荔枝核配方颗粒质量标准研究△

浦香兰，李松

(江阴天江药业有限公司，江苏 江阴 214434)

中药工业

荔枝核配方颗粒质量标准研究△

浦香兰*，李松

(江阴天江药业有限公司，江苏 江阴 214434)

目的：对荔枝核配方颗粒的质量控制方法进行研究，建立荔枝核配方颗粒的质量标准。方法：采用薄层色谱法(TLC)对荔枝核配方颗粒中皂苷类成分及原儿茶酸进行定性鉴别；采用高效液相色谱法(HPLC)测定荔枝核配方颗粒中原儿茶酸的含量。色谱柱为 Megres-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为乙腈-1%冰醋酸溶液(5∶95)，检测波长为260 nm，进样量为10 μL，流速为1.0 mL·min-1，柱温为30 ℃。结果：薄层色谱法能特异性地鉴别荔枝核配方颗粒中皂苷类成分和原儿茶酸；原儿茶酸的定量测定在0.055 74～0.557 4 μg呈良好的线性关系(r=0.999 9)；平均加样回收率100.25%(RSD=2.15%)。结论：本方法可准确地进行定性、定量检测，且操作简便、灵敏、专属性强、重现性好，原儿茶酸峰达到很好的基线分离，可作为荔枝核颗粒的质量控制方法。

荔枝核；配方颗粒；TLC；HPLC；质量标准；原儿茶酸

荔枝核为无患子科植物荔枝LitchichinensisSonn.的干燥成熟种子。其味甘、微苦，性温。归肝、肾经，具有行气散结、祛寒止痛的功能，用于寒疝腹痛，睾丸肿痛[1]。根据研究，荔枝核的主要化学成分为荔枝核皂苷、黄酮类、挥发油、有机酸及酯、氨基酸、糖类及微量元素等[2-5]。刘兴前等[6-7]报道，荔枝核萃取物的水溶性部位中含有原儿茶酸。现代药理学表明，荔枝核具有抗氧化、调血脂、降血糖、抗肝损伤和抑制乙肝病毒等药理作用[8]。

目前对于荔枝核的研究，主要是针对荔枝核药材的化学成分、提取工艺及药理学，对于质量标准方面的研究极少；《中国药典》2010年版一部中，荔枝核项下没有薄层鉴别方法，也没有含量测定方法；对于荔枝核配方颗粒的研究尚未见报道。

荔枝核配方颗粒由荔枝核饮片经提取、浓缩、干燥、制粒等工序制成，它突破了传统中药饮片需要煎煮的服用模式，具有免煎易服、易储存、携带方便等优点[9]。为保证荔枝核配方颗粒质量稳定均一，确保临床用药安全有效，本文应用薄层色谱法建立了荔枝核配方颗粒的薄层鉴别方法，采用高效液相色谱法对荔枝核配方颗粒中主要有效成分原儿茶酸(C7H6O4)进行含量测定。

1 仪器与试药

1.1仪器

Agilent1260高效液相色谱仪(Agilent-G1311A四元泵；Agilent-G1322A真空脱气器；Agilent-G1314B可变波长检测器；CHEMSTATIONB.04.02化学工作站)；AT-330型柱温箱(天津奥特赛恩斯科学仪器有限公司)；十万分之一电子天平(瑞士Mettler公司)；超声清洗机(无锡超声电子设备厂)；CAMAGTLCVISUALIZER薄层成像系统(瑞士CAMAG公司)；超声清洗机(苏州昆山超声电子设备厂)。

1.2试药

原儿茶酸对照品(中国食品药品检定研究院，批号：110809-201205，供含量测定用，含量以99.9%计)。荔枝核药材购于广西玉林鑫康药材有限公司，经江阴天江药业有限公司唐波高级工程师鉴定为无患子科植物荔枝LitchichinensisSonn.的干燥成熟种子，作为对照药材。硅胶G(青岛海洋化工厂)，硅胶GF254(青岛海洋化工厂)，乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，其他试剂均为分析纯。

荔枝核配方颗粒(江阴天江药业有限公司，批号：1004104，1012296，1104055，1109115，1201108，1210098，1303125，1305053，1308150)。

2 方法与结果

2.1薄层色谱定性鉴别

2.1.1皂苷类成分的薄层鉴别 取本品颗粒1g，加水25mL溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次30mL，合并正丁醇液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另取荔枝核对照药材约10g，加水100mL，煮沸30min，滤过，滤液蒸干，加水25mL，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥB)试验，吸取上述两种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(15∶40∶22∶10)在5～10℃放置12h的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。见图1。

1～9.荔枝核配方颗粒 S.荔枝核对照药材图1 荔枝核配方颗粒中皂苷类成分TLC图

2.1.2原儿茶酸的薄层鉴别 取本品颗粒1g，加水25mL溶解，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次30mL，合并乙酸乙酯液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另取荔枝核对照药材10g，加水100mL，煮沸30min，滤过，滤液蒸干，加水25mL，同法制成对照药材溶液。另取原儿茶酸对照品，加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥB)试验，吸取上述3种溶液各5μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲苯-甲酸(5∶6∶3∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。见图2。

1～9.荔枝核配方颗粒；S1.荔枝核对照药材；S2.原儿茶酸图2 荔枝核配方颗粒中原儿茶酸TLC图

2.2含量测定

2.2.1色谱条件与系统适应性 色谱柱Megres-C18(HanbonSci.&Tech.，250mm×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈-1%冰醋酸溶液(5∶95)；检测波长：260nm；进样量：10μL；流速：1.0mL·min-1；柱温：30℃。理论板数按原儿茶酸峰计应不低于3000。色谱图见图3。

1.原儿茶酸图3 荔枝核配方颗粒及对照品HPLC图

2.2.2对照品溶液的制备 取原儿茶酸对照品适量，精密称定，加甲醇-1%冰醋酸溶液(70∶30)混合溶液制成每1mL含60μg的溶液，即得(55.74μg·mL-1)。

2.2.3供试品溶液的制备 取荔枝核配方颗粒适量，研细，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇-1%冰醋酸溶液(70∶30)混合溶液25mL，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率50KHz)30min，放冷，再称定重量，用甲醇-1%冰醋酸溶液(70∶30)混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.4线性关系考察 分别精密吸取原儿茶酸对照品(55.74μg·mL-1)1，2，4，6，8，10μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，以原儿茶酸的峰面积(Y)为纵坐标，以原儿茶酸的进样量(X，μg)为横坐标绘制标准曲线，求得回归方程：Y=3775.7636X+2.3236，r=0.9999，表明原儿茶酸进样量在0.05574～0.5574μg与峰面积呈良好的线性关系。

2.2.5精密度试验 精密吸取原儿茶酸对照品溶液(55.74μg·mL-1)10μL，按上述色谱条件连续进样6次，测定峰面积，计算原儿茶酸峰面积的RSD=0.29%，表明仪器精密度良好。

2.2.6稳定性试验 取荔枝核配方颗粒(批号：1004104)，按2.2.3供试品溶液制备项下操作制成供试品溶液，按上述色谱条件，分别在0，2，4，8，12，24h精密吸取10μL进样，记录原儿茶酸的峰面积，计算RSD值，结果RSD=0.66%，表明供试品溶液在24h内基本稳定。

2.2.7重复性试验 取荔枝核配方颗粒(批号：1004104)，平行6份，分别按2.2.3供试品溶液制备项下操作制成供试品溶液。按上述色谱条件测定原儿茶酸峰面积，计算含量以及RSD值。结果表明，原儿茶酸的平均质量分数为1.55mg·g-1，RSD=0.99%。

2.2.8加样回收试验 取已知含量的本品颗粒(批号：1004104)适量，研细，取约0.25g，平行6份，精密称定，分别精密加入原儿茶酸对照品溶液(55.74μg·mL-1)7mL，按2.2.3供试品溶液制备项下操作制成供试品溶液，按上述色谱条件测定原儿茶酸峰面积，计算回收率，结果见表1。

表1 荔枝核配方颗粒中原儿茶酸回收率试验

注：原儿茶酸对照品加入量均为0.390 2 mg

2.2.9 样品测定结果 取不同批次荔枝核配方颗粒，按2.2.3供试品溶液制备项下方法制成供试品溶液，每批平行2份，测定峰面积，计算原儿茶酸的质量分数，结果见表2。根据实验结果，规定本品按干燥品计算，含原儿茶酸(C7H6O4)不得少于 1.00 mg·g-1。

表2 荔枝核配方颗粒中原儿茶酸的测定

3 讨论

在研究荔枝核配方颗粒的定性鉴别方法时，针对荔枝核的化学成分，分别建立了对荔枝核皂苷成分和原儿茶酸的定性鉴别方法。在实验过程中，通过对供试液的不同提取方式、不同薄层板、不同展开系统、不同显色方法等进行一系列方法学考察，以及在不同温湿度条件下的耐用性试验，最终确定了文中所列鉴别方法。

根据荔枝核中含有的化学成分，考虑到荔枝核配方颗粒为水提取物，最终选择具有抗菌作用的原儿茶酸作为荔枝核配方颗粒含量测定的指标成分。本实验参考《中国药典》2010年版一部狗脊项下【含量测定】方法对荔枝核配方颗粒中原儿茶酸进行含量测定研究。在研究过程中考察了超声提取、水浴回流提取、振摇提取等不同的提取方式，发现差异不大，考虑到操作的简便性，采用超声提取的方式；同时考察了不同溶剂[甲醇、70%甲醇、50%甲醇、70%乙醇、稀乙醇及甲醇-1%冰醋酸溶液(70∶30)混合溶液]和提取时间(10，20，30，40 min)，结果表明以甲醇-1%冰醋酸溶液(70∶30)混合溶液超声处理30 min能较完全地将有效成分提取出来。

采用二极管阵列检测器对原儿茶酸对照品溶液进行扫描，发现原儿茶酸在225 nm和260 nm附近均有较强吸收，因此在225 nm左右和260 nm左右共选择8个波长对样品和对照品进行检测，并计算含量，结果显示在225 nm附近，含量差异比较大，在260 nm附近含量基本无差异，最后选择参考《中国药典》2010年版一部狗脊项下【含量测定】方法，选择260 nm作为原儿茶酸的检测波长。

经实验证明，该方法简便快捷、重复性好、结果满意，可为控制荔枝核配方颗粒的质量提供科学依据，同时为药材的质量标准制定提供参考。

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QualitystandardofFormulaGranuleofLitchisemen

PU Xianglan*，LI Song

(Jiangyin Tianjiang pharmaceutical Co.，Ltd.，Jiangyin 214434，China)

Objective：To study and establish the quality standard of formula granules of Litchi semen.Methods：Formula Granule of Litchi semen were identified by Thin-layer Chromatography(TLC).Protocatechic acid was determined by High Performance Liquid Chromatography(HPLC).The chromatographic column was Megres-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；the mobile phase was acetonitrile-1% acetic acid solution(5∶95)；the detection wavelength was 260 nm；the sample size was 10 μL；the flow rate was 1.0 mL·min-1and the column temperature was 30 ℃.Results：The TLC spots were clear and well divided.Protocatechic acid had good linear relationship in the range of 0.055 74-0.557 4 μg withr=0.999 9，the average recovery was 100.25% with RSD=2.15%.Conclusion：The methods were accurate，simple and reproducible.It could be used for the quality control of Formula Granule of Litchi semen.

Litchi semen；Formula granule；TLC；HPLC；Quality standard；Protocatechic acid

江苏省科技成果转化专项资金项目——600味中药配方颗粒的研究与产业化(BA2009027)

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浦香兰，工程师，研究方向：中药质量标准；E-mail：puxl@tianjiang.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2014.10.012

2014-02-12)