胶体金免疫层析法检测饲料中玉米赤霉烯酮的残留

刘宏军 冯才茂 王瑟如 吴发振 余厚美 仲晓兰

（①江苏省泰州市姜堰区动物卫生监督所 225500 ②北京勤邦生物技术有限公司）

玉米赤霉烯酮(Zearalenone，ZEN)为一种白色结晶，又称F-2毒素，是由禾谷镰刀菌等菌种产生的有毒代谢产物。ZEN主要污染玉米、高粱、小麦、大麦等粮谷类作物及其制品。受到ZEN污染的乳制品、肉制品等动物源性食品，会对动物及人类造成危害，主要表现在影响和破坏生长发育及生殖系统方面，人畜误食含有该毒素的食物后，会引起雌性激素中毒症，造成生殖系统的严重损伤。此外，ZEN及其衍生物对肝脏系统，免疫系统均有很大的危害，并且有引发肿瘤的可能性[1,2]。

目前大多数国家对食品、谷物、饲料中的玉米赤霉烯酮含量都有十分严格的规定。例如澳大利亚规定谷物中玉米赤霉烯酮的含量不能超过0.05mg/kg；意大利规定在谷物和谷类产品中玉米赤霉烯酮的含量不能超过0.1mg/kg；而在法国，植物油和谷类当中玉米赤霉烯酮的含量必须低于0.2mg/kg。中国则规定配合饲料、玉米中的玉米赤霉烯酮含量不得超过500ng/g。

玉米赤霉烯酮的分析测定一般采用薄层色谱法(TLC)、酶联吸附免疫法(ELISA)和高效液相色谱法(HPLC)[3-9]。TLC法繁琐费时，且灵敏度、特异性较差，提取过程中所需有机溶剂品种多且量大，易污染环境，对人体有较大危害。常规的HPLC法虽然比TLC灵敏度高，但由于样品前处理手续繁琐，操作复杂，不宜推广。以上包括ELISA法在内的几种方法均耗时较长，而随着商品经济的发展，人们对时间概念的加强，无论是商家还是政府部门对检测时间的要求越来越高，因此，胶体金试纸条作为一种快速检测技术，能很好的解决这个问题，提高检测效率，缩减检测时间。

1 材料与方法

1.1 试验材料

饲料样品购自市场；玉米赤霉烯酮标准品购自美国Sigma公司；玉米赤霉烯酮快速检测试纸条来自北京勤邦生物技术有限公司；微量移液器购自美国Thermo公司。

1.2 试验方法

1.2.1 试样制备 样本前处理方法：称取5.0±0.05g粉碎的饲料样品至50ml聚苯乙烯离心管中，加入5ml甲醇，将瓶塞盖紧，振荡5min；室温(20～25℃)，3000r/min以上离心5min；移取0.1ml上清液至盛有0.9ml样本复溶液的2ml聚苯乙烯离心管中混匀，涡动30s。阴性饲料样品：空白饲料样品经前处理后，配制成浓度分别为0和该试纸条检测限下限的1/2。阳性饲料样品：空白饲料样品经前处理后，配制成浓度分别为该试纸条检测限和检测限的2倍。

1.2.2 试纸条的使用步骤 用吸管吸取稀释后的待检样品溶液垂直滴加3滴于加样孔；液体流动时开始计时，反应5～10min，判定结果。

1.2.3 结果判定 如果C线和T线都显色，无论颜色深浅，均表示饲料样品中玉米赤霉烯酮浓度低于检测限，为阴性结果；如果C线显色，T线不显色，表示饲料样品中玉米赤霉烯酮浓度等于或高于检测限，为阳性结果；如果未出现C线，表明不正确的操作过程或试纸条已变质失效(如附图)。

附图 玉米赤霉烯酮快速检测试纸条示意图

1.2.4 检测限的测定 用玉米赤霉烯酮试纸条分别对添加不同浓度的阴性饲料、阳性饲料进行检测，每个样品做2个重复，记录每种呈现阳性的最低浓度值。如果检测限下限浓度的阳性饲料样品不呈现阳性，则根据检测限(检测限有下限和上限的则在检测限内选择更高的浓度进行检测)配制浓度更高的阳性饲料样品进行检测，直至出现阳性结果为止。

1.2.5 假阳性率的测定 取空白的饲料样品50份，制备B1、B2、B3、……、B50等100份阴性饲料样品。对阴性饲料样品用试纸条检测，每个样品做2个重复，统计假阳性数，按照下面的公式计算假阳性率。

1.2.6 假阴性率的测定 取空白的饲料样品50份，制备B1、B2、B3、……、B50等100份阳性饲料样品，对阳性饲料样品用试纸条检测，每个样品做2个重复，统计假阴性数，按照下面的公式计算假阴性率。

2 结果

用玉米赤霉烯酮试纸条对饲料进行了检测限、假阳性率、假阴性率验证，结果如附表。

附表 试纸条检测结果

3 讨论

玉米赤霉烯酮试纸条的检测限为500ng/g，符合GB 13078.2-2006《饲料卫生标准 饲料中赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮的允许量》。同时，国内外对于快速检测技术的一个基本原则是：绝不能有假阴性，但允许有假阳性，按照农业部兽药残专家委员会《兽药残留检测试纸条(条、卡)备案技术资料要求及审查工作程序》，快速试纸条的假阳性率应小于5%。本试纸条符合国家标准和该备案技术要求。

玉米赤霉烯酮试纸条操作简便，结果容易观察，不需要任何设备，整个操作时间仅需5～10min，相对与仪器等方法，具有工作量小，成本低的明显优势，十分适用于我国基层检测实验室、政府部门的市场监控检测、临时抽检、排查工作，能够实现生物技术在食品安全流通消费领域的方便、快速检测[10]。

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