检测。

2.3 TMV高发大棚周边环境调查分析

调研分析的大棚有：2011年的白石岩育苗工场、毛栗哨育苗工场;2012年的马场育苗工场、毛栗哨育苗工场、茅坡育苗工场、梅旗育苗工场、黄土育苗工场、白石岩育苗工场;2013年的十字育苗工场、马场育苗工场、毛栗哨育苗工场、茅坡育苗工場、云盘育苗工场、黄土育苗工场。

经实地调研结果分析显示，2011年白石岩育苗工场及2012年的梅旗育苗工场属于当年建设的新育苗点，育苗时大棚尚未完全竣工就草草投入使用，环境比较零乱，消毒设施不完善，管理不到位，导致TMV大面积侵染。2012年的马场育苗工场和白石岩育苗工场均不具备独立的供水系统，从周边小河道引水，在河道附近堆积大量上年剩余的烟杆，造成水体污染，水源取样检测结果呈阳性，同时马场育苗工场还是当年新建大棚，管理不到位，导致TMV毁灭性侵染所育烟苗全部报废。2012～2013年的茅坡育苗工场、黄土育苗工场管理不到位，大棚周围杂草丛生，经采样检测部分杂草呈阳性结果。十字育苗工场与云盘育苗工场2013年病毒检出率大幅提高，其主要原因可能是技术人员更替，苗期管理出现问题，如剪叶过程剪叶机消毒不彻底，导致大面积感染。天龙育苗工厂管理严格，大棚周围无杂草，育苗过程严把质量关，每一步均做到严格消毒，病毒检出率一直保持较低水平。毛栗哨育苗工场随着管理人员意识的提高，以及对周围环境及育苗过程的各个环节要求的不断提高，病毒检出率呈逐年下降趋势。

3 结论与讨论

通过对2011～2013年安顺市烟区4 980个烟苗样品进行TMV阳性检测分析显示，所有检测批次的样品均有一定的带毒率，不同年度间烟苗TMV 阳性检出率有较大差异，特别是2012年，有2个育苗工场水源出现问题，导致整个工场的烟苗报废，损失巨大。

对不同大棚烟苗TMV检测结果表明，不同棚型培育烟苗TMV带毒率有明显差异，小拱棚及插地大棚烟苗TMV阳性检出率最低，育苗工场病毒检出率普遍偏高，随着育苗集中度的提高，烟苗感染TMV的风险增大。烟苗带毒率与育苗集约化程度有密切关系。小拱棚及插地大棚覆盖面积小，规模化程度低，基本不进行剪叶，病毒检出率相对较低。育苗工场烟苗覆盖整个安顺烤烟种植区的70%，规模化程度高，在烟苗移栽前一般要进行2～3次剪叶，大大提高了TMV病毒的感染几率。

通过对各年TMV高发大棚进行实地调研，发现漂浮苗带毒率与育苗棚管理水平密切相关。2011年白石岩育苗工场及2012年的梅旗育苗工场和马场育苗工场属于新建育苗点，管理不到位，设施不齐全，导致烟苗带毒率大大增加。供水设施应独立，否则，一旦水源污染，将导致整个育苗工场的烟苗报废。清理周围环境，去除杂草减少初侵染原。剪叶等育苗管理操作是烟草普通花叶病毒病的传播的重要途径。随着剪叶次数增加，烟苗OD值增大，烟苗带毒率增加。减少剪叶次数是降低烟苗带毒率的有效措施。

参考文献

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