小花棘豆对家兔血清蛋白的影响

王帅　胡建军　陈根元　张玲　马春晖

摘要：探讨了小花棘豆对家兔血清蛋白含量的影响，进一步揭示了小花棘豆对家兔的毒性作用机理。结果表明，各试验组家兔的血清总蛋白、α球蛋白含量无明显变化（P>0.05）；血清球蛋白、β球蛋白含量均显著高于对照（P<005）；血清γ球蛋白含量呈先升高后降低趋势；血清白蛋白含量低于对照（P<0.05），试验组家兔血清白蛋白与球蛋白含量的比值（A/G）在试验期间均呈降低的趋势；小花棘豆对试验家兔的肝脏具有损害作用。

关键词：小花棘豆；血清蛋白；家兔

中图分类号：S859.87文献标志码： A文章编号：1002-1302（2014）01-0164-02

收稿日期：2013-05-08

基金项目：国家自然科学基金（编号：31160049）；新疆生产建设兵团博士基金专项（编号：2008JC07）；新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室开放课题（编号：HS201207）。

作者简介：王帅（1985—），男，山西长治人，硕士，实验师，主要从事牧草资源开发利用研究。E-mail：wangshuaidky@126.com。

通信作者：马春晖，教授，主要从事牧草生产与加工研究。Tel：（0993）2055868；E-mail：chunhuima@126.com。小花棘豆为豆科棘豆属植物，属于疯草类有毒植物，广泛分布于新疆和田、阿克苏等地区，苦马豆素是其主要毒性成分。在牧草缺乏的冬季和初春，当家畜大量采食小花棘豆，就会中毒甚至死亡，这对畜牧业生产造成了严重危害[1]。国内外学者在对甘肃棘豆[2-3]、黄花棘豆[4]、冰川棘豆[5]等疯草的毒性试验研究中，通过非特异性酯酶染色、E-玫瑰花环试验以及血清蛋白电泳试验证实，中毒动物的细胞免疫功能降低；但也有研究表明，在低于中毒剂量的情况下，苦马豆素不仅有抗肿瘤效果，而且能增强机体的免疫功能[6-7]。小花棘豆在新疆南疆地区分布较广，在塔里木河中下游天然草地有分布，盖度最高达95%[1]。目前对家畜小花棘豆中毒方面的研究较多，但未见小花棘豆对动物血清蛋白影响的报道。本研究探讨小花棘豆中毒对家兔细胞免疫功能的影响，以期为全面认识小花棘豆的毒性作用，合理利用小花棘豆资源提供依据。

1材料与方法

1.1材料

小花棘豆于2012年8月采集于和田地区策勒县，由塔里木大学动物科学学院草业科学学科组鉴定。取植株地上部分阴干、粉碎，过20目筛后备用。

总蛋白和白蛋白试剂盒购自长春汇力生物技术公司；醋酸纤维素薄膜购自浙江黄岩曙光化工厂；其他试剂均为国产分析纯。

Carry 100型紫外-可见分光光度计，澳大利亚；BS124型精密电子天平，德国赛多力斯；Direct-Q3型超纯水系统，美国Millipore；DYY-6型电泳仪，北京六一仪器厂；DK-8D型电热恒温水槽，上海精宏实验设备有限公司。

1.2试验动物

4～5月龄家兔24只，雌雄各半，体重（2.0±0.1） kg，购自塔里木大学动物科学学院实验站。家兔购回后内服左旋咪唑 3 mg/kg 体重驱虫，临床观察2周，确认临床健康后将其随机分为对照组、试验Ⅰ组、试验Ⅱ组、试验Ⅲ组，每组6只，分笼饲养。对照组饲喂青干草和少量精料，试验Ⅰ组、试验Ⅱ组、试验Ⅲ组分别按照5、10、20 g/kg体重的剂量饲喂小花棘豆，待采食完毕后再添加青干草和精料，自由饮水。

1.3测定指标

试验前后每隔7 d空腹耳缘静脉采血1次，共采血 11次，迅速分离血清，检测血清总蛋白、白蛋白、球蛋白含量，并利用醋酸纤维薄膜电泳法进行血清蛋白电泳分析，计算总蛋白中白蛋白、α球蛋白、β球蛋白、γ球蛋白所占百分率及各自含量，计算白蛋白（A）与球蛋白（G）含量的比值（A/G）。

1.4数据分析

使用SPSS 11.5软件的One-Way ANOVA进行单因素方差分析及Duncans多重比较，检验误差为5%、1%。

2结果与分析

2.1家兔血清总蛋白、白蛋白、球蛋白含量的变化

所有攻毒家兔在试验期内血清总蛋白含量均与对照组差异不显著（P>0.05），但攻毒家兔血清白蛋白含量呈下降趋势，球蛋白含量呈上升趋势（图1、图2、图3）。其中试验Ⅱ组、试验Ⅲ组在试验21 d时血清白蛋白含量显著低于对照组（P<0.05），试验Ⅰ组在28 d时血清白蛋白含量显著低于对照组（P<0.05）。从试验49 d起攻毒家兔血清白蛋白含量趋于稳定。试验Ⅱ组、试验Ⅲ组血清球蛋白含量在 28 d 时显著高于对照组（P<0.05），试验Ⅰ组血清白蛋白含量在42 d时显著高于对照组（P<0.05）。

2.2家兔血清α球蛋白、β球蛋白、γ球蛋白含量的变化

试验期内攻毒家兔血清α球蛋白含量与对照组差异不显著（P>0.05）， 而β球蛋白含量呈升高趋势，γ球蛋白含量呈先上升后降低的趋势（图4、图5、图6）。试验 21 d 试验Ⅲ组血清β球蛋白含量显著高于对照组（P<005），35d时试

验Ⅰ组、试验Ⅱ组血清β球蛋白含量均显著高于对照组（P<0.05）。所有攻毒家兔血清γ球蛋白含量在14 d时均显著高于对照组（P<0.05），其中试验Ⅲ组、试验Ⅱ组血清γ球蛋白含量在35 d时开始下降，试验Ⅲ组血清γ球蛋白含量在70 d时显著低于对照组（P<0.05）；试验Ⅰ组血清γ球蛋白含量从49 d起开始降低，并在第63天时低于对照组。

2.3家兔血清白蛋白与球蛋白比值的变化

由图7可见，3个试验组血清白蛋白与球蛋白比值（A/G）均呈下降趋势。其中35 d时试验Ⅲ组A/G值显著低于对照组（P<0.05），49d时试验Ⅱ组A/G值显著低于对照

3结论与讨论

本研究通过小花棘豆对家兔的攻毒试验，发现小花棘豆可导致家兔血清白蛋白含量显著下降，β球蛋白含量显著升高，γ球蛋白含量呈先升高后降低的趋势，说明小花棘豆中的有毒成分可导致家兔肝损伤。

肝脏是合成蛋白质的重要器官，血液中的白蛋白、α球蛋白、β球蛋白等均由肝脏合成。如果发生肝脏损伤，蛋白质合成就有可能出现障碍，从而导致血液中蛋白含量的变化。目前血液中蛋白含量的变化是临床判断肝脏是否病变的重要指标[8]。 其中β球蛋白含量的升高与自身免疫性疾病、胆汁郁积性肝病和慢性肝病有关；γ球蛋白几乎都是免疫性抗体，与动物机体的免疫能力密切相关；白蛋白含量降低多见于营养不良、蛋白吸收合成障碍、肝功能疾病、肾病综合征等因素。本研究表明，攻毒家兔血清总蛋白含量在试验期内无明显变化，而白蛋白含量明显下降；攻毒家兔的α球蛋白与对照组

差异不显著（P>0.05），β球蛋白和试验前期γ球蛋白均出现升高趋势，与莫重辉等关于家兔甘肃棘豆中毒的报道[3]一致，可能是因为家兔小花棘豆中毒导致肝脏受到损伤，从而引起白蛋白合成功能的障碍。试验后期攻毒家兔血清γ球蛋白含量开始下降，说明动物体液免疫功能降低，淋巴结、脾脏及骨髓的网状内皮系统开始受到损害。本研究中试验家兔球蛋白含量的变化与耿果霞等[5]、顾百群等[9]的报道有明显差异，可能与攻毒草类差异、受试动物种类不同及肝脏受损程度有关，有待于进一步研究。

正常情况下，白蛋白与球蛋白的比值应在一定范围内波动。白蛋白由肝细胞合成，当肝脏严重受损时白蛋白合成量减少，其降低程度与肝脏损伤程度呈正相关[10]。球蛋白由机体免疫器官合成，当外来毒素侵入体内时，球蛋白合成量增加，造成A/G值下降。本研究中攻毒家兔血清A/G值下降明显，且与小花棘豆的饲喂量呈明显的时间-剂量效应关系，说明小花棘豆的毒性成分可导致家兔的肝、肾损伤，这与莫重辉等[3]、耿果霞等[5]的报道一致。

参考文献：

[1]王帅，陈根元，胡建军，等. 南疆地区小花棘豆化学成分的初步研究[J]. 江苏农业科学，2011，39（2）：453-454.

[2]Van Kampen K P，James L F. Pathology of locoweed （Astragalus lentiginosus） poisoning in sheep；sequential development of cytoplasmic vacuolation in tissues[J]. Veterinary Pathology，1970，7（6）：503-508.

[3]莫重辉，沈明华，赵宝玉. 甘肃棘豆对家兔血清蛋白含量动态变化的影响[J]. 中国兽医科学，2010，40（12）：1280-1284.

[4]张生福，何宝祥，李新民. 黄花棘豆对小白鼠某些免疫功能的影响[J]. 青海畜牧兽医杂志，1991（1）：15-16.

[5]耿果霞，李勤凡，王建华. 山羊冰川棘豆中毒的血清蛋白分析[J]. 西北农业大学学报，1999，27（5）：71-74.

[6]张志敏，王建华，赵兴华，等. 苦马豆素对小鼠腹腔巨噬细胞免疫功能的影响[J]. 中国农业科学，2008，41（10）：3422-3428.

[7]张志敏，王建华，赵兴华，等. 苦马豆素对小鼠细胞免疫功能的影响[J]. 西北农林科技大学学报：自然科学版，2008，36（2）：61-66.

[8]刘立昌，张磊，邓毅峰，等. 愈肝片对D-氨基半乳糖小鼠急性肝损伤的保护作用[J]. 广州中医药大学学报，2003，20（1）：57-58.

[9]顾百群，段得贤，崔中林，等. 山羊甘肃棘豆中毒临床病理学研究[J]. 西北农林科技大学学报：自然科学版，1990，18（3）：62-67.

[10]刘宗平.兽医临床症状鉴别诊断学[M]. 北京：中国农业出版社，2008.焦凤超，李迎晓，陈宏智，等. 河南省信阳市鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定和血清型分析[J]. 江苏农业科学，2014，42（1）：166-167.

本研究通过小花棘豆对家兔的攻毒试验，发现小花棘豆可导致家兔血清白蛋白含量显著下降，β球蛋白含量显著升高，γ球蛋白含量呈先升高后降低的趋势，说明小花棘豆中的有毒成分可导致家兔肝损伤。

肝脏是合成蛋白质的重要器官，血液中的白蛋白、α球蛋白、β球蛋白等均由肝脏合成。如果发生肝脏损伤，蛋白质合成就有可能出现障碍，从而导致血液中蛋白含量的变化。目前血液中蛋白含量的变化是临床判断肝脏是否病变的重要指标[8]。 其中β球蛋白含量的升高与自身免疫性疾病、胆汁郁积性肝病和慢性肝病有关；γ球蛋白几乎都是免疫性抗体，与动物机体的免疫能力密切相关；白蛋白含量降低多见于营养不良、蛋白吸收合成障碍、肝功能疾病、肾病综合征等因素。本研究表明，攻毒家兔血清总蛋白含量在试验期内无明显变化，而白蛋白含量明显下降；攻毒家兔的α球蛋白与对照组

差异不显著（P>0.05），β球蛋白和试验前期γ球蛋白均出现升高趋势，与莫重辉等关于家兔甘肃棘豆中毒的报道[3]一致，可能是因为家兔小花棘豆中毒导致肝脏受到损伤，从而引起白蛋白合成功能的障碍。试验后期攻毒家兔血清γ球蛋白含量开始下降，说明动物体液免疫功能降低，淋巴结、脾脏及骨髓的网状内皮系统开始受到损害。本研究中试验家兔球蛋白含量的变化与耿果霞等[5]、顾百群等[9]的报道有明显差异，可能与攻毒草类差异、受试动物种类不同及肝脏受损程度有关，有待于进一步研究。

正常情况下，白蛋白与球蛋白的比值应在一定范围内波动。白蛋白由肝细胞合成，当肝脏严重受损时白蛋白合成量减少，其降低程度与肝脏损伤程度呈正相关[10]。球蛋白由机体免疫器官合成，当外来毒素侵入体内时，球蛋白合成量增加，造成A/G值下降。本研究中攻毒家兔血清A/G值下降明显，且与小花棘豆的饲喂量呈明显的时间-剂量效应关系，说明小花棘豆的毒性成分可导致家兔的肝、肾损伤，这与莫重辉等[3]、耿果霞等[5]的报道一致。

参考文献：

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[6]张志敏，王建华，赵兴华，等. 苦马豆素对小鼠腹腔巨噬细胞免疫功能的影响[J]. 中国农业科学，2008，41（10）：3422-3428.

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[10]刘宗平.兽医临床症状鉴别诊断学[M]. 北京：中国农业出版社，2008.焦凤超，李迎晓，陈宏智，等. 河南省信阳市鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定和血清型分析[J]. 江苏农业科学，2014，42（1）：166-167.

本研究通过小花棘豆对家兔的攻毒试验，发现小花棘豆可导致家兔血清白蛋白含量显著下降，β球蛋白含量显著升高，γ球蛋白含量呈先升高后降低的趋势，说明小花棘豆中的有毒成分可导致家兔肝损伤。

肝脏是合成蛋白质的重要器官，血液中的白蛋白、α球蛋白、β球蛋白等均由肝脏合成。如果发生肝脏损伤，蛋白质合成就有可能出现障碍，从而导致血液中蛋白含量的变化。目前血液中蛋白含量的变化是临床判断肝脏是否病变的重要指标[8]。 其中β球蛋白含量的升高与自身免疫性疾病、胆汁郁积性肝病和慢性肝病有关；γ球蛋白几乎都是免疫性抗体，与动物机体的免疫能力密切相关；白蛋白含量降低多见于营养不良、蛋白吸收合成障碍、肝功能疾病、肾病综合征等因素。本研究表明，攻毒家兔血清总蛋白含量在试验期内无明显变化，而白蛋白含量明显下降；攻毒家兔的α球蛋白与对照组

差异不显著（P>0.05），β球蛋白和试验前期γ球蛋白均出现升高趋势，与莫重辉等关于家兔甘肃棘豆中毒的报道[3]一致，可能是因为家兔小花棘豆中毒导致肝脏受到损伤，从而引起白蛋白合成功能的障碍。试验后期攻毒家兔血清γ球蛋白含量开始下降，说明动物体液免疫功能降低，淋巴结、脾脏及骨髓的网状内皮系统开始受到损害。本研究中试验家兔球蛋白含量的变化与耿果霞等[5]、顾百群等[9]的报道有明显差异，可能与攻毒草类差异、受试动物种类不同及肝脏受损程度有关，有待于进一步研究。

正常情况下，白蛋白与球蛋白的比值应在一定范围内波动。白蛋白由肝细胞合成，当肝脏严重受损时白蛋白合成量减少，其降低程度与肝脏损伤程度呈正相关[10]。球蛋白由机体免疫器官合成，当外来毒素侵入体内时，球蛋白合成量增加，造成A/G值下降。本研究中攻毒家兔血清A/G值下降明显，且与小花棘豆的饲喂量呈明显的时间-剂量效应关系，说明小花棘豆的毒性成分可导致家兔的肝、肾损伤，这与莫重辉等[3]、耿果霞等[5]的报道一致。

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[4]张生福，何宝祥，李新民. 黄花棘豆对小白鼠某些免疫功能的影响[J]. 青海畜牧兽医杂志，1991（1）：15-16.

[5]耿果霞，李勤凡，王建华. 山羊冰川棘豆中毒的血清蛋白分析[J]. 西北农业大学学报，1999，27（5）：71-74.

[6]张志敏，王建华，赵兴华，等. 苦马豆素对小鼠腹腔巨噬细胞免疫功能的影响[J]. 中国农业科学，2008，41（10）：3422-3428.

[7]张志敏，王建华，赵兴华，等. 苦马豆素对小鼠细胞免疫功能的影响[J]. 西北农林科技大学学报：自然科学版，2008，36（2）：61-66.

[8]刘立昌，张磊，邓毅峰，等. 愈肝片对D-氨基半乳糖小鼠急性肝损伤的保护作用[J]. 广州中医药大学学报，2003，20（1）：57-58.

[9]顾百群，段得贤，崔中林，等. 山羊甘肃棘豆中毒临床病理学研究[J]. 西北农林科技大学学报：自然科学版，1990，18（3）：62-67.

[10]刘宗平.兽医临床症状鉴别诊断学[M]. 北京：中国农业出版社，2008.焦凤超，李迎晓，陈宏智，等. 河南省信阳市鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定和血清型分析[J]. 江苏农业科学，2014，42（1）：166-167.