盐酸安舒法辛对嗅球摘除大鼠抑郁行为及血清皮质酮、睾酮的影响

何 杰,林 菲,董秋菊,邢艳丽,田京伟

(1.烟台大学药学院,山东 烟台 264005;2. 山东绿叶制药有限公司,山东 烟台 264003)

抑郁症是一种常见的精神障碍性疾病,是由各种原因引起的以抑郁为主要症状的一组心境障碍或情感性障碍[1-2],具有发病率高、复发率高、致残率高的特点．WHO预测,到2020年抑郁症将成为继冠心病后的第二大疾病负担源．

目前治疗抑郁症的一线药物为选择性5-羟色胺(5-HT)再摄取抑制剂(SSRIs)、5-HT和NE再摄取抑制剂(SNRIs),虽然疗效确切,但起效慢,不能有效治疗抑郁患者的快感缺乏,也不能改善奖励、激励驱动和目标导向行为,而且易导致性功能障碍,无法满足临床更高需求．盐酸安舒法辛是山东绿叶制药有限公司自主研发的新化合物,已获得化合物专利,相对于SSRIs和SNRIs,盐酸安舒法辛是一种潜在的三摄取抑制剂,具有起效快,改善快感缺乏和性功能障碍,增强认知、奖励激励驱动和目标导向行为等特点,是一种新型抑郁治疗药物．本实验选用嗅球摘除抑郁模型大鼠,观察盐酸安舒法辛的抗抑郁作用,并探讨其可能的抗抑郁机制．

1 材料与方法

1.1 实验动物

12周龄SPF级健康雄性SD大鼠,体重200～240 g,由山东绿叶制药有限公司实验动物中心提供,动物合格证号码:SCXK(鲁)2009-0009．

1.2 药品与试剂

盐酸安舒法辛:山东绿叶制药有限公司(批号:20110513);盐酸文拉法辛:华北制药集团海翔医药有限责任公司(批号:110106);大鼠睾酮(T)ELISA试剂盒:R&D公司生产(批号:KGE010);大鼠皮质酮(CROT)ELISA试剂盒:ArborAssays生产(批号:K014-H1);注射用青霉素钠:山东鲁抗医药股份有限公司(批号:L110804);羧甲基纤维素钠(CMC):上海昌为医药辅料技术有限公司分装(美国AQUALON生产)(批号:91342);水合氯醛:天津市福晨化学试剂厂(批号:20090820)．

1.3 仪器

酶标仪(SPECTRARMAX M5,Molecular Devices,USA);离心机(ALLEGRATM X-22R,BEKMAN,USA);开场试验箱(上海软隆科技发展有限公司)．

1.4 实验方法

1.4.1 嗅球摘除抑郁大鼠模型的建立[3-4]雄性大鼠60只,随机取10只作为假手术对照组,余下50只复制嗅球摘除抑郁模型．模型组大鼠以10%水合氯醛(380 mg/kg,i.g.)麻醉后固定,两耳联线中点处剥开皮肤,暴露头骨,在距前囟7～8 mm,与正中缝两侧旁开2 mm的交点处,以颅骨钻钻2个直径2 mm的小孔．以探针自颅骨孔搅动,真空泵吸出从颅骨钻孔溢出的白色脑组织,以吸收性明胶海绵填入止血并封闭颅骨孔．假手术组大鼠采用相同方法在手术定位点上钻孔,但不损伤嗅球．清理伤口,撒少许青霉素粉,缝合皮肤,腹腔注射青霉素16万单位/只,连续注射3 d,以防术后感染．手术后常规饲养,每日抚摸大鼠5～10 min,隔天换垫料,自由饮食．

1.4.2 分组和给药 术后2周,根据自主活动得分,将抑郁模型大鼠均衡随机分为5组,每组10只,分别为模型组、盐酸文拉法辛组、盐酸安舒法辛低(4.0 mg/kg)、中(8.0 mg/kg)和高(16.0 mg/kg)剂量组．各组动物灌胃给予0.5%羧甲基纤维素钠混悬的相应药物,假手术组和模型组给予等容积的0.5%羧甲基纤维素钠,给药体积:10 mL/kg,每日1次,连续给药20 d．

1.4.3 检测指标 (1)开场实验．给药第7天、14天进行自主活动测定．测定前所有动物禁食16 h,给药后1 h开始测定．所用开场试验箱为高40 cm、长宽均为52 cm的内空立柱体,底面划分为面积相等的16块．分别计算5 min内每只大鼠穿越底面的方块数和站立次数,以大鼠两前爪均离地计为站立1次．

(2)糖水消耗实验．实验时大鼠单笼饲养,在安静的房间内训练动物适应喝糖水(1%蔗糖溶液),给药第15天每笼放置2瓶糖水;第16天每笼放置1瓶糖水,1瓶纯水,2瓶位置随机;第17天禁食禁水;第18天给每只大鼠随机放置2个水瓶,分别放有事先称重的1%蔗糖水和纯水,2 h后取2瓶水再次称重．记录每只大鼠的糖水和纯水的消耗量,计算大鼠2 h糖水消耗百分率:

糖水消耗百分率(%)= 所喝糖水量/(纯水量+糖水量)×100.

(3)皮质酮、睾酮含量测定．实验第20天,于给药后2 h麻醉大鼠,腹主动脉取血,离心取血清,ELISA试剂盒测定皮质酮、睾酮含量．

1.5 统计学方法

2 结 果

2.1 盐酸安舒法辛对对嗅球摘除抑郁模型大鼠行为学的影响

与假手术组比较,实验第7天和第14天模型组大鼠的跨格数与站立次数明显增加(P<0.01);与模型组比较,盐酸安舒法辛中、高剂量组明显降低大鼠的跨格数与站立次数(P<0.01),盐酸安舒法辛 8.0 mg/kg作用强度略优于等物质的量剂量的盐酸文拉法辛(P<0.05)．结果见表1和2．

表1 盐酸安舒法辛对嗅球摘除抑郁模型大鼠跨格数的影响

注:与假手术组相比,#为P<0.05;##为P<0.01;与模型组相比,*为P<0.05;**为P<0.01．

表2 盐酸安舒法辛对嗅球摘除抑郁模型大鼠站立次数的影响

注：与假手术组相比,#为P<0.05;##为P<0.01;与模型组相比,**为P<0.01．

2.2 盐酸安舒法辛对嗅球摘除抑郁模型大鼠糖水消耗的影响

与假手术组比较,模型组大鼠的糖水消耗率明显降低(P<0.01)．与模型组比较,盐酸安舒法辛中、高剂量组大鼠的糖水消耗明显升高(P<0.05,P<0.01),8.0 mg/kg盐酸安舒法辛作用强度与等物质的量剂量的盐酸文拉法辛相当．结果见表3．

表3 盐酸安舒法辛对嗅球摘除抑郁模型大鼠糖水消耗的影响

注：与假手术组相比,#为P<0.05;##为P<0.01;与模型组相比,*为P<0.05;**为P<0.01．

2.3 盐酸安舒法辛对嗅球摘除抑郁模型大鼠血清皮质酮、睾酮的影响

与假手术组相比,模型组大鼠的皮质酮水平升高、睾酮水平降低,盐酸安舒法辛中、高剂量组明显降低大鼠血清皮质酮水平(P<0.05,P<0.01),高剂量组明显升高血清睾酮水平(P<0.05),盐酸安舒法辛8 mg/kg作用强度优于等物质的量剂量的盐酸文拉法辛．结果见表4．

表4 盐酸安舒法辛对嗅球摘除抑郁模型大鼠血清皮质酮、睾酮的影响

注：与模型组相比,*为P<0.05;**为P<0.01．

3 讨 论

大鼠嗅球摘除模型是经典的抑郁动物模型,嗅球摘除引起的脑内结构、神经递质变化和行为学改变均与抑郁症的病理改变相似[5]．大鼠嗅球摘除后,自主活动明显增加,攻击性增强,开场实验反映的是大鼠的激越性情绪的改变;快感缺失为抑郁症的核心症状之一,利用动物对甜味的偏好设计的糖水消耗实验反映的是动物对奖赏的反应性[6-7]．

实验结果显示,模型组大鼠跨格数和站立次数明显增加,糖水消耗率明显降低,盐酸安舒法辛连续灌胃给药明显减少嗅球摘除抑郁模型大鼠的跨格数(与模型组比较,P<0.01)和站立次数(与模型组比较,P<0.01),增加糖水消耗率(与模型组比较,P<0.01),且呈剂量依赖关系,表明盐酸安舒法辛能明显改善大鼠的行为学和快感缺失的症状,盐酸安舒法辛 8 mg/kg作用强度优于或相当于等物质的量剂量的盐酸文拉法辛．

下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴作为神经内分泌免疫网络的枢纽,主要用于维持人体内环境的稳定,对外界环境的刺激作出必要的生理心理反应[8]．越来越多的研究显示,HPA轴在抑郁症的发病机制中发挥着重要的作用[9],HPA轴的持续亢进程度和抑郁患者症状的严重程度密切相关．皮质醇(CROT)是HPA轴涉及的主要激素之一,大鼠嗅球摘除后,5-HT神经纤维被破坏,5-HT神经元活性降低,刺激促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)分泌,引起促肾上腺皮质激素(ACTH)分泌增加,导致CROT分泌增加,致使HPA轴过度活化[10-11]．HPA轴功能亢进,抑制促性腺激素释放激素(GnRH),从而抑制下丘脑-垂体-性腺(HPG)轴,导致睾酮水平下降．

本实验结果显示,盐酸安舒法辛相对文拉法辛能明显降低血清皮质酮水平(与模型组比较,P<0.01),升高血清睾酮水平(与模型组比较,P<0.05),且呈剂量依赖关系,表明盐酸安舒法辛有可能是通过拮抗HPA轴的功能亢进来改善抑郁症状,同时,与临床表现出的文拉法辛性功能障碍的副作用相比,盐酸安舒法辛能升高血中睾酮水平,表明其对男性抑郁患者的性功能障碍应具有一定的治疗作用．

综上所述,盐酸安舒法辛能够改善嗅球摘除模型大鼠的抑郁行为,降低HPA轴的亢进状态,是一个很有潜力的抗抑郁新化合物．

参考文献:

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