长白山地区高山红景天中红景天苷含量及农药残留的测定

丁雪，刘贺，敖宇涛，王冬雪，郭建鹏,2*

(1.延边大学药学院，吉林 延吉 133002；2.长白山生物资源与功能分子教育部重点实验室(延边大学)，吉林 延吉 133002)

高山红景天(RhodiolasachalinensisA．Bor)是景天科(Crassulaceace)红景天属的多年生草本植物，主要分布于长白山地区，是长白山珍稀特色药材之一.高山红景天用作“适应原”样药材，具有抗缺氧、抗衰老、抗肿瘤、抗疲劳、预防高原反应、降血糖等多种功能[1-3].目前，高山红景天的人工栽培品种尚未形成规模，仅在吉林省临江、敦化、和龙等地的山区有少量栽培，较大的栽培基地正在建设当中,位于吉林省安图县高海拔林下山地.本文采用高效液相色谱法和气相色谱法，对产自长白山地区3～6年生的人工栽培高山红景天和4年生野生高山红景天中红景天苷含量和农药残留量进行测定，为了解高山红景天药材质量信息以及制定药材标准提供参考.

1 仪器与试药

仪器有Agilent 1260 Infinity LC，Agilent 6890气相色谱仪，配Ni63电子捕获检测器(ECD)和SK5200HP超声波清洗器；FW100高速万能粉碎机.红景天苷对照品(中国药品生物制品检验所，批号为10818-200404)，六六六(α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC)、滴滴涕(ρ，ρ’-DDE、ο，ρ’-DDT、ρ，ρ’-DDD和ρ，ρ’-DDT)标准溶液浓度均为100 μg/mL(中国国家标准物质研究中心，批号分别为GBW-060081、GBW060082、GBW060083、GBW060084、GSB05-2280-2008、GSB05-2281-2008、GSB05-2282-2008、GSB05-2283-2008)，甲醇、丙酮、正己烷为色谱纯，其余试剂均为分析纯.

①长白山朝鲜一侧4年生野生高山红景天; ②长白山安图一侧4年生野生高山红景天; ③ 6年生人工栽培高山红景天; ④ 5年生人工栽培高山红景天; ⑤ 4年生人工栽培高山红景天; ⑥ 3年生人工栽培高山红景天.以上红景天均经延边大学药学院吕慧子副教授鉴定.

2 红景天苷含量的测定

2.1 溶液的制备[4-5]

2.1.1对照品溶液 取红景天苷对照品，精密称定，加甲醇制成0.5 mg/mL溶液.

2.1.2供试品溶液的制备 精密称取粉末(过3号筛)0.5 g，置具塞锥形瓶中，加入甲醇10 mL，超声提取30 min；提取液置10 mL容量瓶中定容，用0.45 μm微孔滤膜过滤，滤液作为供试品溶液.

2.2 色谱条件[6]

柱温为25 ℃，色谱柱为PLATISTLTM C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相为甲醇-0.01 mol/L乙酸铵溶液(20∶80,体积比)；检测波长为275 nm，流速为1.0 mL/min，进样量为5 μ；以外标法定量.对照品及供试品溶液的色谱图如图1所示.

图1 对照品(A)和供试品(B)溶液的色谱图

2.3 线性关系

将对照品溶液稀释制成系列浓度的标准溶液，以浓度(mg/mL)为横坐标(X)，峰面积值为纵坐标(Y)，线性拟合后得到回归方程Y=303.179X-43 875，r=0.999 8.

2.4 精密度

取对照品溶液并按2.2的色谱条件重复进样以测定红景天苷峰面积值，结果显示红景天苷峰面积的RSD值为1.19%(n=6)，这表明仪器精密度良好.

2.5 重复性

取同一供试品溶液，按色谱条件2.2测定，结果显示红景天苷的RSD值为1.03%(n=6)，这表明该方法的重复性良好.

2.6 稳定性

分别以0，2，4，8，12，24 h按色谱条件2.2测定供试品溶液，结果显示红景天苷峰面积的RSD值为1.37%(n=6)，这表明供试品溶液在24 h内稳定.

2.7 回收率

精密称取已知红景天苷含量的样品(1.414 mg/g)，定量加入红景天苷对照品，按2.1.2中方法制备供试品溶液，按色谱条件2.2测定，结果显示平均加样回收率为96.62%，RSD值为1.32%.

2.8 样品测定

将各样品按2.1.2中方法制成供试品溶液，按2.2的色谱条件测定红景天苷含量，结果见表1.

表1 红景天药材中红景天苷含量的测定结果

3 六六六、滴滴涕残留量的测定

3.1 供试品的制备[7-8]

精密称取粉碎后过5号筛的红景天粉末2.000 0 g，加石油醚20 mL，振荡30 min，过滤，浓缩，转移至10 mL刻度的试管中，并用石油醚定容至5 mL.加入0.5 mL浓硫酸，漩涡混旋器混旋0.5 min，10 000 r/min离心5 min，取上清液.

3.2 色谱条件[9]

毛细管色谱柱为HP-5(0.32 mm×30 m×0.25 μm)；载气为氮气，流速为1 mL/min；不分流进样；进样口温度为250 ℃；检测器温度为300 ℃；采用程序升温，初始温度为100 ℃，以10 ℃/min升温至220 ℃，保持20 min；进样量为2 μL.以保留时间定性，峰面积外标法定量.

3.3 线性与检出限[10]

根据3.2所列仪器测试条件对六六六(α-HCH，β-HCH,γ-HCH,δ-HCH)和滴滴涕(ρ，ρ’-DDD、ρ，ρ’-DDE、ο，ρ’-DDT、ρ，ρ’-DDT)标准样品进行检测，经分离的8种有机氯农药的色谱图见图2.配制浓度为5.0、10.0、20.0、50.0、100.0 μg/L的系列标准溶液，气相色谱分析结果以峰面积对标准浓度进行线性回归.称取已知不含六六六、滴滴涕的红景天供试样品，加入各不同浓度的对照品溶液，以信噪比为3的色谱峰作为检测限量，以样品提取方法中的取样量和定容体积计算本方法的检出限.8种有机氯农药线性回归方程、相关系数及方法检出限的测定结果见表2.表2表明，在5.0～100.0 μg/L质量浓度范围内，该方法的线性关系良好，线性相关系数均大于0.99，8种农药的最低检出限为0.6～1.2 μg/L.

图2 对照品色谱图

表2 方法学考察结果

3.4 回收率和精密度

对同一红景天样品，按照3.2方法连续测定加标回收率5次，计算其平均回收率和相对标准偏差，结果见表2.表2表明，8种有机氯农药的加标回收率为87.5%～102.3%，相对标准偏差(RSD)为0.9%～3.4%，表明试验方法具有较好的准确度和精确度.

3.5 含量测定

按3.2法对7种红景天样品进行含量测定，测定结果中均未检测到六六六、滴滴涕农药残留.

4 结论

本文采用高效液相色谱法和气相色谱法，对产自长白山地区3～6年生的人工栽培高山红景天和4年生野生高山红景天中红景天苷含量和农药残留量进行了测定，实验结果显示，不同产地及年限的高山红景天中红景天苷含量有差异，其中野生品种含量最高，人工栽培品种含量低于野生品种，这与文献[11]的结果相符合.在各样品中均未检出农残六六六和滴滴涕，表明长白山地区高山红景天生药材尚无严重农药污染.

参考文献：

[1]李金花，于文斌，赵丽茹，等.红景天灵芝胶囊增强免疫力及抗辐射功能研究[J]．长春中医药大学学报，2010，26(6)：817-818．

[2]赵永焕，刘成海，武廷华．红景天的研究与应用[J]．中国林副特产，1998,46(3)：44-45.

[3]王洁，杨长青，金贞姬，等.高山红景天总多酚对高脂食物-链脲佐菌素诱导大鼠2型糖尿病的影响[J].中国药房，2011，22(23):2125-2127.

[4]国家药典委员会．中华人民共和国药典(一部)[S]．北京：化学工业出版社，2010：附录IX Q.

[5]王曙，游心涛，王峰鹏.红景天属植物中红景天甙的高效液相色谱分析[J].药学学报，1992，27(11):849-852.

[6]国家食药监总局.保健食品中红景天苷的测定等15个保健食品功效成分或标志性成分检测方法(征求意见稿)[D]．食药监食监三便函〔2013〕143号.http://www.sda.gov.cn/wsol/cl0780/94680.html.

[7]邰超，齐永安，庞玉娟，等.固相微萃取-气相色谱法测定水中痕量有机氯农药[J].环境监测管理与技术，2007，19(5)：26-29.

[8]汪小勇，姜文，张超兰.气相色谱法测定土壤中六六六残留量[J].中国环境管理干部学院学报，2007,17(3)：40-43.

[9]赵华，胡秀卿，吴珉，等.基质固相分散-加速溶剂萃取-气相色谱法测定土壤中六六六和滴滴涕农药残留[J].浙江农业科学，2008(3)：339-341.

[10]缪霞杭，吴晓云.不同产地白术中六六六和滴滴涕残留的测定[J].浙江中西医结合杂志，2013，23(11):950-951.

[11]王思宏，金香淑，姚艳红，等.野生和栽培高山红景天的核磁共振指纹图谱的研究[J].延边大学学报：自然科学版，2001，27(4)：274-276.