流式细胞术检测急性髓细胞白血病微小残留病的临床价值

何正梅 陶善东 邓 媛 于 亮

白血病属于造血干细胞恶性克隆性疾病,死亡率较高,临床治疗难度较大,急性髓细胞白血病(acute myeloid leukemia,AML)属于白血病的一种常见类型[1]。近几年研究发现微小残留病(minimal residual disease,MRD)与白血病复发有紧密联系，但其在人体内分布和生存特点较为复杂,尤其是MRD增殖受机体免疫情况影响较大[2]。因此,准确、快速检测MRD成为了关注的热点。我院采用流式细胞术(flow cytometry,FCM)对66例AML患者诱导化疗前后的各亚型髓系抗原阳性表达情况进行了检测和分析,现报告如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选取2012年6月至2013年6月我院收治的66例初治AML患者作为研究对象。所有患者均符合AML的诊断标准(依据细胞形态学、分子生物学、遗传学及免疫学确立诊断[3])。患者年龄为14～70岁,平均年龄为(37.22±8.33)岁,按照法美英(French-American-British,FAB)分型标准[4]进行分型,M2型40例,M3型18例,M4型6例,M5型2例。按照诱导化疗结束时患者临床疗效,将66例患者分为缓解组46例和未缓解组20例。选取我院同期收治的20例缺铁性贫血患者骨髓作为对照组,其中男性9例,女性11例,年龄为14～72岁,平均年龄为(47.05±8.77)岁,髓系抗原总阳性表达率为(0.69±0.25)%。

1.2 方法

使用COULTER®EPICS®ALTRATM流式细胞仪(美国)采用免疫荧光标记法对白血病免疫表型进行检测,单克隆抗体9种,包括MPO、CD117、CD13、CD33、CD14、CD15、CD11b、HLA-DR、CD34[5],均购自美国Beckman-Coulter公司,采用CD45/SSC散点图设门。细胞膜抗原阳性判断标准：荧光阳性细胞>20%；CD34、CD38和胞浆抗原阳性判断标准：荧光阳性细胞>10%；MRD阳性判断标准：总阳性表达率显著高于对照组即为MRD阳性[6]。

1.3 观察指标

记录初诊时与诱导化疗结束时AML患者各亚型髓系抗原阳性表达情况,比较诱导化疗结束时缓解组、未缓解组及对照组患者髓系抗原总阳性表达率。

1.4 统计学分析

2 结果

2.1 AML患者初诊时各亚型髓系抗原阳性表达率比较

本组66例AML患者阳性总表达率为(19.98±11.98)%,各亚型阳性表达率由高到低依次为：M4、M2、M3、M5。各髓系抗原阳性表达率由高到低依次为：MPO、CD13、CD117、CD33、HLA-DR、CD34、CD11b、CD15、CD14(表1)。

表1 AML患者初诊时各亚型髓系抗原阳性表达率比较/%

2.2 诱导化疗结束时缓解组与未缓解组患者各亚型髓系抗原阳性表达率比较

本组66例AML患者诱导化疗结束时46例缓解、20例未缓解。缓解组髓系抗原阳性总表达率为(10.50±10.49)%,各髓系抗原阳性表达率由高到低依次为：MPO、CD13、CD33、CD15、CD11b、HLA-DR、CD117、CD34、CD14；未缓解组髓系抗原阳性总表达率为(16.80±17.39)%,各髓系抗原阳性表达率由高到低依次为：MPO、CD13、CD33、CD15、CD11b、CD34、HLA-DR、CD117、CD14(表2)。

表2 诱导化疗结束时2组患者各亚型髓系抗原阳性表达率比较/%

2.3 诱导化疗结束时3组髓系抗原总阳性表达率比较

缓解组与未缓解组患者髓系抗原总阳性表达率分别为(10.50±10.49)%、(16.80±17.39)%，均显著高于对照组的(0.69±0.25)%,差异具有统计学意义(P<0.05)；缓解组患者髓系抗原总阳性表达率显著低于未缓解组,差异具有统计学意义(P<0.05)。

3 讨论

白血病是以恶性克隆性增殖为特点的血液系统疾病,其抗原的表达具有很大的异质性[7]。异常表达的抗原不仅在初发白血病细胞中能够被检测出[8]，在形态学完全缓解后残存的白血病细胞和复发时的白血病细胞中也能够保留其初发时的抗原异常表达特征[9]。因此,可以依据白血病细胞的这一克隆性增生的特征进行微小残留病灶检测,而确定特异性抗体组合是FCM检测MRD的关键[10]。

研究表明单一抗原在检测MRD中有较高临床价值,但AML亚型多、免疫表型复杂,单一抗原或某一亚型难以准确检测MRD[11]。本研究对AML表型表达阳性率较高的一组髓系CD抗原(MPO、CD117、CD13、CD33、CD14、CD15、CD11b、HLA-DR、CD34)[12]进行AML患者各亚型MRD动态检测。结果显示,初诊时AML患者免疫表型阳性总表达率为(19.98±11.98)%,诱导缓解化疗后为(10.50±10.49)%。表明诱导化疗具有显著临床效果,AML髓系抗原总阳性表达率随治疗时间延长而逐渐下降。另外,初诊时AML患者各髓系抗原阳性表达率由高到低依次为：MPO、CD13、CD117、CD33、HLA-DR、CD34、CD11b、CD15、CD14,诱导化疗结束时缓解组依次为：MPO、CD13、CD33、CD15、CD11b、HLA-DR、CD117、CD34、CD14,未缓解组依次为：MPO、CD13、CD33、CD15、CD11b、CD34、HLA-DR、CD117、CD14,相互比较可知MPO、CD13、CD33总是排在前列,表明MPO、CD13、CD33是AML最有特异性的白细胞分化抗原[13]。

本研究缓解组患者髓系抗原总阳性表达率显著低于未缓解组,表明诱导化疗能够显著改善AML患者MRD阳性情况；缓解组与未缓解组患者髓系抗原总阳性表达率均显著高于对照组,表明缓解组患者仍存在MRD阳性,诱导缓解化疗后患者虽处于细胞形态学持续缓解状态,但仍有较高水平残存白血病细胞。可见缓解组患者尚未达到免疫学水平的缓解,需巩固化疗。也表明髓系特异性抗体组合对处于细胞形态学持续缓解状态的MED残留仍有较高敏感性。

总之,MRD是AML复发的主要因素,其水平高低对AML患者预后和复发有重要意义,利用上述9种单克隆抗体能够较好地检测MRD,临床应用价值较高。

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