穿孔素基因对噬血细胞综合征患儿细胞因子影响与临床分析

邹旭凤 任一帆 赵瑞

穿孔素基因对噬血细胞综合征患儿细胞因子影响与临床分析

邹旭凤 任一帆 赵瑞

目的 探讨穿孔素基因对HLH患儿血清IL-18、IL-10、IL-12、TNF-α、NF-Kβ及新碟呤的影响。方法 应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测20例HLH患儿确诊时、化疗第1～2周、第2～3周、第3～4周、第5～7周及8～10周, 共6组的血清IL-18、IL-10、IL-12、TNF-α、NF-Kβ及新碟呤水平变化,11例患儿穿孔素基因阴性, 5例患儿穿孔素基因阳性, 对穿孔素阴性组和阳性组的细胞因子水平进行比较。 结果 穿孔素阳性组的IL-10、IL-12、TNF-α水平明显高于穿孔素阴性组, 两组相比差异有统计学意义(P＜0.01)。穿孔素阳性组的IL-18水平高于穿孔素阴性组, 两组相比差异有统计学意义(P＜0.05)。穿孔素阳性组与穿孔素阴性组相比新碟呤水平无差异, 两组相比差异无统计学意义(P＞0.05)。结论 穿孔素基因影响HLH患儿IL-10、IL-12、TNF-α及IL-18的表达。

穿孔素基因；噬血细胞综合征；细胞因子；临床分析

噬血细胞综合征(HPS), 又称噬血细胞性淋巴组织细胞增多症(HLH), 该病病因病机错综复杂, 早期症状不典型, 诊断非常困难, 常因持续发热而与感染性疾病等相混淆, 且病情进展迅速, 许多患儿因不能明确诊断和及时治疗导致死亡。本研究对收治的16例HLH患儿血清细胞因子IL-18、IL-10、IL-12、TNF-α、NF-Kβ及新碟呤进行检测, 观察其变化,探讨穿孔素基因对HLH患儿细胞因子的影响, 现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 以2010年1月～2012年5月本科收治的20例HLH患儿为研究对象, 20例患儿中15例患儿穿孔素基因阴性, 5例穿孔素基因阳性。20名患儿中男12例, 女8例；年龄4个月～4.9岁。病例诊断均符合HLH-2004诊断标准,确诊前无糖皮质激素应用史。收集20例患儿确诊时、化疗第1～2周之间、第2～3周之间、第3～4周之间、第5～7周之间及第8～10周之间的血清标本, 检测IL-18、IL-10、IL-12、TNF-α、NF-Kβ及新碟呤水平变化,令穿孔素基因阴性的15例患儿为穿孔素基因阴性组, 5例穿孔素基因阳性的患儿为穿孔素阳性组, 将穿孔素基因阴性患儿和阳性患儿的细胞因子水平进行比较。各组资料具有可比性。

1.2 试剂和仪器 ELISA试剂盒购自美国RB公司。酶标仪购自上海热电仪器有限公司。高精度加样器及枪头购自德国BRAVD公司。恒温水箱购自北京市医疗设备厂。离心机购自安徽中科中佳科学仪器有限公司。

1.3 细胞因子测定 抽取患儿空腹静脉血2 ml, 3000转离心10 min后分离血清, 按一次用量分装, 冻存于-20°冰箱备用。检测之前室温下溶解标本, 并提前20 min取出试剂盒,平衡至室温。严格按照ELISA试剂盒说明书步骤检测IL-18、IL-10、IL-12、TNF-α、NF-Kβ及新碟呤水平。

2 结果

穿孔素阳性组的IL-10、IL-12、TNF-α水平明显高于穿孔素阴性组, 两组相比差异有统计学意义(P＜0.01)。穿孔素阳性组的IL-18水平高于穿孔素阴性组, 两组相比差异有统计学意义(P＜0.05)。穿孔素阳性组与穿孔素阴性组相比新碟呤水平无差异, 两组相比差异无统计学意义(P＞0.05), 结果见表1。5例穿孔素基因阳性的患儿死亡4例, 15例穿孔素基因阴性的患儿死亡3例。穿孔素阳性组5例患儿均出现多脏器功能损伤, 穿孔素阴性组15例患儿5例出现多脏器功能障碍。

表1 穿孔素基因阴性患儿与穿孔素基因阳性患儿IL-18、IL-10、IL-12、NF-Kβ、TNF-α及新碟呤水平比

表1 穿孔素基因阴性患儿与穿孔素基因阳性患儿IL-18、IL-10、IL-12、NF-Kβ、TNF-α及新碟呤水平比

组别nIL-18(pg/ml)IL-10(pg/ml)IL-12(pg/ml)NF-Kβ(pg/ml)TNF-α(pg/ml)新碟呤(nmol/liter)穿孔素阴性组15271.2±86.451.1±60.4108.8±73.49.6±3.75.4±2.819.1±16.4穿孔素阳性组5353.6±111.5213.5±133.5211.8±144.319.5±5.610.2±6.684.9±19.4 t -3.48-7.70-3.33-9.31-4.77-15.07 P＜0.05＜0.01＜0.01＜0.05＜0.01＞0.05

3 讨论

HLH分为原发性或遗传性HLH和继发性HLH两类, 其中原发性HLH又分为家族性HLH和免疫缺陷病两类, 家族性HLH分为FHL1～FHL5五型, 免疫缺陷病分为Chediak-Higashi 综合征、格利塞里综合征Ⅱ、X性联淋巴增生综合征1及X性联淋巴增生综合征2四型。原发性HLH患者多有噬血家族史或被证明有明确的基因突变, 多于1岁之内发病,偶见青少年和成年患者［1］。目前尚不能对所有患儿进行与原发性HLH有关的基因的缺陷, 本院对疑似HLH的患儿常规进行穿孔素基因检测。目前已知该基因编码穿孔素蛋白,该蛋白同细胞毒细胞颗粒内的颗粒酶B一起从细胞毒T淋巴细胞和NK细胞分泌结合在效应器和靶细胞之间。钙存在的条件下它能插入靶细胞膜(打孔), 并聚合形成诱导细胞死亡的孔, 孔的形成允许颗粒进入触发凋亡而致靶细胞破坏［2］。PRF1基因突变可导致穿孔素表达下调, 稳定性下降,从而影响穿孔素传递颗粒酶进入靶细胞诱导其凋亡和渗透性溶解, 最终导致FHL2的发生［1］。本研究中穿孔素阳性组的5例患儿均出现多脏器功能损伤, 4例患儿死亡, 比例远高于穿孔素阴性组, 提示穿孔素基因阳性的HLH患儿临床表现较重, 可能预后较差。

家族性噬血细胞综合征为常染色体隐性遗传疾病, 常无家族史, 主要见于婴幼儿, 发病率1/50000, 90%发生在2岁以下, 病死率极高。1999年Stepp等［3］首次证实定位于10q21的穿孔素基因与FHL-2有关, 约20%的HLH患儿存在穿孔素基因突变。但是该病具体发病机制不明, 多数人认为该病是由多种致病因素引起的淋巴细胞和组织细胞过度增殖、活化, 产生大量炎症因子, 从而引起的一种可危及生命的过度炎症反应［4,5］。有人认为随着化疗的进行及临床症状的好转, 患儿的细胞因子会逐渐下降至正常患儿水平。为避免化疗的不同阶段细胞因子下降程度不同对本试验的影响,本研究收集了HLH患儿化疗前8周内不同阶段的血清标本, 检测IL-18、IL-10、IL-12、NF-Kβ、TNF-α及新碟呤的活性, 以8周内不同阶段的因子总和为研究对象来探讨穿孔素基因对细胞因子的影响。研究发现：穿孔素阳性组的IL-10、IL-12、TNF-α水平明显高于穿孔素阴性组。穿孔素阳性组的IL-18水平轻度高于穿孔素阴性组, 提示穿孔素基因可能影响IL-10、IL-12、TNF-α及IL-18的表达,穿孔素基因阳性患儿细胞因子水平持续处于较高水平导致患儿预后较差。

［1］ Filipovich AH.Hemophagocytic lymphohistiocytosis(HLH) and related disorders.Hematology Am Soc Hematol Educ Program, 2009, 2009(1):127 -131.

［2］ 王学文.噬血细胞性淋巴组织细胞增生症的诊断和治疗策略.东南国防医药, 2009,11(1):40-44.

［3］ Dufourcq-Lagelouse R, Jabado N, Le Deist F,et al.Linkage of familial hemophagocytic lymphohistiocytosis to 10q21-22 and evidence for heterogeneity.The American Journal of Human Genetics, 1999, 64(1): 172-179.

［4］ 陈纬凤.T细胞亚群及其细胞因子在噬血细胞性淋巴组织细胞增多症中的作用.国际输血及血液学杂志,2012,35(1):89-92.

［5］ Ohga S, Kudo K, Ishii E, et al.Hematopoietic stem cell transplantation for familial hemophagocytic lymphohistiocytosis and Epstein-Barr virus-associated hemophagocytic lymphohistiocytosis in Japan.Pediatr Blood Cancer, 2010,54(2):299-305.

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