不同方法检测肠道病毒71型IgM抗体在手足口病诊断中的意义

杜 昆（荆州市第一人民医院检验科，湖北荆州 434000）

手足口病是好发于婴幼儿的感染性疾病，临床症状主要表现为发热和手足口部疱疹，少数患儿可出现无菌性脑膜炎、脑炎、心肌炎、肺水肿和呼吸循环衰竭等并发症而导致死亡［1－3］。手足口病可由多种肠道病毒引起，主要包括肠道病毒71型（EV71）和柯萨奇病毒A16型（CA16），其中EV71感染是引起国内手足口病患儿死亡的主要原因［4－5］。进行EV71检测不但有利于手足口病的早期诊断和早期治疗，而且可以降低该病引起的并发症发生率，具有重要的临床价值。本研究采用免疫层析法（ICA）和酶联免疫吸附法（ELISA）检测179例临床标本，以分析两种方法检测EV71的临床应用价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2012年3～10月于本院儿科确诊的手足口病患儿135例，男75例、女60例，年龄5个月至10岁，平均（3.02±2.51）岁，均符合卫生部颁发的《手足口病诊疗指南（2008年版）》诊断标准［6］。同期于本院排除手足口病诊断的患儿共44例，男25例、女19例，年龄6个月至9岁，平均（3.52±2.31）岁。

1.2 主要试剂 EV71IgM抗体ICA检测试剂盒和ELISA检测试剂盒均购自北京万泰生物药业股份有限公司。

1.3 方法 采集所有受试患儿未抗凝静脉外周血2mL，常规方法离心后分离血清标本用于EV71IgM抗体检测。（1）ICA检测严格按照试剂盒说明书进行操作；结果判断标准：测试区和对照区内同时出现条带，判为阳性；仅对照区内出现条带，判为阴性；测试区和对照区均无条带，或只有测试区有条带，均判为无效，需重新检测。（2）ELISA检测严格按照试剂盒说明书进行操作。取标准品和待测标本各50μL，分别加入反应孔内，然后加入50μL生物素标记抗体，轻轻振荡混匀，37℃孵育1h；弃去孔内液体，用洗涤液洗涤4次，每孔加入80μL亲和链霉素－辣根过氧化物酶，轻轻振荡混匀，37℃孵育30min；用洗涤液洗涤4次，每孔加入底物A、B各50μL，轻轻振荡混匀，37℃避光孵育15min；加入50μL终止液，450nm波长处测定各孔的光密度值（OD值），根据标准曲线计算待测标本EV71IgM抗体浓度，并以说明书给出的临界值进行阴、阳性结果判断。

1.4 统计学处理 采用SPSS13.0统计软件进行数据分析；计数资料以百分率表示，组间比较采用卡方检验；P＜0.05为比较差异有统计学意义。

2 结 果

135例手足口病患儿中，ICA检出EV71IgM抗体阳性29例，阳性率为21.48%；44例非手足口病患儿中，ICA未检出EV71IgM抗体阳性患儿；两组患儿EV71IgM抗体ICA检测阳性率比较差异有统计学意义（χ2＝21.05，P＜0.05）。135例手足口病患儿中，ELISA检出EV71IgM抗体阳性27例，阳性率为20.00%；44例非手足口病患儿中，ELISA未检出EV71 IgM抗体阳性患儿；两组患儿EV71IgM抗体ELISA检测阳性率比较差异有统计学意义（χ2＝18.36，P＜0.05），见表1。

表1 两组患儿EV71IgM抗体ICA及ELISA检测阳性率比较［n（n）］

3 讨 论

手足口病是由EV71等病毒引起的一种常见的传染病。EV71属小RNA病毒科肠道病毒属。EV71主要通过接触传播及飞沫传播，具有较强的传染性，可在短期内造成较大范围的流行。EV71一年四季均可引起手足口病，其中以夏、秋季多见。症状较轻的感染患者临床表现为发热和手足口部疱疹，重者可累及神经、呼吸、循环等系统，甚至引起死亡。目前对于手足口病尚无有效的治疗措施，故早期诊断对于手足口病的预防和控制具有重要意义。

传统的病原学检查是诊断手足口病的金标准，但该法对实验设备、技术要求较高，且检测周期长、灵敏度相对较低，主要用于实验室研究，并不适合临床推广应用。目前，逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）技术已成为诊断EV71感染的一种常用方法，但该检测方法造成的假阳性率和假阴性率均较高。荧光定量PCR（FQ－PCR）检测EV71不仅能大大降低假阳性率和假阴性率，而且与常规RT－PCR技术相比，在敏感性和特异性等方面都更具有优势［7－11］。但由于FQ－PCR检测需要的仪器昂贵，且对实验室条件要求较高，不适宜在基层医疗机构开展。本研究比较了ICA和ELISA检测EV71IgM抗体的阳性率，结果表明，135例手足口病患儿，ICA、ELISA检测EV71IgM抗体阳性率分别为21.48%和20.74%，而44例非手足口病患儿，ICA、ELISA均未检出EV71IgM抗体阳性患儿，且两种方法在手足口病患儿中的EV71IgM抗体检测阳性率明显高于非手足口病患儿（P＜0.05）。另一方面，ICA、ELISA检测手足口病患儿EV71IgM抗体阳性率虽然较低，但对于非手足口病患儿，两种方法均未出现EV71IgM抗体阳性患儿，说明两种方法检测假阳性率较低，具有相对较高的特异度。

综上所述，ICA或ELISA检测EV71IgM抗体为阳性者，均可确诊为手足口病，但对于检测结果为阴性者，不能排除手足口病的可能性，应结合临床表现进行诊断。

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