HPSE2在非小细胞肺癌中表达与预后的关系

张珉+黄波+张玲+吕威力

【摘要】目的检测乙酰肝素酶-2(heparanase-2, HPSE2)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达情况, 并探讨其与NSCLC的临床病理因素的关系。方法采用免疫组织化学(S-P法)检测82例NSCLC患者及10例癌旁正常肺组织中HPSE2的表达。结果HPSE2主要定位于细胞浆, 在82例NSCLC组织中, 30例(37%)为高表达, 在非癌肺组织中弱表达或无明显表达。HPSE2高表达同局部淋巴结转移减少(P=0.012), 患者预后生存时间延长相关(P=0.027)。结论HPSE2的表达与NSCLC局部淋巴结转移减少及患者预后生存时间延长相关。

【关键词】乙酰肝素酶-2；非小细胞肺癌；肿瘤标志物；免疫组织化学肺癌一直都是全球范围内高死亡率的恶性肿瘤, 并且死者中80%为非小细胞肺癌(non-small-cell lung cancer, NSCLC)患者, 由于肿瘤发生、发展过程中大量具有调控作用的细胞因子活性发生变化, 寻找上述活性分子。乙酰肝素酶-2(heparanase-2, HPSE2)属于乙酰肝素酶家族 ［1］, 现已发现HPSE2在头颈部肿瘤、卵巢肿瘤、宫颈肿瘤、直肠癌、胃癌组织中高表达并与肿瘤进展存在关联［2-6］, 但HPSE2在NSCLC组织中的表达情况目前尚无报道, 本实验将探讨HPSE2在NSCLC组织中的表达水平及其与肺癌临床病理因素之间的关系。

1材料与方法

1. 1材料选取2002年1月~2006年12月辽宁省肿瘤医院手术切除并经病理确诊的NSCLC标本82例, 其中49例具有完整随访资料。10例对照标本取自同期距离癌灶边缘5 cm以上并经HE染色证实的正常肺组织。所有患者术前均未接受放化疗。

1. 2方法

1. 2. 1免疫组织化学所有标本均用10%中性福尔马林固定, 石蜡包埋, 制成4 μm切片, 采用S-P法检测HPSE2蛋白表达情况。HPSE2单克隆抗体购自美国Santa cruz公司, S-P法试剂盒及DAB显色试剂盒购自福州迈新生物技术公司。切片滴加HPSE2一抗(1:100)4℃湿盒内孵育过夜, 次日按照SP试剂盒说明书进行染色, DAB显色, 苏木素复染。以PBS代替一抗作为空白对照。细胞染色强度以胞浆着色阴性、淡黄色、黄棕色、深棕褐色分别记0、1、2、3分；染色范围以着色细胞量占肿瘤细胞<5%、5%~25%、26%~75%及>75%分别记0、1、2、3分, 两项计分相乘为最终得分(0~9分), 得分≤4分为低表达, >4分为高表达。

1. 3统计学方法采用SPSS13.0统计软件进行数据分析处理, 免疫组织化学染色结果各组间的比较采用χ2检验及 Fisher 确切概率法, 生存数据分析采用 Kaplan-Maier 法, 采用 log-rank 法判断差异性, P<0.05表示差异具有统计学意义。

2结果

2. 1免疫组化结果免疫组织化学染色显示, HPSE2主要定位于细胞浆, 82例NSCLC组织中, 30例(37%)为高表达, 在非癌性肺组织中弱表达或无明显表达。HPSE2高表达同局部淋巴结转移减少(P=0.012)相关, 与患者年龄(P=0.658)、性别(P=0.96)、肿瘤组织类型(P=0.654)、pTNM分期(P=0.266)、肿瘤体积(P=0.105)、肿瘤分化水平(P=0.174)等均无相关性。.

2. 2HPSE2表达水平与NSCLC患者预后生存率之间的关系对49例有完整的术后随访记录的患者进行Kaplan-Meier生存时间分析显示: NSCLC组织中HPSE2高表达组患者生存时间高于低表达组生存时间［(61±4.31) VS (50±8.92)］；Log-Rank, P=0.027)。

3讨论

乙酰肝素酶家族包括两个成员：乙酰肝素酶-1 (hepara-nase-1, HPSE1), 乙酰肝素酶-2(heparanase-2, HPSE2)；HPSE1是一种β-D-内切葡糖醛酸酶, 在人肿瘤组织中常高表达并同肿瘤进展密切相关, HPSE1可通过水解细胞外基质、释放活性细胞因子及激活信号通路等方式调控肿瘤进展。HPSE2蛋白结构同HPSE1有大约59%的同源性, 在脑、乳腺等组织中常有较高表达［1］, 在头颈部肿瘤、卵巢肿瘤、宫颈肿瘤、直肠癌、胃癌组织中高表达［2］, 但其所发挥的具体生物学作用及机制尚不十分明确。

HPSE2在NSCLC组织中表达情况及临床病理意义目前尚无报道, 通过免疫组织化学染色发现HPSE2在NSCLC组织的表达强度高于癌旁组织及正常肺组织, 这与其他肿瘤的研究结果相一致。经进一步统计分析发现, HPSE2高表达与NSCLC局部淋巴结转移减少及患者预后生存时间延长相关, HPSE2在头颈部肿瘤高表达同局部淋巴结转移负减少及预后生存时间延长相关［2］, 胃癌组织中HPSE2高表达同患者生存时间延长相关, 这些结果提示HPSE2对肿瘤的发展可以发挥抑制作用, 可能的机制有：①HPSE2可以与HPSE1竞争底物进而抑制其活性抑制肿瘤进展［2］；②.多蜂房蛋白EZH2可以抑制靶基因转录, EZH2在多种恶性肿瘤中高表达并被视为肿瘤进展的标志物, 因此被EZH2抑制的基因可能发挥抑癌的作用, 而HPSE2正是EZH2抑制的靶基因, 这提示HPSE2抑制肿瘤进展的作用可能与EZH2有关, 而在NSCLC组织中HPSE2同HPSE1及EZH2的相互作用机制尚需进一步研究。现有研究均发现HPSE2在肿瘤组织中表达强度高于癌旁及正常组织, 同时, 在宫颈病变组织中HPSE2表达强度随恶变程度增加逐级增高, 在胃癌组织中HPSE2高表达与肿瘤体积增加相关。

综上所述, HPSE2在肿瘤发展过程中所起的作用较为复杂, 尚需进一步研究, 在NSCLC组织中, HPSE2表达与肿瘤局部淋巴结转移减少及患者预后生存时间延长相关, HPSE2有可能成为NSCLC筛查、诊断及预后结果判定的新靶点。

参考文献

［1］ McKenzie E, Tyson K, Stamps A, et al. Cloning and expression profiling of Hpa2, a novel mammalian heparanase family member. Biochem Biophys Res Commun, 2000, 276(3):1170-1177.

［2］ Levy-Adam F, Feld S, Cohen-Kaplan V, et al. Heparanase 2 interacts with heparan sulfate with high affinity and inhibits heparanase activity. J Biol Chem, 2010, 285(36):2801-2809.

［收稿日期：2014-03-12］

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