脐带血标本用于检测新生儿溶血三项的临床价值

沈美萍，陈士华

(平湖市第一人民医院，浙江 平湖 314200)

脐带血标本用于检测新生儿溶血三项的临床价值

沈美萍，陈士华

(平湖市第一人民医院，浙江 平湖 314200)

目的：分析新生儿脐带血与静脉血对其溶血病(HDN)检测结果有无差异。方法对O型孕妇(丈夫非O型)进行产前IgG溶血性抗体效价的测定，对效价≥1∶128的孕妇，在分娩时留取新生儿脐带血，同时采集出生后1～2天和3～4天、5～7天静脉血，进行新生儿溶血三项(直接抗人球蛋白试验、游离抗体试验和放散试验)检测并比较。结果同一患儿脐带血与出生后1～2天采集静脉血检测结果无差异，与出生后3～4天、5～7天采集的静脉血检测结果差异有统计学意义。结论脐带血和静脉血虽均可作为新生儿溶血病的检测，但脐带血阳性率高，而且取材方便，便于早诊断早治疗，可作为诊断HDN的首选标本。

新生儿溶血病；溶血三项试验；脐带血；静脉血；IgG抗体效价

Abstract： [Objective] To analyze the differences of umbilical cord blood and veinal blood in testing neonatal hemolysis. [Method] Prenatal determination of IgG antibody titer was tested in pregnant women with O-type blood (husband with non-O). For pregnant women with titer ≥1∶128, newborn cord blood specimens were collected in childbirth, meanwhile veinal blood were collected 1-2 days, 3 - 4 days, 5-7 days after born. The direct antiglobin test、indirect antiglobulin test and elution test were carried out to detect neonatal hemolysis with above blood specimens. [Result] There are no difference between cord blood and veinal blood that collected 1-2 days after born.There are significant difference between cord blood and veinal blood that collected 3-4 days or 5-7 days after born. [Conclusion] Although umbilical cord blood and venous blood can be used as the specimens for detection of hemolytic disease of the newborn, cord blood had higher positive rate and drawing convenience, ease of early diagnosis and treatment. It can be used as the preferred diagnostic specimens.

Keywords: hemolytic disease of newborn; hemolytic three test; umbilical cord blood; venous blood; IgG antibody titer

新生儿溶血病(Hemolytic Disease of Newborn，HDN)一般特指母婴血型不合，母体内的IgG溶血性抗体通过胎盘进入胎儿及新生儿血液循环，引起胎儿及新生儿红细胞破坏的被动免疫性溶血性疾病[1]。HDN主要包括ABO血型系统和RH系统不合的溶血，在我国以ABO溶血病为主[2]。近年来在新生儿溶血病防治方面的进展已使该病的严重性和预后有了明显改善，但它仍是新生儿期黄疸和贫血的重要原因。本文探究新生儿脐带血与静脉血对溶血三项(直接抗人球蛋白、游离抗体、放散试验)结果的异同，以寻找一种准确、方便、快速的标本来检测新生儿溶血病。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2011年6月至2013年3月在我院产前检查、分娩的O型产妇(丈夫非O型)及其分娩的新生儿114例，已排除母婴血型相同的标本。

1.2 仪器和试剂

新生儿血型检测卡、新生儿溶血病胎(婴)儿不完全抗体检测卡、酸放散试剂盒、HDN母体IgG抗体效价检测卡、0.2mol/L 2-巯基应用液、免疫微柱孵育器、血型血清学离心机均由长春博讯生物技术有限公司提供。ABO标准红细胞为上海血液生物公司提供。胆红素试剂由日本和光株式会社提供。

1.3 方法

参照《全国临床检验操作规程》[3]及试剂盒说明书。采集孕周20周以上的孕妇静脉血进行IgG抗体效价测定，选择效价≥1∶128的孕妇，在分娩时留取新生儿脐带血和静脉血，均用EDTA抗凝进行溶血三项的检测，并对溶血三项阳性的新生儿追踪高胆红素血症的发生率。

1.4 诊断标准

(1)HDN诊断标准[4]：母婴血型不合；抗体放散试验和直接抗人球蛋白试验其中一项阳性者；发生高胆红素血症为临床型，否则为亚临床型；(2)足月新生儿高胆红素血症的诊断标准[5]：24h内>103μmol/L；48h内>154μmol/L；3天以上>220.6μmol/L；主要为间接胆红素。

1.5 统计学处理

应用SPSS17.0软件进行统计学处理，采用χ2检验和Fisher确切检验法，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 脐带血与不同采集时间静脉血的溶血三项阳性结果比较

60例新生儿的脐带血与其出生1～2天时的静脉血比较溶血三项阳性率，差异均无统计学意义(χ2分别为0.817、0.034、0.358，P>0.05)。同理，33例新生儿的脐带血与其出生3～4天时的静脉血比较这三项的阳性率，直抗试验和游离抗体在这组间差异无统计学意义(P分别为0.108、0.783)。放散试验结果有统计学意义(P=0.024)。21例新生儿的脐带血与其出生5～7天时的静脉血比较，游离抗体在这组间差异也无统计学意义(P=0.159)。直抗试验和放散试验有统计学意义(P分别为0.021、0.004)。结果见表1。

表1脐带血与不同采集时间静脉血的溶血三项阳性结果[N(%)]

检测项目脐血静脉血(1～2天)N=60脐血静脉血(3～4天)N=33脐血静脉血(5～7天)N=21直抗试验 (+)12(20．0)11(18．3)9(27．3)3(9．1)6(28．5)0(0．0)游离抗体试验(+)25(41．7)25(41．7)10(30．3)8(24．2)8(38．1)3(14．3)放散试验 (+)36(60．0)31(51．7)22(66．7)13(39．4)13(61．9)3(14．3)

2.2 脐带血与不同采集时间静脉血检测诊断HDN结果的比较

分别用114例新生儿脐带血与静脉血检测溶血三项，根据诊断HDN的血清学标准，相同结果92例，HDN阳性52例，不同结果22例。经四格表配对比较χ2检验，后2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结果见表2。

表2 114例患儿分别采取脐带血和静脉血检测诊断HDN的结果比较

脐带血静脉血(1～2天)+-静脉血(3～4天)+-静脉血(5～7天)+-合计+35414831074-0210110840合计35251419318114

注: χ2分别为2.25(P>0.05)，6.125(P<0.05)、8.1(P<0.05)。 “+”表示确诊HDN阳性，“-”表示确诊HDN阴性。

3 讨论

当胎儿红细胞所具有的血型抗原为母体所缺少时， 胎儿红细胞通过胎盘进入母体循环，可使母体产生对胎儿红细胞抗原相应的抗体，此抗体又经胎盘循环作用于胎儿红细胞导致红细胞破坏产生溶血，可致早期流产或新生儿黄疸、贫血、肝脾肿大，严重者可有核黄疸，甚至死亡[6]。核黄疸一旦发生，其治疗效果甚微，仅能以预防为主，因此，对ABO-HDN的早期诊断和早期治疗具有重要意义。

传统的ABO-HDN诊断方法是在患儿出现黄疸后查母婴血型，血型不合再查溶血三项，若确诊再进行治疗，往往已在出生后2～3天，其治疗效果明显低于48h内进行干预者[7]。再者HDN的临床表现轻重不一，轻症仅出现轻度黄疸，临床上对没有明显溶血征象的新生儿并不采取特殊干预，易被视为生理黄疸而漏诊，可能造成新生儿神经系统不可逆损伤。所以为避免HDN的漏诊和误诊，我们在孕妇围产期体检时就检查夫妻血型，当孕妇为O型，其丈夫非O型时，用微柱凝胶法进行IgG抗A(B)的抗体效价测定。因微柱凝胶法比经典的抗人蛋白法敏感，以1∶128效价作为临界值有临床意义[8]。故选择抗体效价≥1∶128的孕妇分别在分娩时留取脐带血，在新生儿出生1～7天中采集静脉血进行溶血三项测定，对比这2种标本在溶血三项结果上的差异。

从表1可知，新生儿的脐带血与其静脉血在进行游离抗体检测时，3组的阳性率均无差异，直抗试验在最后一组有统计学意义，而放散试验在后2组的阳性率比较均有统计学意义。由于游离抗体试验只能确定血清中存在与其红细胞不配合的血型抗体，还不能证实其红细胞被致敏，放散试验是三项试验中敏感度最高的一项试验，是判断新生儿溶血最有力的证据[9]，同时也是直抗试验的放大试验。因此这2项的阳性与否关系到HDN的诊断，及早采集标本进行检测显得尤为重要。

从表2可知，2类标本在比较血清学诊断HDN的结果中有92例相同，22例结果不同，其中同时诊断HDN阳性52例。这52例患儿中，发生高胆红素血症29例，其余23例患儿未出现黄疸或黄疸症状较轻未达到高胆红素血症的标准。由于HDN临床症状的轻重取决于抗原性的强弱、个体的免疫反应、胎儿的代偿能力和产前的干预措施等，所以可以出现血清学诊断阳性而无临床表现的现象，这符合ABO-HDN的临床特点。22例不同检测结果主要表现为脐带血检测时阳性，而静脉血为阴性。其中有2例在第6天出现高胆红素血症。分析其原因可能是在采集新生儿静脉血时，由于采集难度较高，血量未采足，抗体量太少而导致结果假阴性；还有随着出生时间的延长，IgG抗体与患儿红细胞的结合及消耗，HDN的检出率也会随之下降。

综上所述，我们在进行溶血三项测定时，一定要重视标本的采集因素，确保检验结果的准确性。对于有临床表现而溶血三项试验阴性者，就要考虑是否因为疾病的发展而导致溶血性抗体消耗以致检测结果假阴性还是其他疾病导致的溶血病。笔者认为，不能以患儿出现病理性黄疸后再考虑筛查ABO-HDN，而应该在产前母体IgG抗体效价升高及母婴血型不合时，尽早采集标本，尽快筛查HDN。脐带血采血容易，检测结果准确，阳性率高，能给HDN的早期诊断提供可靠依据，可作为诊断HDN的首选标本。一旦血清学检测阳性，密切监护病情，及早采取干预措施，以达到不发病或减轻症状的目的，真正实现优生优育。

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[3]叶应妩，王毓三，申子瑜.全国临床检验操作规程[M].第3版.南京：东南大学出版社，2006.:266-270.

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[5]胡亚美，江载芳.诸福棠实用儿科学[M].北京:人民卫生出版社，2005.:99.

[6]刘玲，陈亚宝，张立新，等.182疑似新生儿溶血病患儿的血清学检测结果[J].临床检验杂志，2012，30(8)：631.

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[9]高峰.输血与输血技术[M].北京:人民卫生出版社，2003.102-103.

Clinicalvalueofumbilicalcordbloodfortestingthreeindexofneonatalhemolysis

SHENMeipingCHENShihua

(The First People's Hospital of Pinghu， Zhejiang 314200，China)

R722.18

B

1672-0024(2014)02-0048-03

沈美萍(1971-)，女，浙江平湖人，本科，副主任技师。研究方向：临床检验与输血检验

平湖市科技计划项目(编号：2013-067)