利多卡因预先给药对肾脏缺血再灌注大鼠血清15-F2t-isoprostance浓度的影响

朱小兵 石翊飒 刘志龙

(中山市中医院麻醉科，广东 中山 528411)

利多卡因减轻大鼠肾脏缺血再灌注损伤与其抑制肾组织CD44和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达有关〔1〕，但确切机制尚不清楚。研究表明，氧化应激反应在肾缺血再灌注(IR)损伤中起重要作用〔2〕。15-F2t-isoprostance是氧化应激的特异性产物，可通过激活血栓烷A2受体产生血管收缩〔3～9〕，但其是否参与利多卡因减轻肾IR损伤过程中尚不明确。本研究评价利多卡因预先给药对肾脏缺血再灌注损伤大鼠血清15-F2t-isoprostance浓度的影响。

1 材料与方法

1.1动物与分组 健康雄性Wistar大鼠36只，体重300～350 g，甘肃中医学院实验动物中心提供，随机分为：假手术组、IR组和利多卡因组，每组12只。

1.2大鼠肾脏缺血再灌注模型的建立 实验室温度为25℃，大鼠实验前禁食12 h，自由进水。腹腔注射3%戊巴比妥50 mg/kg麻醉下，股静脉穿刺置管，注射肝素400 U/kg后，输注林格氏液20 ml·kg-1·h-1。参照文献〔10〕采用的方法建立大鼠肾脏IR模型。于脊柱两旁0.5 cm肋弓下0.5 cm各纵向切开皮肤1 cm，钝性分离腰大肌，暴露双侧肾脏，分离肾动脉，用无创动脉夹闭双侧肾动脉，肾脏由红褐色短时间内变成苍白色再逐渐变成暗紫色为缺血成功的标志；60 min后松开动脉夹，恢复血流灌注4 h，肾脏由暗紫色变为红褐色为再灌注成功的标志。若松开动脉夹5 min后，肾脏仍未转变为红褐色，则为再灌注未成功，剔出研究。

1.3分组处理 利多卡因组于夹闭双侧肾动脉前60 min静脉注射利多卡因(批号：110411，上海朝晖药业有限公司)5 mg/kg，随后以2 mg·kg-1·h-1速率静脉输注，输注时间为60 min；IR组于夹闭双侧肾动脉前60 min注射等容量生理盐水，利多卡因组；假手术组不夹闭双侧肾动脉，余同IR组。

1.4测定指标 于再灌注4 h时，打开胸腔，经心尖抽取血样2 ml，4℃下，离心后取上清液，采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定15-F2t-isoprostance、ET-1浓度。取肾脏组织，沿长轴切开分为两半，置于4%多聚甲醛中固定，石蜡包埋，制成厚6 μm的连续切片，取3张相邻的切片，分别进行HE染色，光镜下观察肾组织病理学结果；将剩余心肌组织，加入生理盐水制成10%组织匀浆，参照试剂盒说明书，采用黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性，硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量。

1.5统计学处理 采用SPSS13.0进行单因素方差分析。

2 结 果

2.1肾组织HE染色结果 光镜下假手术组肾小球和肾小管结构完整；IR组肾小球毛细血管扩张、充血，部分肾小球体积缩小，大量肾小管细胞水肿、颗粒样变性，管腔缩小，部分肾小管腔闭合；利多卡因组肾小球毛细血管轻度扩张、充血，病理学损伤轻于IR组。

2.2肾组织SOD活性降低，MDA含量和血清15-F2t-isoprostance及ET-1浓度 与假手术组比较，IR组SOD活性降低，MDA含量、15-F2t-isoprostance及ET-1浓度升高(P<0.05)，利多卡因组SOD活性、MDA含量、15-F2t-isoprostance及ET-1浓度差异无统计学意义(P>0.05)；与IR组比较，利多卡因组SOD活性升高，MDA含量、15-F2t-isoprostance及ET-1浓度降低(P<0.05)，见表1。

表1 三组大鼠肾组织SOD活性、MDA含量及血清15-F2t-isoprostance、 ET-1浓度的比较(n=12，±s)

3 讨 论

以往研究多采用腹腔正中切口分离肾动脉建立IR模型，而本研究采用脊柱旁切口分离肾动脉，因不进入腹腔，减少了对大鼠的创伤，降低了死亡率。本研究中，IR组肾脏缺血60 min再灌注4 h后，提示大鼠肾脏缺血再灌注损伤模型制备成功。本研究参考文献〔11〕结合预实验结果，选择利多卡因给药方法，利多卡因5 mg/kg静脉注射后以2 mg·kg-1·h-1速率静脉输注60 min后大鼠肾组织SOD活性上调、MDA含量降低，提示利多卡因可减轻肾脏缺血再灌注损伤大鼠氧化应激反应，王红梅等〔12〕研究表明，利多卡因可减轻冠状动脉搭桥术患者炎性反应。ET-1是一种内源性的强血管收缩因子。研究表明，心肌缺血再灌注期间产生的15-F2t-isoprostance可诱导ET-1基因表达，促进其的产生和释放，加重心肌细胞的损伤。本研究提示利多卡因减轻大鼠肾脏缺血再灌注损伤与其抑制15-F2t-isoprostance、ET-1释放有关，具体机制有待于进一步探讨。

综上，利多卡因减轻大鼠肾脏IR损伤与其抑制15-F2t-isoprostance、ET-1释放有关。

4 参考文献

1石翊飒,朱小兵.利多卡因预先给药对肾脏缺血再灌注损伤大鼠肾组织CD44和TNF-α表达的影响〔J〕.中华麻醉学杂志,2010；30(2):231-3.

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12王红梅,戴安卢,周海燕,等.利多卡因对冠状动脉搭桥术患者体外循环致全身炎性反应的影响〔J〕.中华麻醉学杂志,2006；26(4):326-8.