微波法提取狼把草总黄酮工艺研究

王亚红　祝波

摘要：以木犀草素、槲皮素、芹黄素为对照品，以总黄酮提取率为考察指标，采用单因素和正交试验优化狼把草总黄酮的微波提取工艺，确定乙醇体积分数75%、微波功率500 W、提取时间35 min、料液比1 g ∶20 mL为狼把草总黄酮最佳提取工艺条件；该条件下总黄酮平均提取率为0.507 2%。

关键词：狼把草；总黄酮；微波辅助提取；正交试验

中图分类号： R284.2 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2014）04-0235-02

收稿日期：2013-08-29

基金项目：吉林化工学院项目（编号：吉化院合字第2012第061号）。

作者简介：王亚红（1970—），女，吉林吉林人，硕士，教授，从事天然产物研究开发。E-mail：wangyahong99999@163.com。狼把草（Bidens tripartita L.）为菊科鬼针草属植物，别名鬼叉、接力草、针线包等，广泛分布于我国大部分地区。狼把草药用历史悠久，其药用价值在《本草拾遗》《本草纲目》等文献中多有记载[1]，主要功效为养阴益肺、清利湿热，主治气管炎、肺结核、咽喉炎及丹毒、癣疮等，其药用主要有效成分为黄酮化合物木犀草素、槲皮素、芹黄素及糖苷[2]。黄酮类化合物是一种生理活性物质，具有抗病毒、抗炎、抗癌防癌、降低血压、防止动脉粥样硬化和抗氧化、防衰老等作用[3-8]，该化合物已成为国内外医药界研究的热门话题，是一类具有广泛开发前景的天然药物[9]。本试验以总黄酮提取率为指标，采用单因素和正交试验，优选狼把草的微波提取工艺，为狼把草的综合利用及相关领域的深入研究提供依据。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1仪器与设备微波辅助萃取仪（MAS-Ⅱ，上海新仪器微波化学科技有限公司）；高效液相色谱仪（LC-20AT，日本岛津）；紫外检测器（SPD-20A，日本岛津）；色谱柱（Shim-pack VP-ODS，日本岛津）；超声波清洗器（AS3120，天津奥特赛恩斯）；旋转蒸发仪（RE-52A，上海亚荣生化仪器厂）；电子分析天平（FA2004N，上海精密科学仪器有限公司）。

1.1.2试验材料狼把草购自吉林市江城大药房，经鉴定为狼把草（Bidens tripartita L.）干燥全草；木犀草素、槲皮素、芹黄素由北京捷诚科远化工技术研究院提供；无水甲醇、乙酸均为分析纯。

1.2狼把草总黄酮含量测定

1.2.1色谱条件色谱柱为C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇 ∶水 ∶乙酸为75 ∶30 ∶0.4，用前微孔滤膜过滤并经超声脱气处理；检测波长为254 nm，流速为0.7 mL/min；柱温为室温；测试样品每次进样量为10 μL。

1.2.2对照品溶液的制备与线性试验精密称取干燥至恒重的木犀草素、槲皮素、芹黄素标准品，用流动相溶解并定容制成60.5、30.3、26.3 mg/mL的对照品溶液；分别精密吸取1、3、5、7、9 mL，用流动相定容至10 mL，用高效液相色谱仪进行测定。以峰面积（A）对浓度C进行线性回归，得回归方程为：木犀草素A=7.65×103C+685，r=0.999 7，浓度范围605～60.59 μg/mL；槲皮素A=2.02×104C-1.65×103，r=0999 8，浓度范围3.03～30.39 μg/mL；芹黄素A=5.61×103C+395，r=0.999 7，浓度范围2.63～26.39 μg/mL。

1.2.3供试品溶液的制备与测定准确称取5.0 g狼把草生药粉末于三颈瓶中，加入一定量75%乙醇溶液作溶剂，在设定的试验参数下进行微波萃取，抽滤，滤渣加入等量75%乙醇提取第2次；合并2次提取液旋蒸，所得溶液放入坩埚，在70 ℃水浴锅中水浴蒸发；在烘箱中干燥至恒重得干浸膏，取一定量干浸膏用流动相溶解定容，用高效液相色谱仪测定狼把草中木犀草素、槲皮素、芹黄素的含量。

1.2.4总黄酮提取率计算加和每次提取得到浸膏的木犀草素、槲皮素、芹黄素3类黄酮化合物质量作为浸膏中总黄酮质量。狼把草总黄酮提取率计算公式为：狼把草总黄酮提取率=浸膏中总黄酮质量（g）/所用狼把草粉末量（g）×100%。

1.3精确度与稳定性试验

1.3.1精密度试验精密吸取木犀草素、槲皮素、芹黄素3个对照品溶液，按照色谱条件连续进样5次，求得相应含量，并计算相对标准偏差RSD。

1.3.2重现性试验在平行条件下，称取6份狼把草药粉各5.0 g，测定样品溶液中木犀草素、槲皮素、芹黄素含量，并计算RSD。

1.3.3稳定性试验取供试品溶液，用高效液相色谱仪每隔2 h测定1次样品溶液中木犀草素、槲皮素、芹黄素含量，并计算RSD。

1.3.4加样回收试验取6份1.5 g狼把草，加入木犀草素、槲皮素、芹黄素标准品适量，按照供试样品提取条件，提取并制备相应溶液，测定木犀草素、槲皮素、芹黄素含量，并计算RSD。

1.4单因素试验

1.4.1料液比设定微波功率700 W、微波温度70 ℃、提取时间30 min、乙醇体积分数75%，分别按1 ∶10、1 ∶15、1 ∶20、1 ∶25、1 ∶30（g ∶mL）的料液比进行微波萃取。

1.4.2微波功率设定微波温度70 ℃、提取时间30 min、料液比为1 g ∶20 mL、乙醇体积分数75%，分别按400、500、600、700、800 W的微波功率进行微波萃取。

1.4.3乙醇体积分数设定微波功率600 W、微波温度 70 ℃、提取时间30 min、料液比1 g ∶20 mL，分别加入体积分数为45%、55%、65%、75%、85%的乙醇进行微波萃取。endprint

1.4.4微波时间设定微波功率600 W、微波温度70 ℃、料液比1 g ∶20 mL、乙醇体积分数75%，分别微波萃取20、25、30、35、40 min。

1.5正交试验

3小结

本试验采用微波工艺提取狼把草黄酮，该方法加热耗能少，成本低，简单方便。优化所得最佳提取工艺条件为：乙醇体积分数75%、微波功率500 W、提取时间35 min、料液比 1 g ∶20 mL、微波温度70 ℃，该优化条件下的平均提取率为0507 2%。该研究结果对狼把草总黄酮在药物、食品等领域的深入开发提供了一定参考。

参考文献：

[1]江苏新医学院. 中药大辞典[M]. 上海：上海科学技术出版社，1979：1901.

[2]王天勇，南凤仙，杨文远. RP-HPLC法同时测定狼把草中的木犀草素、槲皮素和芹黄素[J]. 宁夏大学学报：自然科学版，1996，17（4）：18-21.

[3]万洪善，李凡. 盐生植物碱蓬黄酮类物质的提取及抗氧化活性研究[J]. 江苏农业科学，2012，40（4）：296-298.

[4]鄢春旻. 黄酮类化合物抗病毒及抗炎活性研究[D]. 南京：南京大学，2012：32.

[5]才金玲，单群，陆军，等. 大豆黄酮对衰老小鼠脑组织的保护作用[J]. 江苏农业科学，2012，40（6）：289-291.

[6]Aquila S，Giner R M，Recio M C，et al. Anti-inflammatory activity of flavonoids from Cayaponia tayuya roots[J]. Journal of Ethnopharmacology，2009，121（2）：333-337.

[7]张宇，曲佐寅，刘立新，等. 万寿菊茎叶中2种黄酮类化合物的体外抗肿瘤活性[J]. 中国实验方剂学杂志，2013，19（13）：233-237.

[8]张海生，陈锦屏. 蜂蛹黄酮的提取及体外抗氧化作用的研究[J]. 食品科学，2008，29（2）：158-162.

[9]尹爱群，穆惠军，江雪欣，等. 黄酮类化合物研究进展[J]. 中国药事，2005，19（11）：50-53.endprint

1.4.4微波时间设定微波功率600 W、微波温度70 ℃、料液比1 g ∶20 mL、乙醇体积分数75%，分别微波萃取20、25、30、35、40 min。

1.5正交试验

3小结

本试验采用微波工艺提取狼把草黄酮，该方法加热耗能少，成本低，简单方便。优化所得最佳提取工艺条件为：乙醇体积分数75%、微波功率500 W、提取时间35 min、料液比 1 g ∶20 mL、微波温度70 ℃，该优化条件下的平均提取率为0507 2%。该研究结果对狼把草总黄酮在药物、食品等领域的深入开发提供了一定参考。

参考文献：

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[6]Aquila S，Giner R M，Recio M C，et al. Anti-inflammatory activity of flavonoids from Cayaponia tayuya roots[J]. Journal of Ethnopharmacology，2009，121（2）：333-337.

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[8]张海生，陈锦屏. 蜂蛹黄酮的提取及体外抗氧化作用的研究[J]. 食品科学，2008，29（2）：158-162.

[9]尹爱群，穆惠军，江雪欣，等. 黄酮类化合物研究进展[J]. 中国药事，2005，19（11）：50-53.endprint

1.4.4微波时间设定微波功率600 W、微波温度70 ℃、料液比1 g ∶20 mL、乙醇体积分数75%，分别微波萃取20、25、30、35、40 min。

1.5正交试验

3小结

本试验采用微波工艺提取狼把草黄酮，该方法加热耗能少，成本低，简单方便。优化所得最佳提取工艺条件为：乙醇体积分数75%、微波功率500 W、提取时间35 min、料液比 1 g ∶20 mL、微波温度70 ℃，该优化条件下的平均提取率为0507 2%。该研究结果对狼把草总黄酮在药物、食品等领域的深入开发提供了一定参考。

参考文献：

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[3]万洪善，李凡. 盐生植物碱蓬黄酮类物质的提取及抗氧化活性研究[J]. 江苏农业科学，2012，40（4）：296-298.

[4]鄢春旻. 黄酮类化合物抗病毒及抗炎活性研究[D]. 南京：南京大学，2012：32.

[5]才金玲，单群，陆军，等. 大豆黄酮对衰老小鼠脑组织的保护作用[J]. 江苏农业科学，2012，40（6）：289-291.

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[7]张宇，曲佐寅，刘立新，等. 万寿菊茎叶中2种黄酮类化合物的体外抗肿瘤活性[J]. 中国实验方剂学杂志，2013，19（13）：233-237.

[8]张海生，陈锦屏. 蜂蛹黄酮的提取及体外抗氧化作用的研究[J]. 食品科学，2008，29（2）：158-162.

[9]尹爱群，穆惠军，江雪欣，等. 黄酮类化合物研究进展[J]. 中国药事，2005，19（11）：50-53.endprint