COX-2及PCNA在腺性膀胱炎中的表达及临床意义

王磊 王炜 王照 尹海军 徐学军 张传光 张爱民 高景宇

·论著·

COX-2及PCNA在腺性膀胱炎中的表达及临床意义

王磊 王炜 王照 尹海军 徐学军 张传光 张爱民 高景宇

目的探讨环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)与增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)在腺性膀胱炎中的表达及其临床意义。方法应用免疫组织化学方法，检测20例正常膀胱黏膜、30例腺性膀胱炎、20例膀胱移行细胞癌中COX-2及PCNA的表达。结果COX-2在腺性膀胱炎中表达阳性率比其在正常膀胱黏膜中表达的阳性率有所增高，比其在膀胱移行细胞癌中表达的阳性率有所降低，但均无统计学意义(P>0.05)；PCNA在腺性膀胱炎中表达的阳性率显著高于其在正常膀胱黏膜中表达的阳性率(P<0.05)，与其在膀胱移行细胞癌中表达的阳性率比较，有所降低，但差异无统计学意义(P>0.05)。COX-2和PCNA在膀胱移行细胞癌中表达的阳性率均显著高于其在正常膀胱黏膜中表达的阳性率(P<0.05)。结论COX-2及PCNA的表达在膀胱肿瘤的发生中起重要作用，推测腺性膀胱炎为良性病变，有向恶性病变发展的潜能，COX-2及PCNA在研究腺性膀胱炎与膀胱肿瘤的关系中具有重要意义。

腺性膀胱炎；膀胱移行细胞癌；COX-2；PCNA；免疫组织化学

近年来研究表明，环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)除参与炎性反应外，其过度表达与多种上皮性肿瘤发生发展关系密切，包括前列腺肿瘤、膀胱肿瘤等，并可作为预防及治疗肿瘤的靶分子[1,2]。此外，研究表明增殖细胞核抗原(proliferative cell nuclear antigen,PCNA)的阳性表达程度与肿瘤的增殖活性、转移复发率及预后情况有显著的相关性[3,4]，现已成为检测肿瘤细胞增殖动力的有效指标。本研究应用免疫组织化学方法观察了COX-2及PCNA在正常膀胱黏膜、腺性膀胱炎和膀胱移行细胞癌中的表达情况，以探讨二者在腺性膀胱炎中的表达及其临床意义。

1 材料与方法

1.1 材料选择 采用河北医科大学第一医院2006至2008年人正常膀胱黏膜20例、腺性膀胱炎标本30例、膀胱移行细胞癌20例。所有标本均经病理证实。其中腺性膀胱炎标本均为术前活检标本。正常膀胱黏膜为活检标本。膀胱移行细胞癌标本为经尿道膀胱肿瘤电切术后及膀胱全切术后标本。术前未行任何治疗。病理分级按WHO分级标准，其中G1级11例，G2级6例，G3级3例。临床分期按UICC-TNM标准，根据临床及病理资料确定，其中Tis-T1(浅表性)15例，T2-T4(浸润性)5例。

1.2 主要仪器及试剂 鼠抗人COX-2单克隆抗体(美国Santa Cruz公司产品)；鼠抗人PCNA单克隆抗体(美国Santa Cruz公司产品)；DAB试剂盒；S-P试剂盒。以上产品购于河北博海生物工程开发有限公司。

1.3 免疫组织化学法 从所取标本上切取小于0.5 cm×0.5 cm×0.1 cm的组织块，用4%多聚甲醛固定，石蜡包埋。石蜡切片脱蜡至水后，1%甲醇双氧水，室温孵育10 min，微波修复抗原，冷却至室温后，滴加正常山羊血清封闭液，室温20 min，甩去血清后滴加COX-2或PCNA一抗，置4℃湿盒中过夜。0.01 mol/L PBS冲洗3次×5 min，滴加生物素化二抗37℃孵育20 min。0.01 mol/L PBS冲洗3次×5 min，滴加辣根酶标记链霉卵白素工作液，37℃孵育20 min。0.01 mol/L PBS冲洗3次×5 min，将DAB显色试剂盒中显色剂A、B、C各一滴加入1 ml蒸馏水中，混匀，加至切片上，显微镜下控制显色时间。最后用苏木素复染(PCNA不复染)。每次实验均设阴性对照，以PBS代替一抗。

1.4 免疫组织化学染色判断标准 COX-2阳性染色表现为以细胞浆中可见棕黄色或棕褐色颗粒，不着色为阴性。PCNA以细胞核发现棕黄色或棕褐色颗粒为阳性染色。借助多功能真彩色细胞图像分析系统，每张切片连续观察5个高倍视野(400倍)，计算出各自的阳性细胞百分率。染色结果结合阳性细胞百分率和染色强度进行半定量分析。结果判定标准：染色阴性为0分，染色弱浅黄色为1分，染色清晰棕黄色为2分，染色强呈棕褐色为3分；阳性细胞百分率<10%为0分，10%～25%为1分，26%～50%为2分，>50%为3分。两项指标之和≤2分为阴性，>2分为阳性。

1.5 统计学分析 应用SPSS 13.0统计软件，计数资料采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 COX-2和PCNA在腺性膀胱炎、膀胱移行细胞癌及正常膀胱黏膜中的表达 COX-2在正常膀胱黏膜中的阳性表达率为5%(1/20)，在腺性膀胱炎中的表达阳性率为30%(9/30)，在膀胱移行细胞癌中表达阳性率为55%(11/20)。PCNA在正常膀胱黏膜无阳性表达(0/20)，在腺性膀胱炎中表达阳性率为26.67%(8/30)，在膀胱移行细胞癌中表达阳性率为45%(9/20)。见表1、2，图1、2。

2.2 COX-2在腺性膀胱炎、膀胱移行细胞癌及正常膀胱黏膜中表达的关系 COX-2在正常膀胱黏膜、腺性膀胱炎与膀胱移行细胞癌3组间表达的阳性率差异有统计学意义(P<0.05)。与正常膀胱黏膜表达的阳性率相比，COX-2在膀胱移行细胞癌中表达的阳性率显著增高(P<0.05)，在腺性膀胱炎中表达的阳性率也增高，但无统计学意义(P>0.05)。与膀胱移行细胞癌表达的阳性率相比，COX-2在腺性膀胱炎中表达的阳性率降低，但无统计学意义(P>0.05)。见表1。

2.3 PCNA在腺性膀胱炎、膀胱移行细胞癌及正常膀胱粘膜中表达的关系 PCNA在正常膀胱黏膜、腺性膀胱炎与膀胱移行细胞癌三组间表达的阳性率差异有统计学意义(P<0.05)。PCNA在正常膀胱黏膜中无表达，但在腺性膀胱炎和膀胱移行细胞癌中表达的阳性率则显著增高(P<0.05)；与膀胱移行细胞癌相比，PCNA在腺性膀胱炎中表达的阳性率较低，但二者的差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

图1 COX-2在各组织中的表达(400×)

图2 PCNA在各组织中的表达(400×)

表1 COX-2在3组组织中表达的比较 例(%)

表2 PCNA在3种组织中表达的比较 例(%)

3 讨论

近年来随着腔内泌尿外科的发展，临床和病理医师对本病的认识逐渐提高，腺性膀胱炎确诊率有增高趋势。关于腺性膀胱炎与膀胱肿瘤的关系，目前仍有争论。虽然，腺性膀胱炎(特别是肠上皮型)发展为膀胱腺癌的病例也时有报道[5-7]，但要证实腺性膀胱炎为膀胱肿瘤的癌前病变尚缺乏确切的证据。膀胱癌是我国泌尿系统发病率最高的恶性肿瘤，术后复发或转移是导致治疗失败的常见原因，因此，研究腺性膀胱炎和膀胱移行细胞癌之间的关系，对于早期发现膀胱癌、降低术后复发或转移，提高患者的生存率具有重要意义。

环氧化酶(Cyclooxygenase，COX)是催化花生四烯酸转化为重要活性物质前列腺素初始步骤的关键限速酶。哺乳动物的COX有两种形式，即COX-1及COX-2。COX-1在正常人体表达于大多数组织中，其催化产生的前列素参与维持机体正常的生理功能。COX-2是一种诱导酶，其过度表达参与多种恶性肿瘤的发生发展[8]。本研究结果显示，COX-2在正常膀胱黏膜、腺性膀胱炎与膀胱移行细胞癌三组间表达的阳性率有显著性差异，提示COX-2可用于研究腺性膀胱炎与膀胱肿瘤的关系。但COX-2在腺性膀胱炎的表达阳性率与正常膀胱黏膜及膀胱移行细胞癌的表达阳性率相比，均无差异，可能与研究样本量偏少有关，需进一步加大样本量进行研究。COX-2在腺性膀胱炎中的表达阳性率界于正常膀胱黏膜和膀胱移行细胞癌之间。推测腺性膀胱炎可能具有正常膀胱黏膜向膀胱移行细胞癌过渡的表现。此外，COX-2在膀胱移行细胞癌中的表达阳性率显著高于正常膀胱黏膜表达的阳性率，提示COX-2参与膀胱肿瘤的发生发展。

PCNA作为真核细胞DNA聚合酶δ的辅助蛋白，协调DNA的复制过程。同时，PCNA还作为功能转换因子，通过不同调控方式与多种细胞因子作用，参与DNA损伤修复、细胞周期调控及凋亡等许多重要的细胞事件，且与肿瘤等细胞增殖性疾病的发生发展存在相关性[9]。在PCNA与膀胱肿瘤关系的研究中发现，PCNA在膀胱癌中有较高表达率，并且其表达与判断预后的指标如肿瘤病理分级、临床分期等也具有相关性，因此，PCNA的表达可作为判断膀胱癌预后的指标之一。本研究结果显示，PCNA在正常膀胱黏膜、腺性膀胱炎与膀胱移行细胞癌三组间表达的阳性率有显著性差异，提示PCNA可用于研究腺性膀胱炎与膀胱肿瘤的关系。PCNA在腺性膀胱炎与膀胱移行细胞癌表达的阳性率均显著高于正常膀胱黏膜表达的阳性率，推测腺性膀胱炎的增殖活性介于正常膀胱黏膜与膀胱移行细胞癌之间，提示腺性膀胱炎具有恶变潜能。

综上所述，腺性膀胱炎可能具有正常膀胱粘膜向膀胱移行细胞癌过渡的表现，COX-2及PCNA在研究腺性膀胱炎与膀胱肿瘤的关系中具有重要意义。

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3 Cappello F,Ribbene A,Campanella C,et al.The value of immunohistochemical research on PCNA,p53 and heat shock proteins in prostate cancer management: a review.Eur J Histochem,2006,50:25-34.

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7 Szen S,Gürocak S,Uzüm N,et al.The importance of re-evaluation in patients with cystitis glandularis associated with pelvic lipomatosis: a case report.Urol Oncol,2004,22:428-430.

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ExpressionandclinicalsignificanceofCOX-2andPCNAincystitisglandularis

WANGLei*,WANGWei,WANGZhao*,etal.*DepartmentofUrology,TheFirstHospitalofHebeiMedicalUniversity,Shijiazhuang050031,China

ObjectiveTo explore the expression and clinical significance of cyclooxygenase-2 (COX-2) and proliferating cell nuclear antigen (PCNA) in cystitis glandularis.MethodsThe immunohistochemistry was used to examine the expression levels of COX-2 and PCNA in 20 cases of normal mucosa of bladder,30 cases of cystitis glandularis and 20 cases of transitional cell carcinoma of bladder.ResultsThe positive expression rate of COX-2 in cystitis glandularis was 30% (9/30),which was higher than that in normal mucosa of bladder (5%,1/20),however,which was lower than that in transitional cell carcinoma of bladder (55%,11/20),but there were no significances among them (P>0.05).The positive expression rate of PCNA in cystitis glandularis was 26.67%(8/30),which was significantly higher than that in normal mucosa of bladder (0,0/20) (P<0.05),which was lower than that in transitional cell carcinoma of bladder,but there was no significant difference among them (P>0.05).The positive expression rates both COX-2 and PCNA in transitional cell carcinoma of bladder were significantly higher than those in normal mucosa of bladder (P<0.05).ConclusionThe expression of COX-2 and PCNA plays an important role in the pathogenesis of bladder neoplasms,and cystitis glandularis is benign lesion,however,which has potentiality to become malignant lesion,so the study about the correlation between expression of COX-2,PCNA in cystitis glandularis and pathogenesis of bladder neoplasms has important significance.

cystitis glandularis; transitional cell carcinoma of bladder; COX-2; PCNA; immunohistochemistry

10.3969/j.issn.1002-7386.2014.10.006

项目来源：河北省科学技术研究与发展支撑计划项目(编号：112761139)

050031 石家庄市，河北医科大学第一医院泌尿外科(王磊、王照、尹海军、徐学军、张传光、张爱民、高景宇)；河北省承德市疾病预防控制中心(王炜)

R 694.3

A

1002-7386(2014)10-1458-03

2013-11-29)