香樟精油的体外抑菌活性秦海燕

刘如沁　黄爱玲　索志荣

摘 要：采用抑菌圈实验和二倍稀释法研究了香樟精油对金黄色葡萄球菌的抑菌活性、最低抑菌浓度（MIC）。结果表明：香樟精油对金黄色葡萄球菌抑菌活性显著，当香樟精油的浓度大于12.5%时，可完全抑制金黄色葡萄球菌的生长。

关键词：香樟；精油；抑菌香樟（Cinamomum Camphora （Linn.）Presl）系樟树属的常绿乔木植物，其根、木材、枝和叶均可提取香樟精油，它们不仅是医药上樟脑、龙脑的主要原料，还具有净化有毒空气的能力及抗癌功效[1]。近年的许多研究发现，精油具有强烈的抑制或杀死真菌等微生物的特性[2，3]。当今在动植物病原菌对化学杀菌剂产生抗药性日渐加剧的形势下，精油因具有自然挥发的特性，可作为一种有待开发的新型杀菌物质进行研究[4]。本实验采用试管二倍稀释法联合琼脂平板法对香樟精油对金黄色葡萄球菌的抑菌效果进行了研究和探讨，以便为进一步开发治疗呼吸道疾病新的抗菌药物提供理论依据，也为开发香樟精油在天然消毒杀菌产品利用方面提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

供试菌种金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus ATCC26112），购于中国医学菌种保藏中心。香樟油由西南科技大学天然药物化学实验室提供。

1.2 实验方法

1.2.1 香樟精油稀释液的制备

香樟精油不溶于水，以丙酮作为稀释剂。精确量取5ml香樟精油，加入5ml丙酮，震荡摇匀，配置成50%的溶液，装入棕色瓶作为母液，二倍稀释法配制一系列浓度梯度的精油溶液。

1.2.2 菌悬液的制备

将供试菌种在斜面培养基上活化2代后，用接种环从斜面上轻刮菌苔一环，收集到内盛10mL无菌水的三角瓶中，配成终浓度为106CFU/mL的菌悬液，备用。

1.2.3 香樟油的抑菌活性测定

待培养皿中培养基凝固后，在无菌条件下，取0.2ml菌悬液涂布到培养皿上。将D=6mm的无菌滤纸片在香樟油中浸泡2小时，沥干，平铺在培养皿上，每平板铺2片。以丙酮作为空白对照，以1.0mg/ml氨苄青霉素作为阳性对照，于37℃恒温箱内培养24h后观察，并测定抑菌圈的直径。平行实验3次。抑菌圈试验判定标准：滤纸片直径为6mm时，抑菌圈直径大于20mm，极敏；15～20mm，高敏；10～15mm，中敏；7～9mm，低敏；小于7mm，不敏感[5]。

1.2.4 最小抑菌浓度（MIC）的测定[6]

将不同浓度梯度的香樟精油溶液各1mL加入融化的固体培养基中混合均匀，待培养基凝固后，即得含各浓度香樟油的供试样品的平板。在平板上画线接种菌液，37℃培养1d。观察菌体生长情况，生长菌体为阳性（+），不生长菌体为阴性（-），以不生长菌的试验样品的最低浓度为香樟油最低抑菌浓度（MIC），以丙酮作为阴性对照。重复2次。

2 结果与分析

香樟精油对金黄色葡萄球菌抑菌活性测定结果

表1 不同浓度香樟精油作用下金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径

表2 香樟精油对金黄色葡萄球菌最小抑菌浓度的测定

“+”表示培养基有菌落生长，“-”表示培养基未出现菌落。

从表1、2看出，不同浓度香樟精油对金黄色葡萄球菌抑菌活性不同。纯精油对金黄色葡萄球菌的抑菌圈最大，为13.1mm，在10～15mm之间，属中敏。精油抑菌圈的直径随体积分数的增大而增强。最小抑菌浓度MIC值是测定抗菌物质抗菌活性大小的指标。当浓度降到到12.5%时平板中没有检出菌落，6.25%时平板中检出少量菌落，当香樟精油的浓度大于12.5%时，可完全抑制金黄色葡萄球菌的生长，故其对金黄色葡萄球菌的MIC为12.5%。

3 结束语

该实验表明香樟精油对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径为13.1mm，金黄色葡萄球菌对香樟精油中度敏感。马英姿[7]、李爱民[8]等的实验结果也发现香樟精油对金黄色葡萄球菌有明显的抑菌效果。香樟油主要成分为樟脑、β-芳樟醇（24.09%）、桉油醇（15.72%）、α-松油醇（11.20%）、蛇床-6-烯-4-醇（5.724%）[9]，其中，芳樟醇具有抗细菌、抗真菌和抗病毒作用[10]，是樟树叶精油中的主要抗菌成分。香樟是我国亚热带绿阔叶林的主要树种之一，资源丰富，加快其抑菌活性及机理的研究有利于开发香樟油的开发和利用。

参考文献

[1]史娟.香樟叶中精油的提取[J].江苏调味副食品.2011，28（2）：16-19.

[2]杨致年，曾超，朱宗良，等.植物精油的抗菌性[J].四川林业科技，2000，21（3）：37-39.

[3]孙伟，肖家祁.中草药精油对细菌生长抑制的实验研究[J].上海中医药杂志，2005，39（10）：54-55.

[4]杨森艳，姚雷.柠檬草精油抗菌性研究[J]，上海交通大学学报，2005，23（4）：375-382.

[5]中华人民共和国卫生部医政司.全国临床检验操作规程3版[M].南京：东南大学出版社，1997.

[6]吴均，杨钦滟，赵晓娟，等.山苍子油的抑菌活性及机理研究[J]，食品工业科技，2013，34（17）：119-125.

[7]马英姿，谭琴，李恒熠，等.樟树叶及天竺桂叶的精油抑菌活性研究[J].中南林业科技大学学报，2009，29（1）：36-40.

[8]李爱民，唐永勤，卿玉波.樟油的提取及其抑菌性研究[J].福建林业科技，2006，33（4）：121-123.

[9]刘亚，李茂昌，张永聪，等.香樟树叶挥发油的化学成分研究[J].分析试验室，2008，27（1）：88-92.

[10]国家医药管理局中草药情报中心站.植物药有效成分手册[M].北京：人民卫生出版社，1986.

作者简介：秦海燕（1975-），女，硕士，讲师，主要从事药用植物活性研究。endprint

摘 要：采用抑菌圈实验和二倍稀释法研究了香樟精油对金黄色葡萄球菌的抑菌活性、最低抑菌浓度（MIC）。结果表明：香樟精油对金黄色葡萄球菌抑菌活性显著，当香樟精油的浓度大于12.5%时，可完全抑制金黄色葡萄球菌的生长。

关键词：香樟；精油；抑菌香樟（Cinamomum Camphora （Linn.）Presl）系樟树属的常绿乔木植物，其根、木材、枝和叶均可提取香樟精油，它们不仅是医药上樟脑、龙脑的主要原料，还具有净化有毒空气的能力及抗癌功效[1]。近年的许多研究发现，精油具有强烈的抑制或杀死真菌等微生物的特性[2，3]。当今在动植物病原菌对化学杀菌剂产生抗药性日渐加剧的形势下，精油因具有自然挥发的特性，可作为一种有待开发的新型杀菌物质进行研究[4]。本实验采用试管二倍稀释法联合琼脂平板法对香樟精油对金黄色葡萄球菌的抑菌效果进行了研究和探讨，以便为进一步开发治疗呼吸道疾病新的抗菌药物提供理论依据，也为开发香樟精油在天然消毒杀菌产品利用方面提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

供试菌种金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus ATCC26112），购于中国医学菌种保藏中心。香樟油由西南科技大学天然药物化学实验室提供。

1.2 实验方法

1.2.1 香樟精油稀释液的制备

香樟精油不溶于水，以丙酮作为稀释剂。精确量取5ml香樟精油，加入5ml丙酮，震荡摇匀，配置成50%的溶液，装入棕色瓶作为母液，二倍稀释法配制一系列浓度梯度的精油溶液。

1.2.2 菌悬液的制备

将供试菌种在斜面培养基上活化2代后，用接种环从斜面上轻刮菌苔一环，收集到内盛10mL无菌水的三角瓶中，配成终浓度为106CFU/mL的菌悬液，备用。

1.2.3 香樟油的抑菌活性测定

待培养皿中培养基凝固后，在无菌条件下，取0.2ml菌悬液涂布到培养皿上。将D=6mm的无菌滤纸片在香樟油中浸泡2小时，沥干，平铺在培养皿上，每平板铺2片。以丙酮作为空白对照，以1.0mg/ml氨苄青霉素作为阳性对照，于37℃恒温箱内培养24h后观察，并测定抑菌圈的直径。平行实验3次。抑菌圈试验判定标准：滤纸片直径为6mm时，抑菌圈直径大于20mm，极敏；15～20mm，高敏；10～15mm，中敏；7～9mm，低敏；小于7mm，不敏感[5]。

1.2.4 最小抑菌浓度（MIC）的测定[6]

将不同浓度梯度的香樟精油溶液各1mL加入融化的固体培养基中混合均匀，待培养基凝固后，即得含各浓度香樟油的供试样品的平板。在平板上画线接种菌液，37℃培养1d。观察菌体生长情况，生长菌体为阳性（+），不生长菌体为阴性（-），以不生长菌的试验样品的最低浓度为香樟油最低抑菌浓度（MIC），以丙酮作为阴性对照。重复2次。

2 结果与分析

香樟精油对金黄色葡萄球菌抑菌活性测定结果

表1 不同浓度香樟精油作用下金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径

表2 香樟精油对金黄色葡萄球菌最小抑菌浓度的测定

“+”表示培养基有菌落生长，“-”表示培养基未出现菌落。

从表1、2看出，不同浓度香樟精油对金黄色葡萄球菌抑菌活性不同。纯精油对金黄色葡萄球菌的抑菌圈最大，为13.1mm，在10～15mm之间，属中敏。精油抑菌圈的直径随体积分数的增大而增强。最小抑菌浓度MIC值是测定抗菌物质抗菌活性大小的指标。当浓度降到到12.5%时平板中没有检出菌落，6.25%时平板中检出少量菌落，当香樟精油的浓度大于12.5%时，可完全抑制金黄色葡萄球菌的生长，故其对金黄色葡萄球菌的MIC为12.5%。

3 结束语

该实验表明香樟精油对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径为13.1mm，金黄色葡萄球菌对香樟精油中度敏感。马英姿[7]、李爱民[8]等的实验结果也发现香樟精油对金黄色葡萄球菌有明显的抑菌效果。香樟油主要成分为樟脑、β-芳樟醇（24.09%）、桉油醇（15.72%）、α-松油醇（11.20%）、蛇床-6-烯-4-醇（5.724%）[9]，其中，芳樟醇具有抗细菌、抗真菌和抗病毒作用[10]，是樟树叶精油中的主要抗菌成分。香樟是我国亚热带绿阔叶林的主要树种之一，资源丰富，加快其抑菌活性及机理的研究有利于开发香樟油的开发和利用。

参考文献

[1]史娟.香樟叶中精油的提取[J].江苏调味副食品.2011，28（2）：16-19.

[2]杨致年，曾超，朱宗良，等.植物精油的抗菌性[J].四川林业科技，2000，21（3）：37-39.

[3]孙伟，肖家祁.中草药精油对细菌生长抑制的实验研究[J].上海中医药杂志，2005，39（10）：54-55.

[4]杨森艳，姚雷.柠檬草精油抗菌性研究[J]，上海交通大学学报，2005，23（4）：375-382.

[5]中华人民共和国卫生部医政司.全国临床检验操作规程3版[M].南京：东南大学出版社，1997.

[6]吴均，杨钦滟，赵晓娟，等.山苍子油的抑菌活性及机理研究[J]，食品工业科技，2013，34（17）：119-125.

[7]马英姿，谭琴，李恒熠，等.樟树叶及天竺桂叶的精油抑菌活性研究[J].中南林业科技大学学报，2009，29（1）：36-40.

[8]李爱民，唐永勤，卿玉波.樟油的提取及其抑菌性研究[J].福建林业科技，2006，33（4）：121-123.

[9]刘亚，李茂昌，张永聪，等.香樟树叶挥发油的化学成分研究[J].分析试验室，2008，27（1）：88-92.

[10]国家医药管理局中草药情报中心站.植物药有效成分手册[M].北京：人民卫生出版社，1986.

作者简介：秦海燕（1975-），女，硕士，讲师，主要从事药用植物活性研究。endprint

摘 要：采用抑菌圈实验和二倍稀释法研究了香樟精油对金黄色葡萄球菌的抑菌活性、最低抑菌浓度（MIC）。结果表明：香樟精油对金黄色葡萄球菌抑菌活性显著，当香樟精油的浓度大于12.5%时，可完全抑制金黄色葡萄球菌的生长。

关键词：香樟；精油；抑菌香樟（Cinamomum Camphora （Linn.）Presl）系樟树属的常绿乔木植物，其根、木材、枝和叶均可提取香樟精油，它们不仅是医药上樟脑、龙脑的主要原料，还具有净化有毒空气的能力及抗癌功效[1]。近年的许多研究发现，精油具有强烈的抑制或杀死真菌等微生物的特性[2，3]。当今在动植物病原菌对化学杀菌剂产生抗药性日渐加剧的形势下，精油因具有自然挥发的特性，可作为一种有待开发的新型杀菌物质进行研究[4]。本实验采用试管二倍稀释法联合琼脂平板法对香樟精油对金黄色葡萄球菌的抑菌效果进行了研究和探讨，以便为进一步开发治疗呼吸道疾病新的抗菌药物提供理论依据，也为开发香樟精油在天然消毒杀菌产品利用方面提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

供试菌种金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus ATCC26112），购于中国医学菌种保藏中心。香樟油由西南科技大学天然药物化学实验室提供。

1.2 实验方法

1.2.1 香樟精油稀释液的制备

香樟精油不溶于水，以丙酮作为稀释剂。精确量取5ml香樟精油，加入5ml丙酮，震荡摇匀，配置成50%的溶液，装入棕色瓶作为母液，二倍稀释法配制一系列浓度梯度的精油溶液。

1.2.2 菌悬液的制备

将供试菌种在斜面培养基上活化2代后，用接种环从斜面上轻刮菌苔一环，收集到内盛10mL无菌水的三角瓶中，配成终浓度为106CFU/mL的菌悬液，备用。

1.2.3 香樟油的抑菌活性测定

待培养皿中培养基凝固后，在无菌条件下，取0.2ml菌悬液涂布到培养皿上。将D=6mm的无菌滤纸片在香樟油中浸泡2小时，沥干，平铺在培养皿上，每平板铺2片。以丙酮作为空白对照，以1.0mg/ml氨苄青霉素作为阳性对照，于37℃恒温箱内培养24h后观察，并测定抑菌圈的直径。平行实验3次。抑菌圈试验判定标准：滤纸片直径为6mm时，抑菌圈直径大于20mm，极敏；15～20mm，高敏；10～15mm，中敏；7～9mm，低敏；小于7mm，不敏感[5]。

1.2.4 最小抑菌浓度（MIC）的测定[6]

将不同浓度梯度的香樟精油溶液各1mL加入融化的固体培养基中混合均匀，待培养基凝固后，即得含各浓度香樟油的供试样品的平板。在平板上画线接种菌液，37℃培养1d。观察菌体生长情况，生长菌体为阳性（+），不生长菌体为阴性（-），以不生长菌的试验样品的最低浓度为香樟油最低抑菌浓度（MIC），以丙酮作为阴性对照。重复2次。

2 结果与分析

香樟精油对金黄色葡萄球菌抑菌活性测定结果

表1 不同浓度香樟精油作用下金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径

表2 香樟精油对金黄色葡萄球菌最小抑菌浓度的测定

“+”表示培养基有菌落生长，“-”表示培养基未出现菌落。

从表1、2看出，不同浓度香樟精油对金黄色葡萄球菌抑菌活性不同。纯精油对金黄色葡萄球菌的抑菌圈最大，为13.1mm，在10～15mm之间，属中敏。精油抑菌圈的直径随体积分数的增大而增强。最小抑菌浓度MIC值是测定抗菌物质抗菌活性大小的指标。当浓度降到到12.5%时平板中没有检出菌落，6.25%时平板中检出少量菌落，当香樟精油的浓度大于12.5%时，可完全抑制金黄色葡萄球菌的生长，故其对金黄色葡萄球菌的MIC为12.5%。

3 结束语

该实验表明香樟精油对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径为13.1mm，金黄色葡萄球菌对香樟精油中度敏感。马英姿[7]、李爱民[8]等的实验结果也发现香樟精油对金黄色葡萄球菌有明显的抑菌效果。香樟油主要成分为樟脑、β-芳樟醇（24.09%）、桉油醇（15.72%）、α-松油醇（11.20%）、蛇床-6-烯-4-醇（5.724%）[9]，其中，芳樟醇具有抗细菌、抗真菌和抗病毒作用[10]，是樟树叶精油中的主要抗菌成分。香樟是我国亚热带绿阔叶林的主要树种之一，资源丰富，加快其抑菌活性及机理的研究有利于开发香樟油的开发和利用。

参考文献

[1]史娟.香樟叶中精油的提取[J].江苏调味副食品.2011，28（2）：16-19.

[2]杨致年，曾超，朱宗良，等.植物精油的抗菌性[J].四川林业科技，2000，21（3）：37-39.

[3]孙伟，肖家祁.中草药精油对细菌生长抑制的实验研究[J].上海中医药杂志，2005，39（10）：54-55.

[4]杨森艳，姚雷.柠檬草精油抗菌性研究[J]，上海交通大学学报，2005，23（4）：375-382.

[5]中华人民共和国卫生部医政司.全国临床检验操作规程3版[M].南京：东南大学出版社，1997.

[6]吴均，杨钦滟，赵晓娟，等.山苍子油的抑菌活性及机理研究[J]，食品工业科技，2013，34（17）：119-125.

[7]马英姿，谭琴，李恒熠，等.樟树叶及天竺桂叶的精油抑菌活性研究[J].中南林业科技大学学报，2009，29（1）：36-40.

[8]李爱民，唐永勤，卿玉波.樟油的提取及其抑菌性研究[J].福建林业科技，2006，33（4）：121-123.

[9]刘亚，李茂昌，张永聪，等.香樟树叶挥发油的化学成分研究[J].分析试验室，2008，27（1）：88-92.

[10]国家医药管理局中草药情报中心站.植物药有效成分手册[M].北京：人民卫生出版社，1986.

作者简介：秦海燕（1975-），女，硕士，讲师，主要从事药用植物活性研究。endprint