紫草素在人表皮共培养体系中对酪氨酸酶活性及黑素生成的影响

解士海 黄荣云

紫草素在人表皮共培养体系中对酪氨酸酶活性及黑素生成的影响

解士海 黄荣云

目的 探讨紫草素在人表皮共培养体系中对酪氨酸酶活性及黑素生成的影响。方法在共培养体系中测定紫草素对酪氨酸酶活性和黑素生成的影响。结果0.25 μmol/L、0.5 μmol/L和1 μmol/L紫草素对于人表皮共培养细胞增殖无影响, 0.25 μmol/L、0.5 μmol/L和1 μmol/L紫草素对于表皮共培养细胞酪氨酸酶活性及黑素生成均有较强的剂量相关性激活作用, 0.5 μmol/L及 1 μmol/L紫草素与对照组相比差异具有统计学意义(P＜0.01)。结论紫草素对于人表皮共培养体系中酪氨酸酶活性和黑素生成有一定促进作用。

紫草素；表皮共培养体系；酪氨酸酶；黑素生成

色素紊乱性皮肤病一般比较难治, 其中白癜风更为不易治疗。我国中医中药治疗白癜风有数千年历史, 其中成方达几十种之多。紫草素高频率的出现在许多治疗白癜风的方剂中, 作者前期研究了紫草素在黑素瘤细胞中对黑素合成的影响［1］, 本研究进一步研究其在人表皮共培养体系中对酪氨酸酶活性及黑素生成的影响。

1 材料与方法

1. 1材料 紫草素购自英国FLUOROCHEM(分析纯) , 配制成1 mmol/L的贮存液, -80℃冰箱保存, 使用前稀释至工作浓度。8-MOP(甲氧沙林)溶于二甲基亚砜, 配成10 ml。

8-MOP、中性酶、胰酶、二甲基亚砜(DMSO)、四甲基偶氮唑蓝(MTT)均购自Sigma公司, 小牛血清购自杭州四季青公司；高通量多功能微板测试系统(德国BMG), 图像信号采集与分析系统(德国LEICA公司), 倒置显微镜, 无菌工作台等。

1. 2方法

1. 2. 1人表皮黑素细胞与角质形成细胞共培养体系的建立参考文献［2］。

1. 2. 2紫草素对人共培养细胞增殖的影响： MTT法检测。

1. 2. 3酪氨酸酶活性测定实验［3］参考文献, 根据MTT实验结果选取3个浓度(0.25 μmol/L、0.5 μmol/L、1 μmol/L)的紫草素, 测定其对酪氨酸酶活性的影响。

1. 2. 4黑素含量的测定［4］参考文献, 测定 0.25 μmol/L、0.5 μmol/L及1 μmol/L的紫草素对黑素生成的影响。

1. 3统计学方法 全部数据采用SPSS统计软件进行两因素方差分析检验, 计量资料以均数±标准差( x-±s)表示, 行t检验, P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2. 1紫草素对细胞增殖的影响 MTT实验结果显示紫草素浓度在(0.25～1 μmol/L)对人表皮共培养细胞无生长抑制作用。

2. 2紫草素对人表皮共培养体系中酪氨酸酶活性及黑素生成的影响 结果表明(见表1), 紫草素对于人表皮共培养体系中酪氨酸酶活性及黑素生成呈剂量依赖性激活作用, 紫草素组与对照组比较, 0.5 μmol/L及1 μmol/L紫草素对人表皮共培养体系中氨酸酶活性激活及黑素生成均差异具有统计学意义(P＜0.01), 8-MOP 为阳性对照, 1 μmol/L紫草素作用优于8-MOP(P＜0.01)。

表1 紫草素对共培养体系中酪氨酸酶活性和黑素生成的影响(n=3, x-±s, %)

3 讨论

中医中药的研究对于白癜风未来的治疗越来越重要, 作者系统研究了许多中药对于黑素生成的影响。紫草素不仅在黑素瘤细胞中可以剂量依赖地促进黑素生成, 本研究发现紫草素在模拟人体的共培养体系中同样具有促进黑素生成和酪氨酸酶活性的作用, 为进一步研究开发紫草素打下基础。

［1］ 解士海, 黄荣云, 赵卫华, 等.紫草素对人黑素瘤细胞增殖及黑素合成的影响.临床合理用药杂志, 2010, 3(9):10-12.

［2］ 解士海, 陈志强, 马鹏程, 等.人表皮黑素细胞与角质形成细胞共培养体外模型中黑素小体转运的观察.临床皮肤科杂志, 2006, 35(5):286-288.

［3］ Chen X, Oppenheim J, Howard OM, et al. Shikonin, a component of antiinflammatory Chinese herbal medicine, selectively blocks chemokine binding to CC chemokine receptor-1, Int Immunopharmacol, 2001(1): 229-236.

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