大头艾纳香总黄酮类化合物提取工艺研究

刘艳华，赵忠桂，萧 赪

（湖南环境生物职业技术学院， 湖南 衡阳421001）

大头艾纳香总黄酮类化合物提取工艺研究

刘艳华，赵忠桂，萧 赪

（湖南环境生物职业技术学院， 湖南 衡阳421001）

目的：为充分利用大头艾纳香植物资源，避免资源的浪费，探讨大头艾纳香提取物中总黄酮的提取工艺.方法：采用超声波提取法从大头艾纳香中提取总黄酮类物质，通过正交与单因素实验，确定了大头艾纳香中总黄酮类物质提取的最佳工艺.结果：通过正交与单因素实验得到的工艺最佳条件是：浓度为65%乙醇，固液比为l:20，超声波时间30m in，总提取3次,浸泡24h.在这种条件下，提取率最高，总黄酮得率可达4.417%.结论：这种提取工艺重现性好，简单可行，对工艺进一步的开发有很好的参考价值.

超声波提取；大头艾纳香；总黄酮

大头艾纳香菊科艾纳香属多年生攀援灌木，分布于福建、台湾、江西、湖南、广东、广西、四川、贵州、云南等省区.

大头艾纳香资源丰富，全草含黄酮，其性微苦、淡，微温，有祛风除湿，活血调经的功能，主治风湿骨痛，跌打肿痛，产后血崩，月经不调等症状，具有广泛开发利用价值.研究表明，黄酮类化合物为大头艾纳香植物的有效成分之一，目前有关大头艾纳香中总黄酮的提取方法尚未见文献报道，为合理开发和利用这一药用植物资源，利用超声法提取大头艾纳香中总黄酮，通过正交与单因素试验确定了提取的最佳工艺条件，为进一步的开发利用提供依据.

1 仪器与试剂

1.1 仪器

KQ5200E型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；101-2型电热恒温鼓风干燥箱（上海南阳仪器有限公司）；WFH-203三用紫外分析仪（上海精科实业有限公司）；SHB-IV循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）；T6新世纪紫外可见分光光度计（2004（C）北京普析通用仪器有限责任公司）；旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；800型台式离心机(上海浦东物理光学仪器厂)；电子分析天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司).

1.2 试剂

甲醇AR；乙醇AR；石油醚AR；橙皮苷标准品（中国药品生物制品检定所）；新鲜大头艾纳香植株采自广西桂林临桂县.

2 标准曲线的制定

2.1 制备样品溶液[1]

将大头艾纳香枝叶粉碎并过40目筛，两次用1:10的石油醚进行回流脱脂，每次回流脱脂时间为2h，抽滤，洗涤，然后放入40℃的鼓风烘箱中干燥1h左右，备用.

称取1.Og备用大头艾纳香粉末，加入25mL甲醇，摇匀，密塞，称其质量.超声波提取30min，放冷后，称定其质量，再用甲醇补足减失的质量，摇匀，离心，取出上清液5mL，甲醇定容至50mL，即可以得样品液.

2.2 制备对照品溶液

称取橙皮苷标准品0.0050g，用甲醇将其定容至50mL，就可得浓度为0.10mg/mL芦丁的标准溶液.

2.3 波长的测定

分别取l.0mL对照品和l.0mL样品溶液于10mL容量瓶中，用甲醇进行稀释至刻度，于200～500nm处进行扫描，两者均在280nm附近有最大吸收峰，因此试验中选择测定的波长为280nm.

2.4 绘制标准曲线

分别精密吸取橙皮苷对照液（0.10mg/mL）0.00，0.50，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00mL于10.00mL容量瓶中，用甲醇进行定容，在280nm处测吸光度.其吸光度值见表2.1.

根据上表得回归方程：A=2.72×10-2+18.102C，r=0.9979

表2 .1紫外可见分光光度计测定吸光度

3 大头艾纳香总黄酮成分的提取

3.1 单因素实验

用4个可能影响提取效果的因素做单因素试验即浸泡时间、乙醇浓度、固液比和超声时间.把总黄酮得率作为考察指标，确定各个因素的合适范围.考察其中一个因素对大头艾纳香总黄酮得率的影响时，其他因素固定.

3.1.1 浸泡时间对总黄酮得率的影晌

精确称取6份1.Og已脱脂的大头艾纳香粉末于烧瓶中，用浓度65%乙醇，固液比1:20，分别浸泡不同时间，超声时间30min提取总黄酮，抽滤合并滤液，定容到25ml，取5ml蒸干用甲醇溶解过滤，甲醇定容到50ml，取1.0ml稀释到lOml，使用紫外分光光度法测定吸光度，利用回归方程（见2.4）计算总黄酮含量.

图3.1可以得出，随着延长浸泡时间，黄酮得率逐渐升高，超过了24h后，对黄酮得率的影响不大，从而可以确定浸泡时间最好为24h.

图3 .1浸泡时间对总黄酮提取效率的影响

3.1.2 乙醇浓度对总黄酮得率的影响

精确称取6份1.Og已脱脂的大头艾纳香粉末于烧瓶中，分别用不同浓度的乙醇，固液比1:20，浸泡24小时，超声时间30min提取总黄酮，抽滤合并滤液，定容到25ml，取5ml蒸干用甲醇溶解过滤，甲醇定容到50ml，取1.0ml稀释到lOml，使用紫外分光光度法测定吸光度，利用回归方程（见2.4）计算总黄酮含量.

图3 .2乙醇浓度对总黄酮提取效率的影响

图3.2可以得出，在乙醇浓度达到65%之前随着乙醇浓度的升高，总黄酮得率升高，在乙醇浓度为65%，总黄酮得率达到最大值，超过65%随着乙醇浓度的增加，总黄酮得率逐渐变低，主要是因为65%乙醇的极性与黄酮类物质的极性相似[2]，随着升高乙醇浓度，部分脂溶性物质的浸出增加，从而影响了黄酮类物质的浸出.

3.1.3 固液比对总黄酮得率的影响

精确称取5份1.Og已脱脂的大头艾纳香粉末于烧瓶中，分别用不同的固液比，浓度65%乙醇，浸泡24小时，超声时间30min提取总黄酮，抽滤合并滤液，定容到25m l，取5ml蒸干用甲醇溶解过滤，甲醇定容到50m l，取1.0ml稀释到lOml，使用紫外分光光度法测定吸光度，利用回归方程（见2.4）计算总黄酮含量.

一般来说，溶剂用量越大，更有利于黄酮类物质的扩散，其提取效果就会越好.但是溶剂用量过大会给后续的工作如浓缩带来不便，同时已经浸出的黄酮对未浸出的黄酮有协同浸提作用，溶剂用量过大时不利于协同浸提[3].图3.3可以得出，固液比为l:20时总黄酮得率最大，所以选取固液比为1:25左右为宜.

图3 .3固液比对总黄酮提取效率的影响

3.1.4 超声时间对总黄酮得率的影响

精确称取5份1.Og已脱脂的大头艾纳香粉末于烧瓶中，用浓度65%乙醇，固液比1:20，浸泡24小时，不同的超声时间提取总黄酮，抽滤合并滤液，定容到25ml，取5ml蒸干用甲醇溶解过滤，甲醇定容到50ml，取1.0ml稀释到lOml，使用紫外分光光度法测定吸光度，利用回归方程（见2.4）计算总黄酮含量.

图3 .4超声时间对总黄酮提取效率的影响

图3.4表明，超声时间30min时达到最大值，原因是时间在30min时，黄酮类物质溶出已达到动态平衡，再延长超声时间，部分热敏组分可能破坏或者时间过长溶剂挥发乙醇浓度降低从而总黄酮得率下降[2].

3.2 正交实验

精确称取9份1.Og已脱脂的大头艾纳香粉末于烧瓶中，采用超声法提取总黄酮，根据正交表进行实验，改变提取条件（不同乙醇浓度、不同固液比、不同超声时间和不同提取次数）提取，抽滤合并滤液，定容到25ml，取5ml蒸干用甲醇溶解过滤，甲醇定容到50m l，取1.0ml稀释到lOml，使用紫外分光光度法测定吸光度，利用回归方程（见2.4）计算总黄酮含量，确定超声提取的最佳工艺见表3.1和表3.2.

表3 .1超声提取正交实验因素水平表

实 验 号A B C D总 黄 酮含量(%) 1 1 1 1 1 3.514 2 1 2 2 2 3.818 3 1 3 3 3 3.53 4 2 1 2 3 4.484 5 2 2 3 1 4.334 6 2 3 1 2 3.782 7 3 1 3 2 3.378 8 3 2 1 3 4.096 9 3 3 2 1 3.906 k13.062 3.792 3.797 3.918 k2 3.793 3.469 3.743 4.037极 差R 1.138 0.614 0.056 0.378优 水 平A2B2C2D34.2 4.083 3.799 3.659 k3

单因素实验与正交实验结果表明，4个因素对总黄酮得率的影响大小依次为：乙醇浓度A>固液比B>提取次数D>超声时间C，确定大头艾纳香总黄酮提取的最佳工艺为A2B2C2D3.即浓度65%乙醇，固液比1:20，超声时间30min，提取3次，浸泡24h.

3.3 验证提取工艺

为确定最佳工艺的稳定性和合理性，称取1.Og已脱脂的大头艾纳香粉末65%乙醇20倍量提取30min提取3次，合并滤液，浓缩到25m l，精密量取5m l蒸干，甲醇溶解定容至50ml，精密量取1.0ml定容至10ml，用紫外分光光度法测定总黄酮含量.平行做5份，含量平均值为4.417%，RSD为1.84%，工艺稳定.

表3 .3最佳工艺的验证实验

4 结论

超声波提取法有省时，节能，提取率高的优点.因此我们采用超声法提取大头艾纳香总黄酮，通过正交与单因素实验得到的最佳工艺为：浓度65%乙醇，固液比l:20，超声时间30min，提取3次，浸泡24h.在这些条件下，提取率最高，总黄酮得率可达4.417%.此工艺实验重现性好，比较简单，对一些工艺开发有很好的参考价值.

〔1〕杨荣平,寿清耀,王宾豪等.紫外分光光度法测定复方补骨质缓释片中补骨脂总黄酮的含量[J].中国药房,2007,18(9):673-674.

〔2〕朱万靖,倪培德,江志炜.沙棘果渣中黄酮类化合物最佳提取工艺研究[J].中国油脂,2001,26(1)：35-37.

〔3〕龚建良,李姣娟,陈丛瑾.微波法提取油茶叶总黄酮的工艺研究[J].安徽农业科学，2007，35(35)：11372～11374.

TQ461

A

1673-260X（2014）07-0068-03

衡阳市科技局基础研究计划项目（2012KJ36(衡科发[2012]75号)）；湖南省教育厅高校科研项目（12C1059(湘教通[2012]596号)）