新型复方氟苯尼考注射液的安全性评价

程培培　杨亚军　刘希望　李剑勇

摘要：按照2010版《中国兽药典》和《兽药及添加剂安全性毒理学评价程序》的要求，对新型复方氟苯尼考注射液进行安全性评价，相应进行了热原检查、注射途径LD50测定、皮肤刺激试验和肌肉刺激试验等。结果表明：新型复方氟苯尼考注射液制剂热原检查符合药典规定；腹腔注射对小鼠的LD50为1 888.73 mg/kg，95%可信限为1 575.90～2 263.65 mg/kg；该注射液对皮肤有轻度刺激性；对股四头肌有轻微刺激，但在给药后7 d可以完全恢复。说明新型复方氟苯尼考注射液安全可靠，可应用于兽医临床。

关键词：新型复方氟苯尼考注射液；热原检查；LD50；皮肤刺激；肌肉刺激；安全性评价

中图分类号： S859.79+6文献标志码： A文章编号：1002-1302（2014）01-0174-03

收稿日期：2013-05-09

基金项目：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项（编号：1610322012005）；国家公益性行业（农业）科研专项（编号：201303038-4）。

作者简介：程培培（1987—），女，河南洛阳人，硕士，主要从事药物筛选研究。E-mail：chengpeipei1117@163.com。

通信作者：李剑勇（1971—），男，甘肃秦安人，博士，研究员，主要从事新兽药的研究与开发工作。Tel：（0931）2115290；E-mail：lijy1971@163.com。猪、牛呼吸系统感染性疾病的发病率高，病原微生物多种多样，血清型复杂，疫苗的交叉保护力较差，在这类疾病治疗过程中，药物防治发挥着巨大的作用[1-3]。

新型复方氟苯尼考注射液是由抗菌药物氟苯尼考和抗炎药物氟尼辛葡甲胺以及辅料等成分组成，用于皮下注射和肌肉注射。氟苯尼考是动物专用的广谱抗生素，克服了氯霉素引起骨髓抑制和再生障碍性贫血的缺点，且抗菌活性优于同类的氯霉素、甲砜霉素等，广泛应用于畜禽和水产细菌性疾病[4]，如由多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida）、溶血性巴氏杆菌（Pasteurella hemolytica）、昏睡嗜血杆菌（Haemophilus somnus）等引起的牛呼吸系统疾病、由猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopneumoniae）、多杀性巴氏杆菌、胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropneumoniae）、支气管败血波氏杆菌（Bordetella bronchiseptica）、肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae）等引起的猪呼吸系统疾病、禽大肠杆菌病和霍乱等防控。氟尼辛葡甲胺是一种非选择性的非甾体抗炎药[5]，通过抑制花生四烯酸环氧合酶途径，阻止前列腺素的合成，起到抗炎、镇痛、退热的作用，该药已被《英国兽药典》2001版、《美国药典》2002版[6]和《中国兽药典》2010版收录，被批准用于肉牛、奶牛、马的内毒素血症引起的炎症，控制呼吸系统疾病伴随的发热症状和急性牛乳房炎[7]。已有的相关研究表明，氟尼辛葡甲胺和抗菌药物联用治疗牛、猪呼吸系统疾病效果良好[8-9]。

依据抗菌、抗炎的原则和长效、缓释的目的，研制出新型复方氟苯尼考注射液，用于治疗猪、牛呼吸系统原发或继发细菌和支原体感染，具有很好的抗菌和抗炎作用。为了将复方氟苯尼考注射液制剂合理、安全的应用于临床并提供理论依据，依据2010版《中国兽药典（一部）》对注射剂要求[10]和《兽药及添加剂安全性毒理学评价程序》[11]对该注射液进行了安全性评价，包括热原检查、注射途径LD50测定、皮肤刺激试验和肌肉刺激试验。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1药品新型复方氟苯尼考注射液（批号：F20120730，氟苯尼考含量为30%，中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所）；空白溶剂（批号：20120913，中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所）；0.9%氯化钠注射液（批号：1210032B，安徽双鹤药业有限责任公司）。

1.1.2试验动物日本大耳白兔，雌雄各半，体重2.0～3.0 kg，购自中国农业科学院兰州兽医研究所，许可证号：SCXK（甘）2012-0001；昆明小鼠，雌雄各半，体重18～22 g，购自兰州大学实验动物中心，许可证号：SCXK（甘）2009-0004。

1.2方法

1.2.1热原试验依照2010版《中国兽药典》规定的热原检查方法[10]，经8次预测体温选取适合于热原检查法的健康家兔3只，且正常体温为38.0～39.6 ℃。在试验前停食 1 h，然后每隔30 min测量1次体温，测2次，2次体温差不得超过0.2 ℃，以此2次体温的平均值为正常体温；在测正常体温后15 min以内，将温热至38 ℃的新型复方氟苯尼考注射液，自耳缘静脉按推荐剂量1 mL/7.5 kg注射给药，然后每隔 30 min 测量1次体温，共测6次。以6次体温中，最高的一次减去正常体温，即为该兔体温的升高温度（℃），计算3只家兔体温升高总和，并按照兽药典的热原检查判定标准，判定供试品是否符合热原检查规定。

1.2.2LD50测定按照改良寇氏法[12]设计试验。预试验：每组4只昆明小鼠，雌雄各半，测得新型复方氟苯尼考注射液的绝对致死量（LD100）和最大耐受量（LD0）。正式试验：分5组，每组10只小鼠，雌雄各半，腹腔注射，给药后观察 7 d，记录小鼠死亡数量，并观察注射药物后小鼠的症状和死亡小鼠的病理变化。用改良寇氏法计算LD50及其95%可信限。

1.2.3皮肤刺激试验[13]取健康家兔4只，雌雄各半，采用同体左右对比法，设溶剂对照。试验前24 h对背部进行剪毛处理，剪毛范围左右各 3 cm×3 cm，左侧涂抹药物，右侧涂抹空白溶剂，均为0.5 mL；然后用2层纱布（2.5 cm×2.5 cm）和1层玻璃纸覆盖，再用无刺激性胶布加以固定；贴敷4 h时，用温热至38 ℃的温水清洁给药部位，在去除药物后0.5、1.0、24.0、48.0、72.0 h，分别肉眼观察并记录涂敷部位有无红斑和水肿情况，按照皮肤刺激反应评分标准（表1）进行评分，总分值为8分，然后再按皮肤刺激强度评价标准（表2）进行评价。

表1皮肤刺激反应与评分标准

红斑1分值1水肿1分值无红斑101无水肿10轻度红斑（勉强可见）111轻度水肿（勉强可见）11中度红斑（明显可见）121中度水肿（明显隆起）12重度红斑

13

1重度水肿（皮肤隆起1 mm，轮廓清楚）13

紫红色红斑到轻度焦痂形成14

1严重水肿（皮肤隆起 1 mm 以上并有扩大）14

摘要：按照2010版《中国兽药典》和《兽药及添加剂安全性毒理学评价程序》的要求，对新型复方氟苯尼考注射液进行安全性评价，相应进行了热原检查、注射途径LD50测定、皮肤刺激试验和肌肉刺激试验等。结果表明：新型复方氟苯尼考注射液制剂热原检查符合药典规定；腹腔注射对小鼠的LD50为1 888.73 mg/kg，95%可信限为1 575.90～2 263.65 mg/kg；该注射液对皮肤有轻度刺激性；对股四头肌有轻微刺激，但在给药后7 d可以完全恢复。说明新型复方氟苯尼考注射液安全可靠，可应用于兽医临床。

关键词：新型复方氟苯尼考注射液；热原检查；LD50；皮肤刺激；肌肉刺激；安全性评价

中图分类号： S859.79+6文献标志码： A文章编号：1002-1302（2014）01-0174-03

收稿日期：2013-05-09

基金项目：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项（编号：1610322012005）；国家公益性行业（农业）科研专项（编号：201303038-4）。

作者简介：程培培（1987—），女，河南洛阳人，硕士，主要从事药物筛选研究。E-mail：chengpeipei1117@163.com。

通信作者：李剑勇（1971—），男，甘肃秦安人，博士，研究员，主要从事新兽药的研究与开发工作。Tel：（0931）2115290；E-mail：lijy1971@163.com。猪、牛呼吸系统感染性疾病的发病率高，病原微生物多种多样，血清型复杂，疫苗的交叉保护力较差，在这类疾病治疗过程中，药物防治发挥着巨大的作用[1-3]。

新型复方氟苯尼考注射液是由抗菌药物氟苯尼考和抗炎药物氟尼辛葡甲胺以及辅料等成分组成，用于皮下注射和肌肉注射。氟苯尼考是动物专用的广谱抗生素，克服了氯霉素引起骨髓抑制和再生障碍性贫血的缺点，且抗菌活性优于同类的氯霉素、甲砜霉素等，广泛应用于畜禽和水产细菌性疾病[4]，如由多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida）、溶血性巴氏杆菌（Pasteurella hemolytica）、昏睡嗜血杆菌（Haemophilus somnus）等引起的牛呼吸系统疾病、由猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopneumoniae）、多杀性巴氏杆菌、胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropneumoniae）、支气管败血波氏杆菌（Bordetella bronchiseptica）、肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae）等引起的猪呼吸系统疾病、禽大肠杆菌病和霍乱等防控。氟尼辛葡甲胺是一种非选择性的非甾体抗炎药[5]，通过抑制花生四烯酸环氧合酶途径，阻止前列腺素的合成，起到抗炎、镇痛、退热的作用，该药已被《英国兽药典》2001版、《美国药典》2002版[6]和《中国兽药典》2010版收录，被批准用于肉牛、奶牛、马的内毒素血症引起的炎症，控制呼吸系统疾病伴随的发热症状和急性牛乳房炎[7]。已有的相关研究表明，氟尼辛葡甲胺和抗菌药物联用治疗牛、猪呼吸系统疾病效果良好[8-9]。

依据抗菌、抗炎的原则和长效、缓释的目的，研制出新型复方氟苯尼考注射液，用于治疗猪、牛呼吸系统原发或继发细菌和支原体感染，具有很好的抗菌和抗炎作用。为了将复方氟苯尼考注射液制剂合理、安全的应用于临床并提供理论依据，依据2010版《中国兽药典（一部）》对注射剂要求[10]和《兽药及添加剂安全性毒理学评价程序》[11]对该注射液进行了安全性评价，包括热原检查、注射途径LD50测定、皮肤刺激试验和肌肉刺激试验。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1药品新型复方氟苯尼考注射液（批号：F20120730，氟苯尼考含量为30%，中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所）；空白溶剂（批号：20120913，中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所）；0.9%氯化钠注射液（批号：1210032B，安徽双鹤药业有限责任公司）。

1.1.2试验动物日本大耳白兔，雌雄各半，体重2.0～3.0 kg，购自中国农业科学院兰州兽医研究所，许可证号：SCXK（甘）2012-0001；昆明小鼠，雌雄各半，体重18～22 g，购自兰州大学实验动物中心，许可证号：SCXK（甘）2009-0004。

1.2方法

1.2.1热原试验依照2010版《中国兽药典》规定的热原检查方法[10]，经8次预测体温选取适合于热原检查法的健康家兔3只，且正常体温为38.0～39.6 ℃。在试验前停食 1 h，然后每隔30 min测量1次体温，测2次，2次体温差不得超过0.2 ℃，以此2次体温的平均值为正常体温；在测正常体温后15 min以内，将温热至38 ℃的新型复方氟苯尼考注射液，自耳缘静脉按推荐剂量1 mL/7.5 kg注射给药，然后每隔 30 min 测量1次体温，共测6次。以6次体温中，最高的一次减去正常体温，即为该兔体温的升高温度（℃），计算3只家兔体温升高总和，并按照兽药典的热原检查判定标准，判定供试品是否符合热原检查规定。

1.2.2LD50测定按照改良寇氏法[12]设计试验。预试验：每组4只昆明小鼠，雌雄各半，测得新型复方氟苯尼考注射液的绝对致死量（LD100）和最大耐受量（LD0）。正式试验：分5组，每组10只小鼠，雌雄各半，腹腔注射，给药后观察 7 d，记录小鼠死亡数量，并观察注射药物后小鼠的症状和死亡小鼠的病理变化。用改良寇氏法计算LD50及其95%可信限。

1.2.3皮肤刺激试验[13]取健康家兔4只，雌雄各半，采用同体左右对比法，设溶剂对照。试验前24 h对背部进行剪毛处理，剪毛范围左右各 3 cm×3 cm，左侧涂抹药物，右侧涂抹空白溶剂，均为0.5 mL；然后用2层纱布（2.5 cm×2.5 cm）和1层玻璃纸覆盖，再用无刺激性胶布加以固定；贴敷4 h时，用温热至38 ℃的温水清洁给药部位，在去除药物后0.5、1.0、24.0、48.0、72.0 h，分别肉眼观察并记录涂敷部位有无红斑和水肿情况，按照皮肤刺激反应评分标准（表1）进行评分，总分值为8分，然后再按皮肤刺激强度评价标准（表2）进行评价。

表1皮肤刺激反应与评分标准

红斑1分值1水肿1分值无红斑101无水肿10轻度红斑（勉强可见）111轻度水肿（勉强可见）11中度红斑（明显可见）121中度水肿（明显隆起）12重度红斑

13

1重度水肿（皮肤隆起1 mm，轮廓清楚）13

紫红色红斑到轻度焦痂形成14

1严重水肿（皮肤隆起 1 mm 以上并有扩大）14

摘要：按照2010版《中国兽药典》和《兽药及添加剂安全性毒理学评价程序》的要求，对新型复方氟苯尼考注射液进行安全性评价，相应进行了热原检查、注射途径LD50测定、皮肤刺激试验和肌肉刺激试验等。结果表明：新型复方氟苯尼考注射液制剂热原检查符合药典规定；腹腔注射对小鼠的LD50为1 888.73 mg/kg，95%可信限为1 575.90～2 263.65 mg/kg；该注射液对皮肤有轻度刺激性；对股四头肌有轻微刺激，但在给药后7 d可以完全恢复。说明新型复方氟苯尼考注射液安全可靠，可应用于兽医临床。

关键词：新型复方氟苯尼考注射液；热原检查；LD50；皮肤刺激；肌肉刺激；安全性评价

中图分类号： S859.79+6文献标志码： A文章编号：1002-1302（2014）01-0174-03

收稿日期：2013-05-09

基金项目：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项（编号：1610322012005）；国家公益性行业（农业）科研专项（编号：201303038-4）。

作者简介：程培培（1987—），女，河南洛阳人，硕士，主要从事药物筛选研究。E-mail：chengpeipei1117@163.com。

通信作者：李剑勇（1971—），男，甘肃秦安人，博士，研究员，主要从事新兽药的研究与开发工作。Tel：（0931）2115290；E-mail：lijy1971@163.com。猪、牛呼吸系统感染性疾病的发病率高，病原微生物多种多样，血清型复杂，疫苗的交叉保护力较差，在这类疾病治疗过程中，药物防治发挥着巨大的作用[1-3]。

新型复方氟苯尼考注射液是由抗菌药物氟苯尼考和抗炎药物氟尼辛葡甲胺以及辅料等成分组成，用于皮下注射和肌肉注射。氟苯尼考是动物专用的广谱抗生素，克服了氯霉素引起骨髓抑制和再生障碍性贫血的缺点，且抗菌活性优于同类的氯霉素、甲砜霉素等，广泛应用于畜禽和水产细菌性疾病[4]，如由多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida）、溶血性巴氏杆菌（Pasteurella hemolytica）、昏睡嗜血杆菌（Haemophilus somnus）等引起的牛呼吸系统疾病、由猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopneumoniae）、多杀性巴氏杆菌、胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropneumoniae）、支气管败血波氏杆菌（Bordetella bronchiseptica）、肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae）等引起的猪呼吸系统疾病、禽大肠杆菌病和霍乱等防控。氟尼辛葡甲胺是一种非选择性的非甾体抗炎药[5]，通过抑制花生四烯酸环氧合酶途径，阻止前列腺素的合成，起到抗炎、镇痛、退热的作用，该药已被《英国兽药典》2001版、《美国药典》2002版[6]和《中国兽药典》2010版收录，被批准用于肉牛、奶牛、马的内毒素血症引起的炎症，控制呼吸系统疾病伴随的发热症状和急性牛乳房炎[7]。已有的相关研究表明，氟尼辛葡甲胺和抗菌药物联用治疗牛、猪呼吸系统疾病效果良好[8-9]。

依据抗菌、抗炎的原则和长效、缓释的目的，研制出新型复方氟苯尼考注射液，用于治疗猪、牛呼吸系统原发或继发细菌和支原体感染，具有很好的抗菌和抗炎作用。为了将复方氟苯尼考注射液制剂合理、安全的应用于临床并提供理论依据，依据2010版《中国兽药典（一部）》对注射剂要求[10]和《兽药及添加剂安全性毒理学评价程序》[11]对该注射液进行了安全性评价，包括热原检查、注射途径LD50测定、皮肤刺激试验和肌肉刺激试验。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1药品新型复方氟苯尼考注射液（批号：F20120730，氟苯尼考含量为30%，中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所）；空白溶剂（批号：20120913，中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所）；0.9%氯化钠注射液（批号：1210032B，安徽双鹤药业有限责任公司）。

1.1.2试验动物日本大耳白兔，雌雄各半，体重2.0～3.0 kg，购自中国农业科学院兰州兽医研究所，许可证号：SCXK（甘）2012-0001；昆明小鼠，雌雄各半，体重18～22 g，购自兰州大学实验动物中心，许可证号：SCXK（甘）2009-0004。

1.2方法

1.2.1热原试验依照2010版《中国兽药典》规定的热原检查方法[10]，经8次预测体温选取适合于热原检查法的健康家兔3只，且正常体温为38.0～39.6 ℃。在试验前停食 1 h，然后每隔30 min测量1次体温，测2次，2次体温差不得超过0.2 ℃，以此2次体温的平均值为正常体温；在测正常体温后15 min以内，将温热至38 ℃的新型复方氟苯尼考注射液，自耳缘静脉按推荐剂量1 mL/7.5 kg注射给药，然后每隔 30 min 测量1次体温，共测6次。以6次体温中，最高的一次减去正常体温，即为该兔体温的升高温度（℃），计算3只家兔体温升高总和，并按照兽药典的热原检查判定标准，判定供试品是否符合热原检查规定。

1.2.2LD50测定按照改良寇氏法[12]设计试验。预试验：每组4只昆明小鼠，雌雄各半，测得新型复方氟苯尼考注射液的绝对致死量（LD100）和最大耐受量（LD0）。正式试验：分5组，每组10只小鼠，雌雄各半，腹腔注射，给药后观察 7 d，记录小鼠死亡数量，并观察注射药物后小鼠的症状和死亡小鼠的病理变化。用改良寇氏法计算LD50及其95%可信限。

1.2.3皮肤刺激试验[13]取健康家兔4只，雌雄各半，采用同体左右对比法，设溶剂对照。试验前24 h对背部进行剪毛处理，剪毛范围左右各 3 cm×3 cm，左侧涂抹药物，右侧涂抹空白溶剂，均为0.5 mL；然后用2层纱布（2.5 cm×2.5 cm）和1层玻璃纸覆盖，再用无刺激性胶布加以固定；贴敷4 h时，用温热至38 ℃的温水清洁给药部位，在去除药物后0.5、1.0、24.0、48.0、72.0 h，分别肉眼观察并记录涂敷部位有无红斑和水肿情况，按照皮肤刺激反应评分标准（表1）进行评分，总分值为8分，然后再按皮肤刺激强度评价标准（表2）进行评价。

表1皮肤刺激反应与评分标准

红斑1分值1水肿1分值无红斑101无水肿10轻度红斑（勉强可见）111轻度水肿（勉强可见）11中度红斑（明显可见）121中度水肿（明显隆起）12重度红斑

13

1重度水肿（皮肤隆起1 mm，轮廓清楚）13

紫红色红斑到轻度焦痂形成14

1严重水肿（皮肤隆起 1 mm 以上并有扩大）14