食用菌包埋菌种低温保藏期间的试验研究

李凤美，周永斌，罗莹，刘连强，陈晓明

（天津市林业果树研究所，天津300384）

食用菌包埋菌种低温保藏期间的试验研究

李凤美，周永斌，罗莹，刘连强，陈晓明

（天津市林业果树研究所，天津300384）

对十种食用菌包埋菌种进行保藏环境和保藏时间的试验研究，结果表明：包埋菌种在4℃环境下保藏时间在1年以内，在-25℃低温下保藏时间在3年以上。本试验对扩大食用菌液体菌种的应用范围和应用时间具有重要意义。

食用菌；包埋；保藏

食用菌包埋菌种是指将食用菌液体菌种采用包埋法固定在凝胶网格结构中或半透性聚合薄膜内[1]，形成便于保藏和运输的颗粒食用菌种子，该方法能够克服液体菌种不耐贮藏，不易包装、运输等缺点，从而延长液体菌种的存贮时间和应用范围。

本实验采用海藻酸钠对不同食用菌液体菌种进行包埋，采用不同的保藏温度进行存放，定期取出进行活性试验，对液体菌种包埋颗粒的存储环境和存储时间进行试验探讨，实验对于扩大液体菌种的应用范围具有深远影响[2]。

1 材料

1.1 供试菌株

猴头菇（Hericium erinaceus Pers.）、平菇（Pleurotus ostreatus.）、香菇（Lentinus edodes）、木耳（Fructificatio Auriculariae Auriculae）、灵芝（Ganoderma lucidum）、双孢菇（Agaricusbrunnescens）、杏鲍菇（Pleurotuseryngii）、白灵菇（Pleurotusnebrodensis）、金针菇（Flammulina velutiper Sing）、茶树菇（Agrocybe chaxingu）均由天津市林业果树研究所食用菌研究中心保藏。

1.2 培养基

母种液体培养基：马铃薯去皮200 g（加水煮沸20min，过滤取汁）、葡萄糖20 g、磷酸二氢钾1 g、硫酸镁0.5 g、10mg、水1 000mL，pH 4～6。

1.3 试剂

海藻酸钠、无水氯化钙、磷酸二氢钾、硫酸镁、葡萄糖：均为分析纯，天津市北方天医化学试剂厂。

2 方法

2.1 包埋菌种的制备方法

配制浓度2%的氯化钙溶液，灭菌后待用。制备含6%的海藻酸钠的综合马铃薯培养基溶液，105℃灭菌15min后冷却到40℃，加入适量菌丝体细胞悬浮液，用移液枪吸取上述混合液慢慢滴入氯化钙溶液中，不断搅拌，使之形成球形颗粒。静置3 h～4 h完全硬化后弃去氯化钙溶液，用无菌水洗净制得海藻酸钠包埋小珠。

2.2 菌种保藏方法

将包埋后的菌种球分装于离心管中密封，分别置于4℃和-25℃的冰箱中保藏，分别存放3、6、12、24、36个月后取出进行活化培养。

2.3 菌种的复苏与培养

将低温存储的菌株取出后立即置于37℃水浴中，快速解冻，融化的菌丝直接移接到斜面上，25℃培养，观察菌丝生长情况。

2.3.1 菌种成活率的测定

将保存不同时间的菌种接到马铃薯培养基中，每株菌株设置20个重复，25℃培养7 d～10 d，观察成活情况，计算成活率。

2.3.2 菌丝萌发时间的测定

将保存不同时间的菌种接到马铃薯培养基中，每株菌株设置20个重复，25℃培养，观察记录菌丝萌发时间，计算菌丝平均萌发时间。

2.3.3 菌丝长速长势的测定

将保存不同时间的菌种接到马铃薯培养基中，每株菌株设置20个重复，25℃培养，以菌丝体在斜面上的直线生长距离及长势的强弱作为生长量指标，记录菌丝生长速度、菌丝长势[3]。

3 结果与分析

3.1 包埋菌种不同保藏方式的试验

将不同供试食用菌液体菌丝体细胞包埋后形成的包埋菌种球，如图1。

图1 食用菌包埋菌种Fig.1 Entrapped spawnsof edible fungi

这种菌种相比液体菌种保存时间更长，采用真空包装袋进行包装后，运输更方便。后续试验主要对该包埋菌种进行保藏环境及时间的试验研究。

各食用菌包埋菌种保藏不同时间后活化生长情况如表1。

从表1可以看出，将包埋后的菌种球置于4℃条件保藏，保藏期到12个月时，各菌株成活率都在96%以上，保藏期到24个月时，菌种球成活率显著降低至55%以下。分析原因可能是，包埋菌种球表面包裹的基质海藻酸钠长时间存放后会发生失水干缩，造成基质内的菌丝体逐渐脱水死亡，因此采用4℃环境保藏包埋菌种，适用于菌种的短期存放，不适合中长期保藏。

表1 各食用菌包埋菌种保藏不同时间后活化生长情况Table1 Thegrow th condition of edible fungi’sentrapped spawns which preserved different time

续表1各食用菌包埋菌种保藏不同时间后活化生长情况Continue table1 Thegrow th condition ofedible fungi’s entrapped spawnswhich preserved different time

将包埋后的菌种球置于-25℃的低温冰箱，各菌株的保藏时间都能达到36个月，且菌株复水活化后成活率都在95%以上，适合包埋菌种的中长期保藏和存放。

4 讨论

从试验可以看出，将不同食用菌包埋菌种置于-25℃的低温环境下，冰晶在形成时，由于菌丝体细胞交联在海藻酸钠的凝胶网格结构中，受到基质材料的保护，从而减少了低温冻结对细胞的伤害，海藻酸钠起到了冰冻保护剂的作用，保证菌种处于长时间的低温、干燥、缺氧的休眠状态，适合包埋菌种的中长期保藏。

[1]邓百万.海藻酸钠包埋保藏对食药用菌种活性的影响[J].安徽农业科学,2005,33(3):418-419

[2]戴建清.食用菌液体菌种研究现状及发展趋势[J].中国食用菌, 2012,31(5):1-3

[3]韩芹芹.液氮保藏平菇菌种的处理方法初探[J].食用菌学报,2010 (增刊):57-60

Experim ent Research on Entrapped Spawns of Edible Fungi during Low Tem perature Preserved Period

LIFeng-mei，ZHOUYong-bin，LUOYing，LIU Lian-qiang，CHENXiao-ming
（Research Institute of Forestry and Fruit Tree in Tianjin，Tianjin 300384，China）

In this paper，the storage periods and storage conditions of ten kinds of entrapped spawns of edible fungiwere tested and studied.The resultsshowed that：the storage periodsofentrapped spawns in 4 temperaturewas1 year.In-25℃，the entrapped spawns can storage over3 years.Thisstudywas important to liquid spawns，applications field and time.

edible fungi；entrapment；preservation

2013-09-29

10.3969/j.issn.1005-6521.2014.23.034

天津市农业科学院科研项目（11005）

李凤美（1981—），女（汉），助理研究员，硕士，主要从事食用菌栽培与加工的研究和开发。