浅析针剂生产中热原的控制

张亚楠（上海现代哈森（商丘）药业有限公司 河南 商丘 476000）

热原(Pyrogen)又称内毒素，注人人体可引起不良反应，可使人体产生发冷、寒颤、发热、出汗、恶心、呕吐等症状，有时体温可升至40"C以上，严重者甚至昏迷、虚脱，如不及时抢救可危及生命。因此国家食品药品监督管理局指出“生产工艺过程中应明确除热原(或细菌内毒素)的方法及条件，如活性炭的用量、处理方法、加入时机、加热温度及时间等，并考察除热原效果及对药物成份的影响。应提供相关研究资料。”因此建立一种注射剂生产工艺过程中的热原去除效果评价方法。

一、方法与结果

1.水中热原去除效果试验

取注射用水45Inl，加5rnl自制热原，取1ml作为对照，其余加0.25g活性炭，加热至微沸，保持15分钟，过滤，取1ml滤过液作为活性炭吸附供试品溶液。取去离子水1000ml，加50ml自制热原，取1ml作为对照，其余超滤，取1ml滤过液作为超滤供试品溶液。对照溶液梯度稀释(10倍、下同)，取1／1000和1／10000两个浓度，分别取0.1ml，加0.1ml鲎试剂，仪器测定。活性炭吸附供试品溶液和超滤供试品溶液各取原液和1／10两个浓度，分别取0.1ml，加0.1ml鲎试剂，仪器测定。重复试验三次。

2.内毒素测定方法

内毒素含量测定采用鲎试剂动态比浊法进行含量测定，采用光密度反应时间法测定含量。

(1)细菌内毒素标准曲线的制备：取细菌内毒素工作标准品1支，用细菌内毒检查用水将内毒素进行2倍稀释，使其最终浓度分别为 2.0、1.0、0.5、0.25、0.125EU ／ml的稀释系列，各取0.1ml分别加到预先加有0．1mlTAL的反应管内，混合均匀，插入BET一72细菌内毒素测定系统内进行检测，每个浓度重复3管。

3.评价方法

以最终内毒素量下降倍数的对数值来判断其有效性，美国药典与欧洲药典分别以下降3个与4个对数(3log与41og)为有效，参照上述标准，该方案的评价指标为：设备在空载加水运行状态，热原去除倍数的log值不小于4，设备负载加药液运行状态，热原去除倍数的log值不小于3。如达不到上述评价指标则计算内毒素吸附率。内毒素吸附率=1-(试验数值÷对照数值)X100%

4.结论与讨论

(1)实验结果表明活性炭对于去除热原确实有效，但大剂量细菌内毒素污染的情况下不能彻底去除。活性炭可有效吸附去除注射剂中热原，药液中吸附率大于70%。说明针剂在制造过程中加入活性炭吸附大量热原(细菌内毒素)科学合理的。但以上结果也表明，对于大剂量的细菌内毒素，活性炭不能完全吸附去除。因此在注射剂制造工艺中采用活性炭除热原，应对制造工艺的风险进行合理评估，以确保最终产品中热原符合标准，保证药品临床的安全应用。

(2)试验所采用规格的超滤膜可完全滤除热原。通过验证所采用超滤膜拦截水中的细菌内毒素可达到Log值大于4，在稀释1／100的供试品中内毒素实测含量为未检出，则其理论含量为<3Eu／ml，稀释1／1000和稀释l／1000的供试品中内毒素实测含量为未检出，故其理论含量也应为<3Eu／ml。采用超滤膜去除注射剂中的细菌内毒素均能达到log值大于3，可有效的保证最终产品中热原残留达到要求。

(3)内毒素的含量测定方法较多BI，我们采用方法是用细菌内毒素测定仪定量的方法，此法操作比较简单、经济、灵敏度较高、检测范围较大(0.006-300EU／ml)。动态浊度法反应时间法认为内毒素浓度和成胶时间为负相关，即内毒素浓度越高成胶时间就越短。

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