紫外分光光度法测定半枝莲黄芩苷的含量

戴平 廖迎 黄凤香 韦汉燕

【摘 要】目的：建立紫外分光光度法测定半枝莲黄芩苷的含量的方法。方法：采用50%乙醇回流提取工艺和紫外分光光度法测定半枝莲中黄芩苷的含量，以黄芩苷为对照品，在278nm 波长处测量。结果：得黄芩苷回归方程y=56.985x+0.0083（r2=0.9996），表明黄芩苷在0.00272～ 0.0136mg/mL浓度范围内线性关系良好，平均加样回收率（n=6）以黄芩苷计为99.8%，RSD 为0.58%。结论：此方法操作简单，精密度、稳定性和重复性良好，可以用于半枝莲中黄芩苷的含量测定方法之一。

【关键词】半枝莲;黄芩苷;含量测定;紫外分光光度法

【Abstract】Objective： Establish UV spectrophotometry banzhilian baicalin content method. Methods： With 50% ethanol extraction process and ultraviolet spectrophotometry banzhilian content baicalin， baicalin as standard， measured at 278nm wavelength. Results： Baicalin regression equation was y=56.985x +0.083 （r2=0.9996）， indicates that baicalin in the concentration range of 0.00272～0.0136mg/mL good linear relationship， the average recovery （n=6） to 99.8 meter baicalin ， RSD was 0.58%. Conclusion： This method is simple， precision， stability and good reproducibility can be used banzhilian baicalin one method for the determination of the content.

【Key words】Barbata;Baicalin;Determination;UV spectrophotometry

黄芩苷异名贝加灵，黄芩素[1]，淡黄色针状结晶，熔点223℃～225℃。可溶于碳酸氢钠、碳酸钠、氢氧化钠等碱性溶液，但在碱性溶液中不稳定，渐变成暗棕色，几乎不溶于水[2-3]。黄芩苷来源于唇形科植物黄芩根，并头草叶和根，紫葳科植物木蝴蝶叶和茎皮，车前科植物大车前叶[4-5]。黄芩苷具有多种生理活性，如对神经元的保护作用，可促进神经干细胞向神经元分化;对脑缺血、脑缺血/再灌注损伤的保护作用;对脑损伤的保护作用，黄芩苷能够抑制蛋白激酶，减少锥体细胞延迟性死亡;抗炎作用，黄芩苷对肺炎衣原体引起的炎症有明显的抑制作用;抗心律失常，黄芩苷对肾上腺素β1和β2受体均有阻断作用，能竞争性拮抗多种激动剂导致的心房收缩性和自律性增高;降血作用，黄芩苷具有明显的排钠利尿作用，从而减少外周血容量及心输出量，导致血管阻力降低，血压下降;调节血脂，抗动脉粥样硬化，对心肌的保护作用以及对肾脏的保护作用和抗肿瘤作用等。目前黄芩苷主要应用于治疗慢性乙肝和早期肝硬化;防治糖尿病并发症;治疗全身炎症反应综合征;以及在可复性牙髓炎盖髓术中的应用[6]。

半枝莲（Scutellaria barbata D.Don）为唇形科黄芩属植物，以干燥全草入药。辛、苦、寒。归肺、肝、肾经。清热解毒，化淤利尿，用于疗疮肿痛，咽喉肿痛，跌扑伤痛，水肿，黄疸，蛇虫咬伤[7]。化学成分主要包括：黄酮类化合物、二萜及二萜内酯类化合物、多糖类成分以及其他成分。药理作用包括：解热作用、抗癌作用、抗衰老作用、护肝作用、免疫调节作用、抑菌作用、抗病毒作用等[8]。已从半枝莲中提取分离出27个黄酮类化合物，类型丰富，含量比较高，如黄芩苷、野黄芩苷、木犀草素等。现代药理研究表明黄酮类成分是半枝莲发挥抗肿瘤、解热、抗炎、保肝作用的主要有效成分[9]。半枝莲临床应用广泛，是一味有研究价值的中药。半枝莲在民间使用广泛，历史久远， 具有活血化瘀、凉血止血、清热解毒之功效，临床广泛地用于肿瘤的治疗。既能活血化瘀，又能凉血止血，止血而不留瘀，化瘀而不伤正，应是半枝莲治疗肿瘤时的一大优势。因而，半枝莲散瘀止血、清热解毒的有效部位值得研究。在大量临床应用中，半枝莲常与白花蛇舌草、半边莲配伍治疗癌症、肝炎等病。目前，药典只有记载半枝莲总黄酮含量的测定法，本文报道中药半枝莲中黄芩苷的提取及含量测定。

1 实验仪器与材料

UV2550紫外光光度计（日本岛津公司），IS09001电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）。氢氧化钠（汕头市西陇化工厂有限公司）。盐酸（汕头市西陇化工厂有限公司）。95%乙醇（天津市百世化工有限公司）均為分析纯。黄芩苷对照品（北京恒元启天化工技术研究院北京世纪奥科生物技术有限公司联合研制）。半枝莲（广西产）。

2 实验方法与结果

2.1 对照品试液的配制

精密称取黄芩苷对照品6.8mg， 置25mL量瓶中， 加入适量50%乙醇，水浴加热使黄芩苷完全溶解，再加入50%乙醇至刻度，摇匀，即得对照品溶液（浓度0.272mg/mL）。

2.2 样品供试品的提取以及制备

称取粉碎后的半枝莲粗粉60g，以300mL 50%乙醇溶液，回流提取1小时，趁热抽滤。滤渣加入100ml 50%乙醇继续回流提取30分钟，趁热抽滤，合并两次滤液。滤液水浴加热挥发至无醇味，40℃条件下加浓盐酸调节pH 1～2，80℃条件下保温30分钟，静置12小时。离心沉淀，加适量水搅匀，加入40%氢氧化钠调节pH 至7，加适量50%乙醇，抽滤，滤液加入浓盐酸调节pH 1～2，充分搅拌，80℃条件下保温30分钟，抽滤，沉淀依次用水，50%乙醇洗涤，95%乙醇洗涤，然后于60℃干燥至恒重，得黄芩苷样品[10]。精密称量黄芩苷样品50mg样品，以50%乙醇定容于100mL容量瓶中，备用。

2.3 测定波长的选择

取适量的黄芩苷对照品与样品溶液，分别置于100 mL 容量瓶中，加50%乙醇定容至刻度，以不加对照品或样品的隐性试剂为空白，立即测定。在 200-360 nm 波长范围内扫描，对照品与样品溶液在278nm处均有最大吸收，故选择278nm波长为测定波长。

2.4 标准曲线绘制

精密量取黄芩苷对照品溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL，分别置100mL容量瓶中，用50%乙醇定容，以相应试剂为空白，在278nm测定波长处测定吸光度A。以A纵坐标，浓度C为横坐标，得回归方程y=56.985x+0.0083（r =0.9999），表明黄芩苷在0.00272至0.0136mg/mL浓度范围内线性关系良好。

2.5 精密度试验

精密量取供试品溶液2mL至 25mL 容量瓶中，按“標准曲线的绘制”项下的方法操作，并以相应试剂为空白，在波长278nm处测定吸光度。连续6次，计算吸光度的RSD为0.14%，表明仪器精密度良好。

2.6 重现性试验

称取同一批样品5份，每份60g，按供试品溶液制备方法进行平行制备，每份取2 ml提取液，按“标准曲线的绘制”项下的方法操作，并以相应试剂为空白，在波长278nm处测定吸光度。计算半枝莲样品的黄芩苷含量的RSD值为1.23%，表明本方法的重现性良好。

2.7 稳定性考察

取同一样品供试品溶液，按上述方法分别于不同时间（0min，20min，40min，60min，80min，100min，120min）测定吸收度，结果见下表，显示在2小时内稳定，RSD为0.27%。考察实验的稳定性。

2.8 加样回收实验

精密称取黄芩苷对照品， 分别加入6份已知含量的10克的样品中，  按供试品溶液制备方法制备， 精密吸取2mL， 按“标准曲线的绘制”项下的方法操作，并以相应试剂为空白，在波长278nm处测定吸光度。计算回收率为99.8，RSD为0.58%，表明本方法回收率较好。

2.9 样品的含量测定

精确称取实验所得黄芩苷粗品50mg用50%乙醇溶解定容于100 mL容量瓶。用干燥滤纸过滤，弃去初滤液，吸取续滤液2mL于25mL容量瓶中，用50%乙醇定容。另取50%乙醇作空白，于278 nm波长处测吸光度，由回归方程式计算出对应浓度，计算半枝莲中黄芩苷含量0.430%。

3 讨论

3.1 黄芩苷的来源

据文献记载，黄芩苷主要来源于黄芩根部，其他来源于植物并头草即半枝莲，木蝴蝶，以及大车前，其中黄芩、木蝴蝶中黄芩苷的提取以及含量测定，此前已有文献报道，所以本实验主要是探索提取以及测定半枝莲中黄芩苷的方法。

3.2 黄芩苷的提取

目前，尚无文献报道半枝莲中黄芩苷的提取方法以及测定黄芩苷的含量的方法，本实验旨在建立提取半枝莲中黄芩苷的方法以及用紫外分光光度法测定其含量。提取方法参考黄芩中黄芩苷的提取方法，首先采用水煮法，提取效果不佳，产量太少。后参考赵越平等[11]采用同一种溶剂乙醇分别以回流法、索氏抽提法、超声法、和浸泡法等不同提取方法从黄芩原药材中提取黄芩苷进行了对比实验，结果用回流法提取黄芩苷为好，快速、简便、提取率高。浸泡法和超声法提取率低，不能真实反映黄芩中黄芩的实际含量，超声的次数和时间等因素对黄芩苷提取率有影响。最后采用乙醇回流提取，并且对黄芩苷的精制过程进行改进，经过多次失败经验，总结出了提取半枝莲中黄芩苷的较好的方法。

本实验结果表明，以黄芩苷为对照品，测定半枝莲中黄芩苷的含量为0.430%，该方法的精密度试验、稳定性试验，重现性实验结果均良好，本法简便、准确、灵敏度高， 可作为测定黄芩苷常用的方法之一。可为半枝莲的质量控制提供参考性资料依据。

【参考文献】

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[10]卢艳花，主编.中药有效成分提取分离技术[M].2版.北京：化学工业出版社，2007：103-106.

[11]赵越平，雷其云，苏永芝，等.黄芩中黄芩苷不同提取方法的比较[J].第四军医大学学报，1996，17（6）：475-476.

[责任编辑：薛俊歌]