参红补血颗粒对乙酰苯肼/环磷酰胺血虚证模型动物免疫调节相关因子的影响

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(1.长春中医药大学，长春 130117；2.中国中医科学院，北京 100700)

参红补血颗粒对乙酰苯肼/环磷酰胺血虚证模型动物免疫调节相关因子的影响

张文卓1，杨海淼1，张硕1，常影1，崔云晶1，仇志凯1，段青2，黄晓巍1*

(1.长春中医药大学，长春 130117；2.中国中医科学院，北京 100700)

目的 观察参红补血颗粒对乙酰苯肼/环磷酰胺血虚证模型动物免疫调节相关因子的变化，探讨参红补血颗粒对血虚证动物免疫功能的影响及相关机制。方法 采用乙酰苯肼/环磷酰胺复合因素复制血虚证动物模型,酶联免疫法检测动物血清白细胞介素-2(IL-2)，白细胞介素-6(IL-6)，肿瘤坏死因子(TNF)的含量变化,取脾脏，计算脾脏系数。结果 参红补血颗粒各给药组动物血清中IL-2、IL-6、TNF含量均明显高于模型组(P<0.05,P<0.01)，脾脏指数均低于模型组(P<0.05)。结论 参红补血颗粒可增加与免疫功能有关的细胞因子的含量，降低脾脏系数，提示参红补血颗粒可能通过调节与免疫功能有关的细胞因子，改善血虚证模型动物的免疫功能。

参红补血颗粒；血虚证；IL-2；IL-6；TNF；脾脏系数

血虚证属中医“虚劳”“血虚”“血证”“血枯”“亡血”等范畴，见于现代医学中的再生障碍性贫血，肿瘤放化疗后的贫血、慢性消耗性疾病等造血功能障碍性疾病[1-2]。参红补血颗粒主要由红参、红景天、黄精、丹参、麦冬等组成，具有益气滋阴、补血活血的功效，作为院内制剂应用多年，对血虚证治疗有明显的疗效。本研究采用乙酰苯肼/环磷酰胺复合因素复制血虚证动物模型,观察参红补血颗粒对模型动物免疫功能相关因子的变化，探讨参红补血颗粒对血虚证动物免疫功能的影响及相关机制。

1 材料与方法

1.1 材料 ICR小鼠，60只，雌雄各半，体质量(18±2)g，吉林大学实验动物部提供(动物合格证号20144877)；参红补血颗粒：长春中医药大学附属医院实验研究中心制备(每克含生药量1.39 g)；复方阿胶浆：山东东阿阿胶股份有限公司产品(批号：111154)；注射用环磷酰胺：Baxter Oncology GmbH公司产品(批号：1B640A)；乙酰苯肼：国药集团化学试剂有限公司(批号：F20110127)；IL-2试剂盒、IL-6试剂盒、TNF试剂盒,均购自美国R&D公司。

1.2 仪器 血液分析仪(MEK-6318K型，日本)；恒温箱(ULT1386-3-V41型，美国);酶标仪(BIO RAD-680型，日本)；台式高速冷冻离心机(Biofuge stratos型，德国)。

1.3 方法

1.3.1 血虚证动物模型的复制[3-5]除空白对照组外,其他各组动物于实验第2天，经皮下注射乙酰苯肼20 mg/kg,于第4天 ，再次皮下注射乙酰苯肼40 mg/kg,同时从第4天起，动物经腹腔注射环磷酰胺40 mg/kg，1次/d，连续4 d。复制血虚证动物模型。空白对照组动物皮下注射等容量生理盐水。

1.3.2 实验动物分组及给药方法 取小鼠60只，雌雄各半，随机分为6组，即空白对照组、模型对照组、阳性对照组、参红补血颗粒高、中、低剂量组，每组10只。

1.3.3 给药剂量与方法 于实验第1天起开始给予受试药物，剂量分别为：参红补血颗粒高剂量组9 g/kg、中剂量组6 g/kg、低剂量组3 g/kg，阳性对照组给予复方阿胶浆11 mL/kg，空白对照组与模型对照组小鼠给予等容量蒸馏水。1次/d，连续给药14 d。末次给药后30min，眶静脉取血，室温静置4 h后，2 500 r/min离心10 min，分离出血清,-20 ℃冰箱保存备用。

1.3.4 观察指标 白细胞介素2(IL-2)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF)。脾脏指数：处死小鼠后，在无菌条件下取出脾脏， 脾脏用滤纸吸干残血后称重。脾脏指数=脾脏湿重(g)/体质量(g)×100%。

2 结果

2.1 参红补血颗粒对血虚模型小鼠血清IL-2含量的影响 见表1。

表1 各组动物血清IL-2表达水平的比较 pg/mL

注：与空白对照组比较,#P<0.05；与模型组比较,△P<0.05

2.2 参红补血颗粒对血虚模型小鼠血清白细胞介素-6(IL-6)水平的影响 见表2。

2.3 参红补血颗粒对血虚模型小鼠血清TNF水平的影响 见表3。

表2 各组动物血清IL-6表达水平的比较 pg/mL

注:与空白对照组比较,#P<0.05；与模型组比较,△P<0.05,△△P<0.01

表3 各组动物血清TNF表达水平的比较 pg/mL

注：与空白对照组比较，##P<0.01；与模型组比较，△P<0.05

2.4 参红补血颗粒对血虚模型小鼠脾脏指数的影响 见表4。

表4 各组动物脾脏指数的比较 pg/mL

注:与空白对照组比较,##P<0.001；与模型组比较,△△P<0.01

3 讨论

祖国医学认为，人身不外气、血二字，气血为人体立命之本，气卫于外，血营于内，无形之气寓于有形之血中，有形之血藏于阳气之内，有形之血赖于无形之气推动，无形之气赖于有形之血濡养[6]。因此血旺则气强，血虚则气弱，卫外则不足。参红补血颗粒正是基于气血相生相容的密切关系，通过益气滋阴，养血补血。方中红参具有大补元气，复脉固脱，益气摄血等功能，黄精、麦冬具有滋阴补血功效，红景天、丹参具有补血益气，扶正固本等功效，诸药配合具有益气生血之功效。

研究[7-8]表明，血虚症与免疫功能相关，凡机体气血两虚时，常伴有免疫功能低下，临床上治疗免疫功能异常往往通过调理气血来实现。

IL-2具有刺激NK细胞增殖，增强NK杀伤活性，促进B细胞增殖和分泌抗体、激活巨噬细胞等多重功能，是参与细胞免疫的重要因子。IL-6具有刺激活化B细胞增殖，促进抗体分泌，刺激T细胞增殖,促进肝细胞合成蛋白、促进血细胞发育等功效,对细胞免疫和体液免疫均有明显的影响。TNF主要由活化的巨噬细胞、NK细胞及T淋巴细胞产生，具有免疫调节作用[9]。

本研究中采用乙酰苯肼/环磷酰胺复合因素复制血虚证模型动物,观察参红补血颗粒对模型动物血清IL-2、IL-6和TNF含量的影响，结果证明,血虚证模型动物的上述相关细胞因子含量明显下降，参红补血颗粒给药组动物血清IL-2、IL-6和TNF含量明显升高,提示参红补血颗粒对血虚证模型动物的免疫功能有明显的调节作用。

脾脏是体内重要的免疫器官，当感染或损伤时脾脏随之发生明显的变化，脾脏指数通常可以作为反映免疫功能变化的指标。当机体免疫功能受损时，脾脏可能出现代偿性增大，功能亢进或脏器充血、水肿或增生等[10]。本研究表明参红补血颗粒可降低模型动物脾脏指数，表明对动物免疫器官有调节作用。

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EffectsofShenhongBuxueGranuleontherelatedcytokinesofimmunoregulationofmodelanimalwithphenylhydrazine/cyclophosphamidetypeofblooddeficiency

ZHANG Wenzhuo1,YANG Haimiao1,ZHANG Shuo1,CHANG Ying1,CUI Yunjing1,QIU Zhikai1,DUAN Qing2,HUANG Xiaowei1*

(1.Changchun University of Traditional Chinese Medicine,Changchun 130117,China;2.China Academy of Traditional Chinese Medicine,Beijing 100700,China)

ObjectiveTo observe the changes ofShenhongBuxueGranuleon the related cytokines of immunoregulation of model animal with phenylhydrazine/cyclophosphamide type of blood deficiency and to explore the effects and related mechanism ofShenhongBuxueGranuleon the immune function of animals with blood deficiency.MethodsModels of animals with blood deficiency were replicated by compound factors of phenylhydrazine/cyclophosphamide.The content changes of IL-2,IL-6 and tumor necrosis factor (TNF) were detected by enzyme-linked immune sorbent assay(ELISA),the spleen was taken out and the spleen coefficient was calculated.ResultsThe content of IL-2,IL-6 e and TNF in every drug group ofShenhongBuxueGranulewas significantly higher than those in the model group(P<0.05，0.01),while the spleen coefficient in every drug group ofShenhongBuxueGranulewas lower than that in the model group(P<0.05).ConclusionsShenhongBuxueGranulecan increase the content of the related cytokines of immune function,decrease the spleen coefficient,showing thatShenhongBuxueGranulemay improve the immune function of model animal with blood deficiency through regulating the related cytokines of immune function.

ShenhongBuxueGranule;blood deficiency syndrome;IL-2;IL-6;TNF;spleen coefficient

10.13463/j.cnki.cczyy.2014.05.006

吉林省科技发展计划项目(201109031)。

张文卓(1987-)，女，硕士研究生。研究方向：心脑血管疾病中西医结合基础研究。

] 黄晓巍，女，主任药师，硕士研究生导师，电话：0431-86172281，电子信箱：15948000740@163.com。

R285.5

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：2095-6258(2014)05-0776-03

2014-04-22)

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