真姬菇多糖超声波辅助提取工艺及抗氧化活性研究

贺江等

摘要：为探讨真姬菇多糖的提取和抗氧化活性，通过单因素试验设计和正交设计对真姬菇多糖的超声波辅助提取工艺进行研究，采用自由基体外清除试验对真姬菇多糖的体外抗氧化活性进行探讨。结果表明，在超声功率为 200 W、料液比1 g ∶40 mL、提取温度60 ℃、提取时间60 min的条件下，真姬菇多糖提取得率可达5.68%；真姬菇粗多糖对DPPH·自由基和ABTS·+自由基均表现出较好的体外清除效果，当浓度为1.0 mg/mL时，其自由基清除能力与浓度为80 μmol/L的维生素C相当。

关键词：真姬菇；真菌多糖；超声波辅助提取；抗氧化活性

中图分类号： TS201.1 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2014）04-0232-03

收稿日期：2013-08-10

基金项目：湖南省大学生研究性学习与创新性实验项目（编号：2012）；湖南文理学院博士启动项目（编号：2011）；湖南省教育厅科研项目（编号：12C0828）。

作者简介：贺江（1983—），男，江西萍乡人，讲师，主要从事食品安全与食品生物技术相关研究。E-mail：hejiang1119@163.com。我国食用菌资源丰富，许多食用菌以其独特的营养价值和药用功能而深受消费者喜爱。真姬菇别称玉蕈、蟹味菇、海鲜菇等，味道鲜美，肉厚质嫩，具有独特的蟹香味；是北温带地区的一种优良食用菌，于20世纪80年代从日本引入我国山西、辽宁、福建等省进行广泛栽培。已有研究表明，从真姬菇子实体中提取的以β-1，3-D葡聚糖为代表的多糖具有抗肿瘤、提高免疫力、预防衰老、延长寿命等一系列生理活性[1-2]。目前，真姬菇大多作为高营养价值的烹饪食材供消费者享用；但从食用菌中提取多糖等活性成分，并开发出高附加值的保健食品或饮品也是食用菌资源开发与利用的一种有效途径[3-4]。目前，真姬菇多糖提取工艺相关的研究报道较少。因此，本研究以真姬菇为研究材料，采用目前广泛应用的超声波辅助提取工艺[5-6]对其进行多糖提取，重点探讨其提取工艺，并进一步对真姬菇多糖的体外抗氧化活性进行初步研究。本研究的开展，有望为真姬菇资源的开发与利用提供一定参考。

1材料与方法

1.1材料与试剂

真姬菇子实体（干品，产地古田县）；浓硫酸、苯酚（5%）、无水乙醇、无水甲醇、葡萄糖、K2S2O8等均为分析纯；DPPH、ABTS等均为优级纯。

1.2仪器与设备

KH5200超声波提取设备（超声功率为200 W）、UV-1750 紫外可见分光光度计（日本岛津）、电热鼓风干燥箱、恒温水浴锅、旋转蒸发仪、万能粉碎机、电子天平、高速离心机、涡旋振荡器以及其他常规玻璃仪器。

1.3方法

1.3.1真姬菇多糖超声波辅助提取基本流程[5-6]将真姬菌子实体干品于60 ℃下恒温干燥10 h后粉碎，过100目筛；准确称取2.00 g干粉样品，以蒸馏水为提取溶剂，按设定的一系列提取条件进行提取后，样液4 000 r/min离心 10 min；上清液加入3倍体积95%乙醇进行沉淀，离心收集沉淀，并用无水乙醇和乙醚分别洗涤2次，即得粗多糖；将粗多糖溶于蒸馏水中并定容至20 mL，采用苯酚-硫酸法进行多糖含量的测定。

1.3.2工艺参数对真姬菇多糖超声波辅助提取的影响在固定的超声波功率条件下，设置一系列料液比（1 ∶10、1 ∶20、1 ∶30、1 ∶40、1 ∶50，g ∶mL）、提取温度（30、40、50、60、70 ℃）和提取时间（15、30、45、60、75 min）对真姬菇多糖进行提取，以探索这3个因素对真姬菇多糖提取效果的影响，每个处理重复3次。

1.3.3真姬菇多糖超声波辅助提取工艺条件优化本研究在探讨了料液比、提取温度、提取时间等因素对真姬菇多糖提取效果的影响后，进一步对每个因素分别选取3个水平，采用L9（34）正交表进行正交试验，以对真姬菇多糖超声波辅助提取的工艺条件进行优化，正交试验的因素和水平如表1所示。

3结论

本研究通过单因素试验探讨了料液比、提取温度、提取时间等因素对真姬菇多糖超声波辅助提取效果的影响，并在此基础上采用正交设计对真姬菇多糖的超声波辅助提取工艺进行优化。结果表明，在固定超声功率为200 W、料液比 1 g ∶40 mL、提取温度60 ℃、提取时间60 min的条件下，真姬菇多糖提取得率最高，可达5.68%。本研究还进一步采用自由基体外清除试验对真姬菇粗多糖的抗氧化活性进行了初步探讨。结果表明，真姬菇粗多糖对DPPH·自由基和ABTS·+自由基均表现出较好的体外清除效果，当浓度为 1.0 mg/mL 时，其自由基清除能力与浓度为80 μmol/L的维生素C相当。本研究结果可为我国真姬菇资源的开发和利用提供一定的基础。

参考文献：

[1]孙培龙，魏红福，杨开，等. 真姬菇研究进展[J]. 食品科技，2005（9）：54-57.

[2]李顺峰，刘兴华，张丽华，等. 真姬菇子实体多糖的提取工艺优化[J]. 农业工程学报，2008，24（2）：281-284.

[3]周国英，兰贵红，何小燕. 食用菌多糖研究开发进展[J]. 实用预防医学，2004，11（1）：203-204.

[4]王丽霞，杜德清. 食用菌多糖研究进展[J]. 浙江林业科技，2005，25（5）：49-53，56.

[5]罗登宏. 超声波辅助提取金针菇多糖工艺参数优化研究[J]. 江苏农业科学，2010（2）：316-317.

[6]史碧波，王雪波，罗晓妙. 超声波辅助提取鸡油菌多糖的研究[J]. 食品与机械，2012，28（2）：152-154，218.

[7]樊懿娜，赵婷，周叶，等. 苯酚-硫酸法测定灰树花中多糖含量的研究[J]. 安徽农业科学，2011，39（25）：15256-15257.

[8]Faller A L K，Fialho E. Polyphenol content and antioxidant capacity in organic and conventional plant foods[J]. Journal of Food Composition and Analysis，2010，23（6）：561-568.

[9]熊建华，闵嗣璠，董开发，等. 南瓜不同部位抗氧化活性的比较[J]. 食品研究与开发，2011，32（11）：135-138.

[10]秦秀丽，李凤林. 超声波法提取蛹虫草多糖的工艺研究[J]. 江苏农业科学，2011，39（5）：378-380.endprint

摘要：为探讨真姬菇多糖的提取和抗氧化活性，通过单因素试验设计和正交设计对真姬菇多糖的超声波辅助提取工艺进行研究，采用自由基体外清除试验对真姬菇多糖的体外抗氧化活性进行探讨。结果表明，在超声功率为 200 W、料液比1 g ∶40 mL、提取温度60 ℃、提取时间60 min的条件下，真姬菇多糖提取得率可达5.68%；真姬菇粗多糖对DPPH·自由基和ABTS·+自由基均表现出较好的体外清除效果，当浓度为1.0 mg/mL时，其自由基清除能力与浓度为80 μmol/L的维生素C相当。

关键词：真姬菇；真菌多糖；超声波辅助提取；抗氧化活性

中图分类号： TS201.1 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2014）04-0232-03

收稿日期：2013-08-10

基金项目：湖南省大学生研究性学习与创新性实验项目（编号：2012）；湖南文理学院博士启动项目（编号：2011）；湖南省教育厅科研项目（编号：12C0828）。

作者简介：贺江（1983—），男，江西萍乡人，讲师，主要从事食品安全与食品生物技术相关研究。E-mail：hejiang1119@163.com。我国食用菌资源丰富，许多食用菌以其独特的营养价值和药用功能而深受消费者喜爱。真姬菇别称玉蕈、蟹味菇、海鲜菇等，味道鲜美，肉厚质嫩，具有独特的蟹香味；是北温带地区的一种优良食用菌，于20世纪80年代从日本引入我国山西、辽宁、福建等省进行广泛栽培。已有研究表明，从真姬菇子实体中提取的以β-1，3-D葡聚糖为代表的多糖具有抗肿瘤、提高免疫力、预防衰老、延长寿命等一系列生理活性[1-2]。目前，真姬菇大多作为高营养价值的烹饪食材供消费者享用；但从食用菌中提取多糖等活性成分，并开发出高附加值的保健食品或饮品也是食用菌资源开发与利用的一种有效途径[3-4]。目前，真姬菇多糖提取工艺相关的研究报道较少。因此，本研究以真姬菇为研究材料，采用目前广泛应用的超声波辅助提取工艺[5-6]对其进行多糖提取，重点探讨其提取工艺，并进一步对真姬菇多糖的体外抗氧化活性进行初步研究。本研究的开展，有望为真姬菇资源的开发与利用提供一定参考。

1材料与方法

1.1材料与试剂

真姬菇子实体（干品，产地古田县）；浓硫酸、苯酚（5%）、无水乙醇、无水甲醇、葡萄糖、K2S2O8等均为分析纯；DPPH、ABTS等均为优级纯。

1.2仪器与设备

KH5200超声波提取设备（超声功率为200 W）、UV-1750 紫外可见分光光度计（日本岛津）、电热鼓风干燥箱、恒温水浴锅、旋转蒸发仪、万能粉碎机、电子天平、高速离心机、涡旋振荡器以及其他常规玻璃仪器。

1.3方法

1.3.1真姬菇多糖超声波辅助提取基本流程[5-6]将真姬菌子实体干品于60 ℃下恒温干燥10 h后粉碎，过100目筛；准确称取2.00 g干粉样品，以蒸馏水为提取溶剂，按设定的一系列提取条件进行提取后，样液4 000 r/min离心 10 min；上清液加入3倍体积95%乙醇进行沉淀，离心收集沉淀，并用无水乙醇和乙醚分别洗涤2次，即得粗多糖；将粗多糖溶于蒸馏水中并定容至20 mL，采用苯酚-硫酸法进行多糖含量的测定。

1.3.2工艺参数对真姬菇多糖超声波辅助提取的影响在固定的超声波功率条件下，设置一系列料液比（1 ∶10、1 ∶20、1 ∶30、1 ∶40、1 ∶50，g ∶mL）、提取温度（30、40、50、60、70 ℃）和提取时间（15、30、45、60、75 min）对真姬菇多糖进行提取，以探索这3个因素对真姬菇多糖提取效果的影响，每个处理重复3次。

1.3.3真姬菇多糖超声波辅助提取工艺条件优化本研究在探讨了料液比、提取温度、提取时间等因素对真姬菇多糖提取效果的影响后，进一步对每个因素分别选取3个水平，采用L9（34）正交表进行正交试验，以对真姬菇多糖超声波辅助提取的工艺条件进行优化，正交试验的因素和水平如表1所示。

3结论

本研究通过单因素试验探讨了料液比、提取温度、提取时间等因素对真姬菇多糖超声波辅助提取效果的影响，并在此基础上采用正交设计对真姬菇多糖的超声波辅助提取工艺进行优化。结果表明，在固定超声功率为200 W、料液比 1 g ∶40 mL、提取温度60 ℃、提取时间60 min的条件下，真姬菇多糖提取得率最高，可达5.68%。本研究还进一步采用自由基体外清除试验对真姬菇粗多糖的抗氧化活性进行了初步探讨。结果表明，真姬菇粗多糖对DPPH·自由基和ABTS·+自由基均表现出较好的体外清除效果，当浓度为 1.0 mg/mL 时，其自由基清除能力与浓度为80 μmol/L的维生素C相当。本研究结果可为我国真姬菇资源的开发和利用提供一定的基础。

参考文献：

[1]孙培龙，魏红福，杨开，等. 真姬菇研究进展[J]. 食品科技，2005（9）：54-57.

[2]李顺峰，刘兴华，张丽华，等. 真姬菇子实体多糖的提取工艺优化[J]. 农业工程学报，2008，24（2）：281-284.

[3]周国英，兰贵红，何小燕. 食用菌多糖研究开发进展[J]. 实用预防医学，2004，11（1）：203-204.

[4]王丽霞，杜德清. 食用菌多糖研究进展[J]. 浙江林业科技，2005，25（5）：49-53，56.

[5]罗登宏. 超声波辅助提取金针菇多糖工艺参数优化研究[J]. 江苏农业科学，2010（2）：316-317.

[6]史碧波，王雪波，罗晓妙. 超声波辅助提取鸡油菌多糖的研究[J]. 食品与机械，2012，28（2）：152-154，218.

[7]樊懿娜，赵婷，周叶，等. 苯酚-硫酸法测定灰树花中多糖含量的研究[J]. 安徽农业科学，2011，39（25）：15256-15257.

[8]Faller A L K，Fialho E. Polyphenol content and antioxidant capacity in organic and conventional plant foods[J]. Journal of Food Composition and Analysis，2010，23（6）：561-568.

[9]熊建华，闵嗣璠，董开发，等. 南瓜不同部位抗氧化活性的比较[J]. 食品研究与开发，2011，32（11）：135-138.

[10]秦秀丽，李凤林. 超声波法提取蛹虫草多糖的工艺研究[J]. 江苏农业科学，2011，39（5）：378-380.endprint

摘要：为探讨真姬菇多糖的提取和抗氧化活性，通过单因素试验设计和正交设计对真姬菇多糖的超声波辅助提取工艺进行研究，采用自由基体外清除试验对真姬菇多糖的体外抗氧化活性进行探讨。结果表明，在超声功率为 200 W、料液比1 g ∶40 mL、提取温度60 ℃、提取时间60 min的条件下，真姬菇多糖提取得率可达5.68%；真姬菇粗多糖对DPPH·自由基和ABTS·+自由基均表现出较好的体外清除效果，当浓度为1.0 mg/mL时，其自由基清除能力与浓度为80 μmol/L的维生素C相当。

关键词：真姬菇；真菌多糖；超声波辅助提取；抗氧化活性

中图分类号： TS201.1 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2014）04-0232-03

收稿日期：2013-08-10

基金项目：湖南省大学生研究性学习与创新性实验项目（编号：2012）；湖南文理学院博士启动项目（编号：2011）；湖南省教育厅科研项目（编号：12C0828）。

作者简介：贺江（1983—），男，江西萍乡人，讲师，主要从事食品安全与食品生物技术相关研究。E-mail：hejiang1119@163.com。我国食用菌资源丰富，许多食用菌以其独特的营养价值和药用功能而深受消费者喜爱。真姬菇别称玉蕈、蟹味菇、海鲜菇等，味道鲜美，肉厚质嫩，具有独特的蟹香味；是北温带地区的一种优良食用菌，于20世纪80年代从日本引入我国山西、辽宁、福建等省进行广泛栽培。已有研究表明，从真姬菇子实体中提取的以β-1，3-D葡聚糖为代表的多糖具有抗肿瘤、提高免疫力、预防衰老、延长寿命等一系列生理活性[1-2]。目前，真姬菇大多作为高营养价值的烹饪食材供消费者享用；但从食用菌中提取多糖等活性成分，并开发出高附加值的保健食品或饮品也是食用菌资源开发与利用的一种有效途径[3-4]。目前，真姬菇多糖提取工艺相关的研究报道较少。因此，本研究以真姬菇为研究材料，采用目前广泛应用的超声波辅助提取工艺[5-6]对其进行多糖提取，重点探讨其提取工艺，并进一步对真姬菇多糖的体外抗氧化活性进行初步研究。本研究的开展，有望为真姬菇资源的开发与利用提供一定参考。

1材料与方法

1.1材料与试剂

真姬菇子实体（干品，产地古田县）；浓硫酸、苯酚（5%）、无水乙醇、无水甲醇、葡萄糖、K2S2O8等均为分析纯；DPPH、ABTS等均为优级纯。

1.2仪器与设备

KH5200超声波提取设备（超声功率为200 W）、UV-1750 紫外可见分光光度计（日本岛津）、电热鼓风干燥箱、恒温水浴锅、旋转蒸发仪、万能粉碎机、电子天平、高速离心机、涡旋振荡器以及其他常规玻璃仪器。

1.3方法

1.3.1真姬菇多糖超声波辅助提取基本流程[5-6]将真姬菌子实体干品于60 ℃下恒温干燥10 h后粉碎，过100目筛；准确称取2.00 g干粉样品，以蒸馏水为提取溶剂，按设定的一系列提取条件进行提取后，样液4 000 r/min离心 10 min；上清液加入3倍体积95%乙醇进行沉淀，离心收集沉淀，并用无水乙醇和乙醚分别洗涤2次，即得粗多糖；将粗多糖溶于蒸馏水中并定容至20 mL，采用苯酚-硫酸法进行多糖含量的测定。

1.3.2工艺参数对真姬菇多糖超声波辅助提取的影响在固定的超声波功率条件下，设置一系列料液比（1 ∶10、1 ∶20、1 ∶30、1 ∶40、1 ∶50，g ∶mL）、提取温度（30、40、50、60、70 ℃）和提取时间（15、30、45、60、75 min）对真姬菇多糖进行提取，以探索这3个因素对真姬菇多糖提取效果的影响，每个处理重复3次。

1.3.3真姬菇多糖超声波辅助提取工艺条件优化本研究在探讨了料液比、提取温度、提取时间等因素对真姬菇多糖提取效果的影响后，进一步对每个因素分别选取3个水平，采用L9（34）正交表进行正交试验，以对真姬菇多糖超声波辅助提取的工艺条件进行优化，正交试验的因素和水平如表1所示。

3结论

本研究通过单因素试验探讨了料液比、提取温度、提取时间等因素对真姬菇多糖超声波辅助提取效果的影响，并在此基础上采用正交设计对真姬菇多糖的超声波辅助提取工艺进行优化。结果表明，在固定超声功率为200 W、料液比 1 g ∶40 mL、提取温度60 ℃、提取时间60 min的条件下，真姬菇多糖提取得率最高，可达5.68%。本研究还进一步采用自由基体外清除试验对真姬菇粗多糖的抗氧化活性进行了初步探讨。结果表明，真姬菇粗多糖对DPPH·自由基和ABTS·+自由基均表现出较好的体外清除效果，当浓度为 1.0 mg/mL 时，其自由基清除能力与浓度为80 μmol/L的维生素C相当。本研究结果可为我国真姬菇资源的开发和利用提供一定的基础。

参考文献：

[1]孙培龙，魏红福，杨开，等. 真姬菇研究进展[J]. 食品科技，2005（9）：54-57.

[2]李顺峰，刘兴华，张丽华，等. 真姬菇子实体多糖的提取工艺优化[J]. 农业工程学报，2008，24（2）：281-284.

[3]周国英，兰贵红，何小燕. 食用菌多糖研究开发进展[J]. 实用预防医学，2004，11（1）：203-204.

[4]王丽霞，杜德清. 食用菌多糖研究进展[J]. 浙江林业科技，2005，25（5）：49-53，56.

[5]罗登宏. 超声波辅助提取金针菇多糖工艺参数优化研究[J]. 江苏农业科学，2010（2）：316-317.

[6]史碧波，王雪波，罗晓妙. 超声波辅助提取鸡油菌多糖的研究[J]. 食品与机械，2012，28（2）：152-154，218.

[7]樊懿娜，赵婷，周叶，等. 苯酚-硫酸法测定灰树花中多糖含量的研究[J]. 安徽农业科学，2011，39（25）：15256-15257.

[8]Faller A L K，Fialho E. Polyphenol content and antioxidant capacity in organic and conventional plant foods[J]. Journal of Food Composition and Analysis，2010，23（6）：561-568.

[9]熊建华，闵嗣璠，董开发，等. 南瓜不同部位抗氧化活性的比较[J]. 食品研究与开发，2011，32（11）：135-138.

[10]秦秀丽，李凤林. 超声波法提取蛹虫草多糖的工艺研究[J]. 江苏农业科学，2011，39（5）：378-380.endprint