HPLC-DAD法同时测定银黄含片中黄芩苷和绿原酸的含量

桂林医学院附属医院药学部，广西 桂林 541001

HPLC-DAD法同时测定银黄含片中黄芩苷和绿原酸的含量

陈越蔡小玲胡频何洁

桂林医学院附属医院药学部，广西 桂林 541001

目的建立同时测定银黄含片制剂中黄芩苷和绿原酸含量的方法，及测定不同厂家银黄含片中黄芩苷和绿原酸的含量。方法采用HPLC法，用DAD检测器，岛津VP-ODS C18(250 mm×4.6 mm，5(m)色谱柱，流动相：乙腈-0.4%磷酸溶液，梯度洗脱，流速1.0 ml·min-1，检测波长为绿原酸327 nm、黄芩苷280 nm。结果绿原酸和黄芩苷分别在0.17～3.40 μg和0.33～6.60μg范围内线性关系良好(r=0.9999)，平均加样回收率分别为100.59%(RSD=0.94%)和98.91%(RSD=1.14%)。结论本文建立的方法可以同时准确地测定银黄含片中绿原酸和黄芩苷的含量，方法快速、准确、重复性好，可用于银黄含片的质量控制。

银黄含片；绿原酸；黄芩苷；高效液相色谱

银黄含片收载于卫生部药品标准，是由金银花提取物、黄芩提取物制成的中药复方制剂，具有清热解毒、消炎的功效，用于急慢性扁桃体炎，咽炎，上呼吸道感染等病症[1]。绿原酸和黄芩苷为其主要有效成分，现行标准采用分光光度法测定其含量，操作复杂，检验效率低，误差较大。本文采用HPLC法，使用DAD检测器，建立同时测定银黄含片中绿原酸、黄芩苷的含量的方法，并对三个不同厂家的银黄含片进行对比分析，建立的方法专属性强，灵敏度高，操作简便，可用于该制剂的质量控制。

1 仪器与试药

1.1 仪器 高效液相色谱仪(美国Waters公司)，包括Waters2695分离单元；Watrs2998DAD检测器。

1.2 试药 绿原酸(中国药品生物制品检定所，批号：110753-200413)；黄芩苷(中国药品生物制品检定所，批号：110745-201016)；银黄含片(批号：1203035，成都地奥制药集团有限公司；批号：120502，上海福达制药有限公司；批号：01312049，鲁南厚普制药有限公司)；阴性样品为本院制剂室制备。乙腈为色谱纯，水为重蒸水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

表1 流动相的梯度洗脱

色谱柱：岛津VP-ODS C18(250 mm×4.6 mm，5(m)；流动相：乙腈-0.4%磷酸溶液，梯度洗脱(表1)，流速1.0 ml·min-1；DAD检测器，检测波长为绿原酸327 nm、黄芩苷280 nm；柱温为室温；进样量：20μl。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 分别精密称取绿原酸对照和黄芩苷对照品适量，置同一量瓶中，加50%甲醇溶液制成每1 ml含绿原酸55μg、黄芩苷110μg的混合溶液，即得。

2.2.2 供试品溶液制备 取银黄含片20片，除去包衣，研细，混匀，取约0.2 g，精密称定，置50 ml量瓶中，加入50%甲醇溶液适量，超声处理30 min(功率250 W，频率35 kHz)，放冷，加50%甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。

2.3 线性关系考察 精密称取绿原酸对照品8.50 mg，置50 ml量瓶中，加50%甲醇溶液使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取0.5、1、2、5、10 ml，分别置10 ml量瓶中，加50%甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，得浓度为8.5、17.0、34.0、85.0、170.0μg·ml-1的绿原酸系列对照品溶液，分别按照上述色谱条件进样测定，以绿原酸峰面积积分值对进样量(μg)作线性回归曲线。同上分别制备浓度为16.5、33.0、66.0、165.0、330.0 μg·ml-1的黄芩苷系列对照品溶液，分别进样测定，进行线性回归。得绿原酸回归方程为：A=1.995×106C+5.584×104(r=0.9999)；黄芩苷回归方程为：A=6.456×106C+4.826×104(r=0.9999)。绿原酸进样量在0.17～3.40μg范围内，线性关系良好；黄芩苷进样量在0.33～6.60μg范围内，线性关系良好。

2.4 阴性干扰试验 取缺金银花提取物和缺黄芩苷提取物的2种阴性样品约0.2 g，分别按供试品溶液制备项下的方法提取，测定。结果缺金银花提取物的阴性对照样品在绿原酸出峰位置无吸收峰，缺黄芩苷提取物的阴性对照样品在黄芩苷出峰位置无吸收峰。

2.5 精密度试验 取浓度为54.80 μg·ml-1的绿原酸和浓度为110.50μg·ml-1的黄芩苷对照品混合溶液，连续测定6次，分别记录峰面积，结果绿原酸的RSD为0.48%(n=6)，黄芩苷的RSD为0.72%(n=6)。

2.6 稳定性试验 对同一供试品溶液，分别在0、1、2、4、6、8、12 h进样，结果7次测定绿原酸和黄芩苷峰面积RSD均小于1%，表明样品在12h内稳定性良好。

表2 回收率试验结果(n=3)

2.7 重复性试验 取同一批样品(01312049批)，按“2.2.2”项方法平行提取6份供试品溶液，测定，计算。结果绿原酸含量的平均值为14.106 mg·g-1，RSD=1.25%(n=6)，黄芩苷含量的平均值为28.540 mg·g-1，RSD=1.43%(n=6)。

2.8 加样回收率试验 精密称取已知含量的银黄含片(绿原酸含量为14.106 mg·g-1，黄芩苷含量为28.540 mg·g-1)细粉约0.1g，置50ml量瓶中，定量加入绿原酸和黄芩苷对照品混合溶液适量，加50%甲醇溶液适量，依“2.2.2”项下方法操作，制得溶液，测定。结果见表2。

2.9 样品测定 按上拟订的含量测定方法，测定了不同生产厂家3批银黄含片样品中绿原酸和黄芩苷的含量，结果见表3。

表3 样品测定结果(mg·g-1，n=3)

3 讨论

3.1 分别取浓度约为10μg·ml-1的黄芩苷和绿原酸对照品50%乙醇溶液，在紫外分光光度计上扫描，结果黄芩苷对照品在278 nm波长处有最大吸收，参考文献[2]，综合选择280 nm为黄芩苷的测定波长，绿原酸对照品在327 nm波长处有最大吸收，参考文献[2]，选择327 nm为绿原酸的测定波长。

3.2 采用HPLC-DAD法同时测定银黄含片中绿原酸、黄芩苷两种主要成分的含量，方法准确度、精密度、灵敏度等均符合要求，相比现行标准采用的分光光度法测定，本法克服了绿原酸、黄芩苷的相互干扰，结果更能反映两组分的真实含量。

[1]中华人民共和国卫生部．中华人民共和国新药转正标准(第十六册)[S].46-47．

[2]国家药典委员会．中华人民共和国药典(一部)[S]．北京：中国医药科技出版社，2010：283，205．

DeterminatinaofcontentsforbaicalinandchlorogenicacidinYinhuangbuccaltabletSimultaneouslywiththemethodbyHPLC-DAD

CHEN Yue CAI Xiaoling HU Ping HE Jie

Department of pharmacology, the affiliated hospital of guilin medical college, Guilin 541001,China

ObjectiveToestablish the method determinetion on the contents of Baicalin and Chiorogenic acid in the pharmaceutical preparation of Yinhuang Tablet simultaneousiy and to determine the contents of Baicalin and Chlorogenic acid in Yinhuang Tablet of different manufacturers.MethodsWe had adopted the method of HPLC with detector of DAD and chromatogrophy of SHIMADZU VP-ODS C18 (250mmx4.6mm,5μm), The binder was soiution of acetonitrile -0.4% orthophosphoric acid with gradient elution in the current speed of 1.0ml.min, and the wavelength of detection was 327nm in chlorgenic acid and 280nm in Baicalin.ResultsThere was a good linear relationship diflerently in the range of 0.17-3.40μg in chlorgenic aeid and 0.33μg in Baicalin (r=0.9999).The Average recovery of the added sampie was 100.59%(RSD=0.94%) and 98.91%(RSD=1.14%)Differently.ConclusionThe established method in this article could determine accurately the contents of Baicalin and chlorogenic acid in Yinhuang Tablet . And the method was quick, accurate and had a good repeatability, so itcould apply on quality content of Yinhuang Tablet.

Yinhuang Tablet ; Chlorogenic acid ; Baicalin; High efficiency liquid ghromatography (HPLC); Diode array delector(DAD).

陈越，男，主管药师。研究方向：医院药学。E-mail：516442235@qq.com

R284.1

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1007-8517(2014)08-0018-02

2014.02.10)