鹿角胶对环磷酰胺所致血虚模型小鼠的影响

李 晶，李 娜，律广富，杨 擎，越 皓，曲晓波*

(1.长春中医药大学 吉林省人参科学研究院，长春 130117；2.长春中医药大学研发中心 中药药理实验室，长春 130117)

鹿角胶为鹿科动物马鹿(CervuselaphusLinnaeus)或梅花鹿(CervusnipponTemminck)的已骨化的角或锯茸后翌年春季脱落的角基，经水煎煮、浓缩而成的固体胶[1]，始载于《神农本草经》。温补肝肾，益精养血。古代主要用于虚劳、阳痿遗精、胎动不安、五劳七伤、面黄肌瘦等证[2]。现代医学表明，鹿角胶能够增加白细胞，促进骨髓恢复，提升化疗耐受力作用[3]， 并且具有保护胃黏膜、抗骨质疏松症、提高免疫力等功能[4-5]，并且对成骨细胞具有保护作用[6]。本研究采用环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)致小鼠血虚模型，从抗炎和活血角度探讨鹿角胶的传统应用，赋予其传统功效的现代科学理论，为进一步研究奠定基础。

1 实验材料

雄性balb/c小鼠，体质量(20±2) g，清洁级，购自长春生物制品研究所有限公司，合格证编号：SCXK-(吉)2011-0003。玉屏风胶囊(江苏吉贝尔药业有限公司，国药准字z10980026，批号130809)，鹿角胶(黑龙江神树阿胶有限公司，国药准字z23020051)，注射用CTX(山西普德药业有限股份公司，国药准字H14023686，规格0.2 g/每支)，PT试剂盒(上海太阳生物技术有限公司，批号1001133)，APTT试剂盒(上海太阳生物技术有限公司,批号1011043)。JA2003B电子天平(上海越平科学仪器有限公司)，Mindray BC-5300全自动细胞血液分析仪(深圳迈瑞仪器有限公司),Coatron-M4血凝仪(成都贝斯达仪器有限公司)。

2 实验方法

2.1 分组及给药 将48只雄性小鼠随机分为6组，即空白组、模型组、阳性对照组(玉屏风胶囊，0.39 g/kg)、高剂量组(4.0 g生药/kg)、中剂量(2.0 g生药/kg)、低剂量(1.0 g生药/kg)。于造模前预防性给药7 d，空白组和模型组小鼠给予等体积生理盐水灌胃，1次/d，20 mL/kg。

2.2 模型建立 空白组小鼠腹腔注射等体积生理盐水，其他各组小鼠腹腔注射CTX注射液60 mg/kg，1次/d，连续3 d。

2.3 检测指标 末次给药后2 h,小鼠眼球取血，部分全血利用全自动细胞血液分析仪进行RBC、PLT、WBC、T-LYM的检测；部分全血3 500 rpm离心10 min，分离血浆，利用全自动血凝仪对PT和APTT进行测定。

3 结果

3.1 鹿角胶对CTX致血虚小鼠模型血细胞的影响 与空白组比较，模型组小鼠全血中RBC、PLT、WBC、T-LYM的数量均下降，且有统计学意义(P<0.01)，说明模型制备成功；与模型组比较，除鹿角胶低剂量组RBC外,鹿角胶和玉屏风胶囊能显著升高血虚小鼠全血中RBC、PLT、WBC、T-LYM的数量，有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。提示鹿角胶对血虚小鼠具有预防炎症、活血的功能，见表1。

表1 鹿角胶对CTX所致血虚模型小鼠全血中WBC、RBC、T-LYM、PLT的影响

注：与模型组比较，#P<0.05，##P<0.01;与空白组比较，△△P<0.01。

3.2 鹿角胶对CTX致血虚小鼠模型对PT和APTT的影响 与空白组比较,模型组小鼠PT和APTT数值明显降低，有统计学意义，说明模型制备成功；与模型组比较，鹿角胶和玉屏风胶囊能明显提高小鼠PT和APTT数值,其中鹿角胶高剂量组APTT值有统计学意义(P<0.01),其余各组有统计学意义(P<0.05)。提示鹿角胶能够通过抗凝血作用来保护免疫损伤模型小鼠。

组 别剂量/(g/kg)PT/(s)APTT/(s)空白组 19.961±1.751 25.690 ±2.572 模型组 18.800±2.011△△19.186 ±1.681△△阳性对照组 0.3916.730±1.290# 21.558 ±1.527# 419.178±2.223# 24.705 ±2.625##鹿角胶组 218.456±1.574# 23.771 ±2.012# 118.506±1.897# 22.810 ±1.634#

注：与模型组比较，#P<0.05，##P<0.01； 与空白组比较，△△P<0.01

4 讨论

鹿角胶是鹿角经水煎煮，浓缩制成的固体胶，味甘、咸，性温。归肝、肾经。传统功效益气养血、益精填髓、强筋骨、壮阳。现代研究表明，血虚会出现RBC 、PLT、WBC、T-LYM的减少，并且凝血功能障碍，采用现代科学手段模拟中医血虚症，赋予传统中药现代科学理论，对于机制的探讨和新药的开发具有一定的意义。

CTX为常用的抗肿瘤化疗药物，同时影响人体的造血功能和免疫功能，对外周血细胞和骨髓细胞均有杀伤作用，采用CTX损伤小鼠血液系统，造成血虚症候。PLT在血栓形成、止血、炎症反应等过程中有着重要的作用,WBC聚集、浸润，单核细胞、中性粒细胞和内皮细胞的黏附，都受到PLT的影响，可释放大量炎性介质，直接参与多种疾病的形成和发展[7]。WBC和RBC能够促进血小板的凝血活性，当机体RBC大量减少时,会引起贫血。PT和APTT是反应机体凝血功能的重要指标。免疫损伤属于中医气血不足、肝肾两虚的病症。WBC和RBC都是具有免疫功能的细胞，可吞噬异物产生抗体，抵抗病菌入侵，当由于各种理化因素导致的中毒，肿瘤放化疗，免疫抑制等时就会导致WBC和RBC的数量明显下降，T-LYM主要参与细胞免疫，直接杀伤靶细胞，释放淋巴因子，使免疫效应增强，是炎症反应的效应细胞，抑制炎症反应的发生。

本实验采用CTX建立小鼠免疫抑制模型,利用鹿角胶对模型小鼠进行干预，通过检测全血中RBC、PLT、WBC、T-LYM，以及PT和APTT变化,从抗炎和活血两方面探讨了鹿角胶调节血虚症可能的机制，结果显示，鹿角胶可明显升高血虚小鼠全血中RBC 、PLT、WBC、T-LYM数量，提高PT和APTT，提示鹿角胶可作为治疗肿瘤和改善化疗药物产生血虚症的辅助用药，为临床应用提供参考。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京:化学工业出版社,2010:302.

[2]李娜,曲晓波,姜宗文,等.动物药整理研究—鹿角胶[J].吉林中医药,2014,34(1):74-76.

[3]李炯辉,刘莹.参鹿固元汤治疗非小细胞肺癌同步放化疗后白细胞减少症 43 例[J].陕西中医,2013(12):1571-1572.

[4]蒙海燕,曲晓波,李娜,等.鹿茸及鹿角胶对去卵巢大鼠骨质疏松症的影响[J].中药材,2009,32(2):179-182.

[5]吴静,余仕龙,王峰,等.鹿角胶对大鼠胃黏膜保护作用的实验研究[J].实用医学杂志,2007,23(17):2636.

[6]李娜,曲晓波,李晶,等.鹿角多肽对 H2O2诱导 MG63 氧化损伤的保护作用[J].中国老年学杂志,2014,34(10):2783.

[7]凌霜,卞卡.血小板活化产物与炎症的关系研究进展[J].中华中医药学刊,2009,27(4):719-721.