HPLC法测定肾石消胶囊中迷迭香酸的含量

平崇 郭迎霞 吴海霞

·药物研究·

HPLC法测定肾石消胶囊中迷迭香酸的含量

平崇 郭迎霞 吴海霞

目的建立用反相高效液相色谱法测定肾石消胶囊中迷迭香酸含量的方法。方法采用SHIMADZU VP-ODS 5μm 250×4.6 mm色谱柱，以甲醇-0.1%三氟乙酸(40：60)为流动相，流速1.0 mL/min，检测波长为330 nm。结果迷迭香酸进样量在0.5015～5.0151 μg范围内线性关系良好(r=0.9998)(n=5)，平均回收率为99.6%，RSD为0.57%。结论该法结果准确、方法简便、分离度高，可用于该制剂的质量控制。

高效液相色谱法；肾石消胶囊；迷迭香酸

肾石消胶囊是邯郸市中医院的自制制剂，在临床应用疗效显著，由夏枯草、延胡索、金钱草等九味中药材组成。具化石排石、利湿止痛的功效,主要用于泌尿系结石及泌尿系感染的治疗。此制剂现有质量标准简单，尚无定量内容，经查阅和参考相关文献[1，2]，建立了用高效液相色谱法测定其君药夏枯草有效成分迷迭香酸的含量，该方法简单、准确、灵敏度高，为制定其质量标准打下了基础。

1 仪器与试药

岛津LC-2010AHT高效液相色谱仪(日本岛津)，检测器：UV-VIS，LCsolution色谱工作站；T1901型紫外可见分光光度计(北京普析通用)；AUW120D电子天平(日本岛津)(十万分之一)；KQ-400KDE型高功率数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)(功率：400W、频率：40KHZ)；迷迭香酸对照品(批号：111871-201203，含量：98.8%，中国食品药品检定研究院)；肾石消胶囊(邯郸市中医院提供)(生产批号：120101、120201、120301、120302、120303、120401)；甲醇为色谱纯，水为纯化水,其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：SHIMADZU VP-ODS 5 μm 250×4.6 mm (日本岛津)；流动相：甲醇-0.1%三氟乙酸(40：60)；流速：1 ml/min；检测波长：330 nm；进样量：10 μl；理论塔板数按迷迭香酸峰计算不低于5 000。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备：精密称取迷迭香酸对照品0.01269 g，置50 ml容量瓶中，加稀乙醇至刻度，摇匀，制成每毫升含0.251 mg的溶液，作为对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备：精密称取本品2 g，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇50 ml，称定重量，超声处理20 min，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.3 阴性对照溶液的制备：按处方比例依据该制剂制备工艺制备不含夏枯草的阴性对照供试品，依据供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。

2.3 方法学确证

2.3.1 线性关系考察：分别精密吸取对照品溶液2、5、10、15、20 μl注入液相色谱仪，测定峰面积，以迷迭香酸进样量X(μg)为横坐标，峰面积Y为纵坐标，进行线性回归，得回归方程：Y= 1.584×106X-1.275×10-4，r=0.9998。结果表明，迷迭香酸进样量在0.5015～5.0151 μg范围内呈良好的线性关系。

2.3.2 专属性试验：分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各10 μl，按上述色谱条件注入液相色谱仪，测定。结果阴性对照溶液在与迷迭香酸对照品主峰的保留时间相同位置峰处无色谱峰(见图1)。

图1 肾石消胶囊液相色谱图

2.3.3 精密度试验：精密吸取同一对照品溶液(浓度为0.251 mg/ml)10 μl，重复进样5次,计算迷迭香酸色谱峰面积的RSD为0.23%(n=5)。结果表明精密度良好。

2.3.4 重复性试验：取同一批号(120101)样品5份，按2.2.2项下方法操作，在上述色谱条件下进样测定，迷迭香酸平均含量为0.236 mg/g，RSD为0.41%(n=5)。结果表明方法重复性良好。

2.3.5 稳定性试验：取同一供试品溶液(批号为120101)，分别于0、2、4、8、12、24按上述色谱条件测定，测得迷迭香酸峰面积RSD为0.39%，结果表明供试品溶液室温下放置24 h稳定。

2.3.6 回收率试验：取已知含量的同一批号(批号：120101，含量0.236 mg/g)样品共6份，每份约1.0 g，精密称定，每份样品分别精密加入低、中、高浓度迷迭香酸对照液(分别精密量取迷迭香酸对照品溶液4、5、6 ml，分置250 ml容量瓶中，加稀乙醇稀释至刻度，备用)50 ml，称定重量，按2.2.2项下方法操作，在上述色谱条件下测定。见表1。

表1 迷迭香酸回收率测定结果

2.4 样品测定 按2.2.2项下的方法，在上述色谱条件下进样测定(n=4)，测得6批样品含量分别为0.236 mg/g(RSD=0.33%)、0.244 mg/g(RSD=0.37%)、0.242 mg/g(RSD=0.19%)、0.245 mg/g(RSD=0.26%)、0.216 mg/g(RSD=0.49%)、0.217 mg/g(RSD=0.41%)。

3 讨论

3.1 用紫外分光光度法对迷迭香酸对照品溶液在200～400 nm范围扫描，在199 nm和331nm处有最大吸收峰，考虑到流动相在低波处有较强的末端吸收，为减少干扰，提高信噪比，选择与《中国药典》2010年版夏枯草含量测定项下的330 nm处为检测波长。

3.2 本试验供试品溶液制备对超声时间进行了考察了，分别超声10、15、20、25、30、35 min后进行测定，测定结果显示20 min时测定成分已经提取完全，故超声时间定为20 min即可充分提取。

1 国家药典委员会.中国药典(一部).北京：中国医药科技出版社，2010.263.

2 李伟光，梁敬钰.迷迭香酸的研究进展.海峡药学，2004,16:121.

10.3969/j.issn.1002-7386.2014.10.054

056001 河北省邯郸第三棉纺织有限公司职工医院药剂科(平崇)；河北省邯郸市食品药品检验中心(郭迎霞、吴海霞)

R 917.4

A

1002-7386(2014)10-1558-02

2013-11-11)