四种助阳中药对肉鸡新城疫苗免疫效果的影响

黄庆洲，李 科，张志强

（1.西南大学荣昌校区动物医学系，重庆荣昌402460；2.四川省富顺县畜牧局，四川富顺643200）

目前，许多养鸡场因疫苗免疫失败导致传染性疾病发生，是危害我国养鸡业发展的重要原因之一，疫苗免疫失败的原因与疫苗抗原性差、保护率低、或受某些免疫抑制因素的影响、或与机体自身的免疫功能较低等因素密切相关[1、2]。探讨能促进机体免疫机能、提高疫苗免疫保护率的免疫增强剂供生产使用，具有重要的实践意义。近年来中草药免疫增强剂的研究受到广泛关注，特别是补肾壮阳类中药对动物免疫机能的影响研究报道较多。研究发现，淫羊藿、巴戟天、肉苁蓉、菟丝子、补骨脂等能明显影响鼠和人的机体免疫功能，对巨噬细胞，T、B淋巴细胞的活性及多种重要的免疫因子具有显著的调节作用[3～5]，但比较研究单味助阳中药对肉鸡免疫机能及疫苗免疫效果的影响未见报道。本试验以大发肉鸡为试验动物，比较观察了四种助阳中药淫羊藿、肉苁蓉、巴戟天、菟丝子对鸡免疫新城疫疫苗后，血清抗体效价及部分免疫器官发育的影响，现将试验结果报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验用中药:肉苁蓉、巴戟天、菟丝子、淫羊藿（购自荣昌县石家药行），分别4O目粉碎，50℃烘干备用。

1.1.2 鸡新城疫标准阳性血清：哈尔滨兽医研究所生产（20121211）。

1.1.3 主要仪器：电子天平、低温离心机、恒温培养箱、冰箱、96孔V型板、微量移液器。

1.1.4试验用新城疫疫苗：ND-LasotaVI系弱毒冻干苗 (黑龙江生物制品一厂生产，批号：20121109)。

1.1.5 试验动物：1日龄大发肉鸡180只，雄性（由四川省内江种禽场提供）。

1.2 方法

1.2.1 动物分组、饲养及给药方法：1日龄大发肉鸡180只，随机分为5组，每组36只，分别为肉苁蓉组、巴戟天组、菟丝子组、淫羊藿组、对照组。各组隔离常规饲养，自由采食和饮水，从5日龄开始，I～IV组饲料中分别添加2%的肉苁蓉、巴戟天、菟丝子、淫羊藿中药粉。整个试验期为81天，0～30日龄饲喂市售普通内江正大小鸡饲料，31～81日龄饲喂内江正大肉中鸡饲料，饲料主要成分：粗蛋白≥21.0%，粗纤维≤5.0%，粗灰分≤7.0%，钙0.80%～1.30%，总磷≥0.60%，食盐0.30%～0.80%，水分≤13.0%，蛋氨酸≥0.46%。

1.2.2新城疫苗免疫程序及方法:在3日龄和8日龄分别免疫ND-Lasota弱毒冻干苗，接种方法为点眼滴鼻，各组免疫剂量相同。

1.2.3 观察指标及样品收集：在肉鸡饲喂至6、21、36、51、66、81日龄时每组随机取6只鸡，翅静脉采血液2ml/只，4℃冰箱内自然凝固，收集血清备测；在6、21、51、81日龄时，上午8～10点之间，每组随机取6只鸡称重，颈动脉放血处死后剖检，收集法氏囊及脾脏称重，计算各组法氏囊及脾脏指数(mg/g)=器官重/体重。

1.2.4 鸡新城疫血清HI效价测定：采用微量HI试验方法进行[6]，鸡新城疫4单位抗原、1%公鸡红细胞悬液实验室自行制备。结果以-Log2的几何均值表示鸡新城疫血清HI效价。

1.2.5 数据处理：应用SPSS11软件对不同日龄组间法氏囊、脾脏指数及HI效价进行显著性t检验，比较组间差异性。

2 试验结果

2.1 四种中药对大发肉鸡血清ND抗体效价的影响

6日龄时各组间血清ND-HI抗体效价基本一致，组间无显著差异；21日龄时HI效价达到高峰，且各试验组均显著高于对照组（P＜0.05）；21至81日龄阶段各组HI效价呈下降趋势，但肉苁蓉；巴戟天组降低的速度较对照组慢，特别是肉苁蓉组；66日龄时仍显著或极显著高于其它各组（P＜0.05或0.01）；36至81日龄阶段，巴戟天组、淫羊藿组、菟丝子组与对照组间差异不显著

表1 不同日龄肉鸡血清中ND-HI 抗体效价变化（-log2，X±SD，N=6）

（P＞0.05）。结果见表1。

2.2 四种中药对大发肉鸡法氏囊、脾脏指数的影响法氏囊指数在6、21、51日龄阶段时各组间无显著差异（P＞0.05）；81日龄时，肉苁蓉组和菟丝子组法氏囊指数显著高于对照组(P<0.05)，巴戟天组、淫羊藿组、对照组间无显著差异（P＞0.05）。脾指数在6、51日龄时各组间无显著差异（P＞0.05）；21日龄时，肉苁蓉组、巴戟天组显著高于对照组(P<0.05)，菟丝子组和淫羊藿组有增高趋势，但与对照组间无显著差异（P＞0.05）；81日龄时，肉苁蓉、菟丝子组脾指数显著高于巴戟天组及对照组(P<0.05)。结果见表2、表3。

3 讨论与分析

3.1 实验发现，四种中药对肉鸡免疫新城疫苗后血清中和抗体效价的影响，主要表现在两方面，一是可提高抗体水平，二是可延长血清抗体高水平维持时间，但四种中药间存在着一定的差异，以肉苁蓉的作用效果最强，巴戟天次之，菟丝子与淫羊藿的这一作用仅表现在21日龄以前。四种壮阳中药对机体免疫功能的影响可能主要与其多糖活性成分相关，研究发现，肉苁蓉多糖可提高T、B淋巴细胞增殖率，活化NK细胞，提高T细胞亚群CD3＋、CD4+、CD8+的含量[7、8]，能促进正常小鼠抗体分泌细胞（PFC）的合成，增强小鼠的体液免疫功能[9、10]；巴戟天多糖对T、B淋巴细胞的转化增殖有促进作用，并能提高小鼠刀豆蛋白诱导的脾细胞分泌IL-2和INF的活性[11]，菟丝子多糖能使小鼠脾细胞增殖反应增强、抗体形成细胞数目明显增加[12]；淫羊藿多糖对小鼠脾细胞有较强的有丝分裂原样作用，能明显促进脾细胞的增殖，增加小鼠脾脏抗体生成细胞(PEC)数[13]。

表2 不同日龄肉鸡法氏囊指数（X±SD，N=6）

3.2 动物免疫器官重量的增加是由于其自身细胞生长发育和分裂增殖所致，因此以免疫器官重量为参照值的免疫器官指数在一定程度上能表明机体免疫机能状况[14]。本试验结果显示，四种中药对肉鸡脾脏和法氏囊指数的影响主要表现在51-81日龄阶段，但不同药物的作用效果不同，对法氏囊指数的影响以肉苁蓉和菟丝子的效果较好，对脾脏指数的影响以肉苁蓉、菟丝子效果显著，淫羊藿次之，巴戟天有一定的效果但不显著。试验结果与戴远威等[15]、丁雁[16]等报道基本吻合。从免疫器官发育上说明四种中药对肉鸡免疫机能具有促进作用，且以肉苁蓉的效果最为明显。

表3 不同日龄肉鸡脾脏指数（X±SD，N=6）

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