HER—2及VEGF在贲门癌组织中的表达及相关因素分析

田瀚吉　王春利　张双平

【摘要】目的：观察HER-2及VEGF在贲门癌组织中的表达及其相关病理学因素。方法：选取我院2012年1月～2013年6月收治的所有贲门癌患者中随机抽样77例，在SP检测法，也就是免疫组织化学检测法对患者的贲门癌组织、癌旁组织及正常组织中的HER-2及VEGF的结果进行相应的表达。结果：①经对比发现，癌旁组织中的中HER-2及VEGF的阳性表达率明显低于贲门癌组织，说明贲门癌的发病原因和HER-2及VEGF的作用有一定的关系。②贲门癌中，肿瘤的生长位置、Lauren分型和分化的程度都会影响HER-2的阳性表达，而贲门癌的组织浸润深度、TNM分期、淋巴结的转移和静脉侵犯则会对VEGF表达产生影响。结论：HER-2及VEGF高表达参于贲门癌的生长、转移及侵袭过程。

【关键词】HER-2血管内皮生长因子（VEGF）；贲门癌

贲门属于胃的一部分，其上界为EGJ即胃的入口，但其下界难于确定。贲门癌当属于胃癌，以食管胃解剖学交界（EGJ）为分界线，位于其下5cm范围内者为贲门癌，按胃癌TNM分期。贲门癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，严重危害着我国人民的身体健康。该肿瘤转移快，五年生存率低，已引起学者们的广泛关注。HER-2蛋白是一种酪氨酸激酶受体，是表皮生长因子受体（EGFRs）的家族成员；而VEGF又叫做血管内皮生长因子，是一种分裂原，通常会在内皮细胞特异性的作用下发生，也是一种诱导因子，能够促进体内血管的生成。国外的学者对HER-2及VEGF在贲门癌组织中的表达进行了多方面的研究[1-2]，对HER-2及VEGF出现异常表达的原因进行了分析，最后的研究结果证明了，多种肿物的入侵和转移，例如肺癌、胃肠癌、乳腺癌中的癌细胞的转移程度都会影响到多种肿物的正常表达。本次研究主要采用了免疫组化法，对贲门癌中HER-2蛋白及VEGF的表达水平进行了详细的分析，并对HER-2蛋白及VEGF表达在治疗贲门癌中的病理学意义进行了深入探讨。

资料与方法

一般资料：选取2012年1月～2013年6月山西省肿瘤医院的77例贲门癌患者作为石蜡包埋标本，77例患者均符合贲门癌的疾病诊断标准，对肿瘤部位并进行了手术切除处理，其中男性69例，女性8例，年龄41～78岁，平均年龄48.6±1.7岁。按2009年第7版胃癌TNM分期标准，对77例患者进行分期，均为初治患者。

试剂抗体分别为HER2（（ZM-0065）、VEGF（ZM-0265）。即用型SP免疫组化检测试剂盒及浓缩型二氨基联苯胺（DAB）显色试剂盒。

方法：先对患者进行甲醛固定，然后进行石蜡包埋处理，最后经过HE染色组织学的原理来对患者的肿瘤组织进行确定，这就是贲门癌确诊的方法。链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结（SP）法染色步骤，可以根据相关的产品说明进行操作，在使用OlympusDp70图像采集分析仪的基础上收集镜下图像的数据，并对数据进行相应的分析。

诊断标准：对病变细胞的相关位置进行免疫组织化学检测法进行检验，如果细胞出现黄黄棕色现象，则表明该反应为阳性。因为HER-2阳性表达的主要表现就是细胞膜中会出现棕黄色的沉淀物，且沉淀物的呈现出颗粒状形态。对于VEGF的阳性表达来说，它的主要特征就是在细胞浆内也可以显示出棕黄色的颗粒状物质。另外，本研究按照阳性细胞的数量对染色的等级进行了划分，即阳性细胞的数量超过一半时程度最重，用（+++）进行标示，阳性细胞的数量超过10%，低于50%时，则程度稍轻，用（++）进行表示；阳性细胞额数量小于10%时，则程度更轻，可以用（+）进行标示，阳性细胞数量为零，则可以用（-）进行表示。

统计学意义：采用SPSS 13.0统计软件包进行统计分析。计数资料采用两个（或多个）样本率比较的检验，其中不满足检验条件时，采用fisher确切概率法，计数资料的相关性则采用spearman进行分析，当P<0.5时就表示差异具有统计学意义。

结果

贲门癌组织中HER-2、VEGF的表达水平：受检患者贲门癌组织中HER-2及VEGF的表达水平均为阳性，结果分别为41/77（53.2%），45/77（58.4%）。

HER2、VEGF阳性表达与贲门癌临床病理的关系：贲门癌中，肿瘤的生长位置、Lauren分型和分化的程度都会影响HER-2的阳性表达（P<0.05）；贲门癌的组织浸润深度、TNM分期、淋巴结的转移和静脉侵犯则会对VEGF表达产生影响（P<0.05），见表1。

讨论

Houldsworth证实贲门癌中有扩增的DNA序列为HER-2/neu[3]，也即C-erbB-2基因。Slaman等曾报道C-erbB-2基因扩增及过度表达与肿瘤的发生、发展及预后有关[4]。HER-2是具有酪氨酸蛋白激酶活性的受体，其单体并无活性，必须形成二聚体才能产生活化信号。当该蛋白处于激活状态下时，就表明它受到了某些致癌物质的影响，使得肿瘤能够进行活性转移，这就意味着细胞发生了恶性转化[5]。因为在正常的状态下，该蛋白是以一种非激活的状态存在的。当HER-2被机会之后，可通过参与激活Ras/Raf/Mek/ERK/MAPK、P13K/PDK1/Akt（PKB）、PLC7、JAK/STAT等细胞信号通路[6]，从而介导细胞分化、生存、迁移、侵袭、黏附、损伤修复等重要功能。另有相关研究发现[7-8]，EGFR高表达于肿瘤的发生、增殖和转移。不管是从结构上来说，还是从功能上来说，HER-2与EGFR都有很多相似的地方。如果将这二者的表达结合起来，就能对贲门癌的转移起到一定的协作影响。以前的很多研究都证明了，HER-2的表达值越高，那么和恶性肿瘤的联系性就越强。美国的一个科学家Rastelli F发现，HER-2的基因扩张和过度表达的现象最早都是在乳腺癌的检测中被发现的，并且具有10%～34%的发生概率。大多数情况下，如果HER-2在贲门癌组织中的表达过高，就表示为肿瘤的预后效果不是很理想，内分泌治疗和化学治疗的效果并不明显[9]。在一些比较常见的癌症中，例如结肠癌、宫颈癌、乳腺癌等恶性肿瘤中，HER-2的基因扩张现象都非常明显，而且表达值都很高。所以说，血管的生成是肿瘤细胞增殖和转换的前提条件。

研究证明作用最强的促血管生成因子就是VEGF，它是一种同源二聚体的糖蛋白，它的相对分子质量为（35～42）×103。VEGF主要有四个方面的作用。第一，促进血管生成。第二，有助于内皮细胞的增生和转移。第三，增加血管的渗透性，尤其是微小血管的渗透性。因为血管渗透能力的提高能够让血浆中的大分子物质渗透出来，从而在血管的外基质进行沉积，能够促进肿瘤细胞的生长，并能建立新的毛细血管网。第四，能够增强部分蛋白水解酶的分解作用，实现对基质的降解作用。通过这些作用，能够实现肿瘤血管的再生和转移，而且新的血管反过来也可以促进肿瘤细胞的生长，就会导致体内VEGF的数量增加。

本实验发现，HER-2在贲门癌组织中的阳性表达率为41/77（53.2%）。HER-2高表达于肿瘤的发生、发展及转移过程，是贲门癌预后的一项重要的评价标准。目前，HER-2的高表达对乳腺癌患者的治疗已获得巨大成果，主要的方法就是HER-2蛋白靶向抗体曲妥珠单抗，但在贲门癌的临床应用并不多。由此推断，有望应用HER-2的高表达水平中靶向药物的治疗来抑制HER-2的过度表达从而限制贲门癌的侵袭和转移，随着我们对HER-2基因机制中的转录激活进行深入的了解，那么对肿瘤进行靶向治疗的方法一定具有非常广阔的发展前景。

研究发现贲门癌组织中VEGF阳性表达率为45/77（58.4%），细胞的分化程度和阳性的表达呈反比例关系，即细胞分化的程度越高，那么阳性率就越低。同时，细胞的分化程度还和肿瘤细胞的生长和转移呈正比例关系，即细胞分化的程度越高，那么肿瘤细胞的生长和转移你速度就越快。VEGF的受体的表达程度高低与肿瘤的恶性程度及发展速度呈正相关。当人体处于正常状态时，VEGF的表现水平就会很低，而当人体内出现恶性肿瘤，也就是我们常说的癌症时，VEGF的表现则会提高[10]。这说明，与其它的恶性肿瘤一样，VEGF在贲门癌的生长、转移和侵袭等发展中具有重要作用，这与文献报道一致[11-12]。

在进行贲门癌预后效果的判断时可以将HER-2及VEGF的表达水平最为主要的依据，实现对高危转移患者的筛选。除此之外，将HER-2及VEGF的表达进行联合分析，还可为贲门癌的分子靶向药物的选择提供理论科学的证据。二者的联合检测在贲门癌恶性程度及评估预后将有待研究。

参考文献

[1]肖炜明，施瑞华，丁岩冰，等.胃癌组织中EGFR和COX-2表达的意义及其相关性[J].世界华人消化杂志，2007，15（2）：123.

[2]Rocha-Lima CM，Soares HP，Raez HP，Raez LE，et al.EGFR targeting of solid tumors[J].Cancer Control，2007，14：295.

[3]Houldsworth J，Cordon CC，LadanyiM et al.Gene amplification in gastric and esophageal adenocarcinoma[J].Cancer Res，1990，50（19）：6417-6422.

[4]Slaman DJ，Clark GM，Wong SG et al.Human breast cancer：correlation of relapse and survival with amplification of the HER2/neu oncogene[J].Science，1987，235：177-182.

[5]罗荣城，韩焕兴.肿瘤生物治疗学[M].北京：人民卫生出版社，2006：857-859.

[6]Ciardiello F，Tortora G.EGFR antagonists in cancer treat-ment[J].N Engl J Med，2008，358（11）：1160.

[7]付建华，赵曼，胡国强，等.EGFR和E cadherin与肿瘤的发生发展及其调控机制的研究进展[J].实用癌症杂志，2008，23（1）：107.

[8]Molinari F，Martin V，Saletti P，et a1.Differing deregulation of EGFR and downstream proteins in primary colorectal cancer and related metastatic sites may be clinically relevant[J].BrJ Cancer，2009，100（7）：1087.

[9]Bu W，Tang ZY，Sun FX，et a1.Effeets of matrix metalloproteinase inhibitor BB-94 on liver cancer growth and metastasis in a patient-like orthotopic model LCI-D20[J].Hepatogastroenterology：1998，45（22）：1056-1061.

[10]李容，杨纯正，能冬生，等.血管内皮生长因子与肿瘤治疗[J].国外医学生理病例科学与临床分册，2002，22（5）：475-477.

[11]Takahashi Y，Kitadai Y，Bucana CD，et al.Expression of vascular endothelial growth factor and its receptor，KDR，correlates with vascularity，metastasis，and proliferation of human colon cancer[J].Cancer Res，1995，55（18）：3964-3968.

[12]Kang SM，Maeda K，Onoda N，et al.Combined analysis of p53 and vascular endothelial growth factor expression in colorectal carcinoma for determination of tumor vascularity and liver metastasis[J].Int J Cancer，1997，74（5）：502-507.

研究证明作用最强的促血管生成因子就是VEGF，它是一种同源二聚体的糖蛋白，它的相对分子质量为（35～42）×103。VEGF主要有四个方面的作用。第一，促进血管生成。第二，有助于内皮细胞的增生和转移。第三，增加血管的渗透性，尤其是微小血管的渗透性。因为血管渗透能力的提高能够让血浆中的大分子物质渗透出来，从而在血管的外基质进行沉积，能够促进肿瘤细胞的生长，并能建立新的毛细血管网。第四，能够增强部分蛋白水解酶的分解作用，实现对基质的降解作用。通过这些作用，能够实现肿瘤血管的再生和转移，而且新的血管反过来也可以促进肿瘤细胞的生长，就会导致体内VEGF的数量增加。

本实验发现，HER-2在贲门癌组织中的阳性表达率为41/77（53.2%）。HER-2高表达于肿瘤的发生、发展及转移过程，是贲门癌预后的一项重要的评价标准。目前，HER-2的高表达对乳腺癌患者的治疗已获得巨大成果，主要的方法就是HER-2蛋白靶向抗体曲妥珠单抗，但在贲门癌的临床应用并不多。由此推断，有望应用HER-2的高表达水平中靶向药物的治疗来抑制HER-2的过度表达从而限制贲门癌的侵袭和转移，随着我们对HER-2基因机制中的转录激活进行深入的了解，那么对肿瘤进行靶向治疗的方法一定具有非常广阔的发展前景。

研究发现贲门癌组织中VEGF阳性表达率为45/77（58.4%），细胞的分化程度和阳性的表达呈反比例关系，即细胞分化的程度越高，那么阳性率就越低。同时，细胞的分化程度还和肿瘤细胞的生长和转移呈正比例关系，即细胞分化的程度越高，那么肿瘤细胞的生长和转移你速度就越快。VEGF的受体的表达程度高低与肿瘤的恶性程度及发展速度呈正相关。当人体处于正常状态时，VEGF的表现水平就会很低，而当人体内出现恶性肿瘤，也就是我们常说的癌症时，VEGF的表现则会提高[10]。这说明，与其它的恶性肿瘤一样，VEGF在贲门癌的生长、转移和侵袭等发展中具有重要作用，这与文献报道一致[11-12]。

在进行贲门癌预后效果的判断时可以将HER-2及VEGF的表达水平最为主要的依据，实现对高危转移患者的筛选。除此之外，将HER-2及VEGF的表达进行联合分析，还可为贲门癌的分子靶向药物的选择提供理论科学的证据。二者的联合检测在贲门癌恶性程度及评估预后将有待研究。

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研究证明作用最强的促血管生成因子就是VEGF，它是一种同源二聚体的糖蛋白，它的相对分子质量为（35～42）×103。VEGF主要有四个方面的作用。第一，促进血管生成。第二，有助于内皮细胞的增生和转移。第三，增加血管的渗透性，尤其是微小血管的渗透性。因为血管渗透能力的提高能够让血浆中的大分子物质渗透出来，从而在血管的外基质进行沉积，能够促进肿瘤细胞的生长，并能建立新的毛细血管网。第四，能够增强部分蛋白水解酶的分解作用，实现对基质的降解作用。通过这些作用，能够实现肿瘤血管的再生和转移，而且新的血管反过来也可以促进肿瘤细胞的生长，就会导致体内VEGF的数量增加。

本实验发现，HER-2在贲门癌组织中的阳性表达率为41/77（53.2%）。HER-2高表达于肿瘤的发生、发展及转移过程，是贲门癌预后的一项重要的评价标准。目前，HER-2的高表达对乳腺癌患者的治疗已获得巨大成果，主要的方法就是HER-2蛋白靶向抗体曲妥珠单抗，但在贲门癌的临床应用并不多。由此推断，有望应用HER-2的高表达水平中靶向药物的治疗来抑制HER-2的过度表达从而限制贲门癌的侵袭和转移，随着我们对HER-2基因机制中的转录激活进行深入的了解，那么对肿瘤进行靶向治疗的方法一定具有非常广阔的发展前景。

研究发现贲门癌组织中VEGF阳性表达率为45/77（58.4%），细胞的分化程度和阳性的表达呈反比例关系，即细胞分化的程度越高，那么阳性率就越低。同时，细胞的分化程度还和肿瘤细胞的生长和转移呈正比例关系，即细胞分化的程度越高，那么肿瘤细胞的生长和转移你速度就越快。VEGF的受体的表达程度高低与肿瘤的恶性程度及发展速度呈正相关。当人体处于正常状态时，VEGF的表现水平就会很低，而当人体内出现恶性肿瘤，也就是我们常说的癌症时，VEGF的表现则会提高[10]。这说明，与其它的恶性肿瘤一样，VEGF在贲门癌的生长、转移和侵袭等发展中具有重要作用，这与文献报道一致[11-12]。

在进行贲门癌预后效果的判断时可以将HER-2及VEGF的表达水平最为主要的依据，实现对高危转移患者的筛选。除此之外，将HER-2及VEGF的表达进行联合分析，还可为贲门癌的分子靶向药物的选择提供理论科学的证据。二者的联合检测在贲门癌恶性程度及评估预后将有待研究。

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