丹东野生香百合的组织培养和快繁技术研究

陈景红

(辽宁省森林经营研究所，辽宁丹东118002)

丹东野生香百合(Liliumbrownii)为百合科百合属植物,花美芳香,深受当地居民的喜爱。开花初期为黄色,逐渐转白,露地栽培花被脊部呈紫色,遮光则无，自交可结实,抗寒性强,引种到沈阳仍能正常露地越冬[1]。丹东野生香百合是百合育种的优良亲本，因其香味浓郁逐渐引起百合育种科研人员的重视。由于长期依靠无性繁殖，病毒积累侵染严重，为保留和挽救这个野生品种，为百合的育种提供优良种质资源，我们特对丹东野生香百合进行了组培快繁技术研究。

1 材料与方法

1.1 试验时间、地点

研究试验于2010年5月在辽宁省森林经营研究所组培中心实验室进行。

1.2 试验方法

1.2.1 外植体处理。除去百合种球的外部残损鳞片，先用清水冲洗30 min，在无菌条件下剥除内鳞片，再用70%的酒精浸泡30 s， 0.1%升汞水浸泡10 min，并不间断摇晃瓶子，以确保外植体得到全面彻底的消毒，然后用无菌水冲洗5遍，快速接种到已打开瓶口的培养基中。

1.2.2 培养基制作。以MS为基础培养基，添加6%的琼脂粉，30g/L的蔗糖，pH值5.6～5.8，光照2000～3000 lx，光照时间14h/d。在不同的繁殖阶段分别添加不同含量的6-苄氨基嘌呤(6-BA)、萘乙酸(NAA)，吲哚丁酸(IBA)通过2个月的观察和统计，筛选最优的培养基配方。

表1 培养基配方 mg·L-1

2 结果与分析

2.1 茎尖诱导最佳培养基的筛选

在光照强度、温度、湿度等环境条件相同时，丹东香百合在添加6-BA 1.0mg/L和NAA 0.4mg/L的MS培养基的出苗率最高(如表2)，整个鳞片内侧均可诱导出小鳞茎，数量多(15～20)形成丛生小鳞茎。

表2 外植体在不同培养基的诱导分化及生长情况

2.2 继代增殖最佳培养基的筛选

将形成丛生小鳞茎的鳞片切成0.5cm×0.5cm左右小块，转入继代培养基中进行增殖培养，观察小鳞茎的生长情况。不同培养基配方对该种百合的继代增殖有显著影响，在相同的培养环境下MS+BA 1.0mg/L+NAA 0.1mg/L培养基中继代培养分化鳞茎多，繁殖系数一般为5～7倍。

2.3 壮苗培养基的筛选

生根之前有些鳞茎太小，长势弱，就需要壮苗培养1～2周期，可以转入C8培养基MS+BA 0.5mg/L+NAA 0.1mg/L中培养，一个周期大约20～30天，使其长高到2cm左右, 再进行生根。

2.4 最佳生根培养基的筛选

选择鳞茎比较健壮的超过2cm高的小苗转入不同的生根培养基中进行生根培养，其余小苗继续进行增殖和壮苗培养，生根表现见表3。从表3中可以看出， 1/2MS+IBA 0.5mg/L的培养基可促进根的分化，生根所需天数最少，根的条数最多，并且根系生长情况最好，所以D11号培养基为最适生根培养基。

表3 试管苗在不同培养基生根情况

2.5 生根苗炼苗移栽

把香百合组培瓶苗均匀摆放到日光温室内的地面上，利用遮阳网控制光照强度。按照循序渐进原则逐渐增加自然光照。清早、傍晚和阴雨天光线较弱的时机进行全光照。中午或光照过强的时候，结合放风、喷水来控制温室内温度。

闭瓶炼苗3～4天后，打开瓶盖，在瓶口覆上一层纱布，4～5天后取出小苗，洗净苗根部的琼脂，用百菌清500～800倍液浸泡30min左右，然后栽入0.1%高锰酸钾消毒过的苗床上。用不同基质进行移栽试验，结果表明：以园田土为基质，基质容易积水、板结、透气不好，30天时成活率最低；以稻壳与园田土等量混合，疏松透气，但与根系密实性差，成活率不高：以纯沙为基质，通气性、排水性良好，根系生长快，30天时成活率高，达到95%以上。但由于其保水保肥性较差，干湿变化快，随时间延长，苗生长较慢，在60天后成活率有所降低。但只要在移栽20天后定期喷施叶面肥，成活后及时移栽，以保证营养供应，河沙是一个合适的移栽基质。

3 结论

丹东野生香百合可以采用组织培养法进行快速繁殖，诱导培养基以MS+BA 1.0mg/L+NAA 0.4 mg/L为佳，诱导培养20～30d，形成丛生小鳞茎；继代培养基以MS+BA 1.0mg/L +NAA 0.1 mg/L为好，繁殖系数5倍以上；壮苗培养以MS+BA 0.5 mg/L +NAA 0.1 mg/L 为好；生根培养以1/2MS+IBA 0.5 mg/L最好，9天可见根尖长出，生根率达90%以上且每株可达5～8条根；移栽基质以纯沙为最好，成活率达95%以上，并且成本最低，资源丰富。

[1]李雨,罗凤霞,沈向群.丹东野百合花粉萌发率和贮藏条件关系的研究[J].辽宁林业科技,2007(6):36-37,44.

[2]钟海丰,黄宇翔,邓朝生.东方百合快繁培养基优化与脱毒技术研究[J].中国农学通报,2009,25(17):168-173.

[3]廖富荣,林石明,吴媛,等.侵染百合的病毒种类及其检疫重要性[J].植物检疫,2011(1):70-73.

[4]赵庆芳.东方百合组织培养和快速繁殖的研究[J].西北师范大学学报，2003(1):66-70.

[5]方华舟.百合组织培养及快繁技术的研究与探讨[J].贵州林业科技,2006(4).