HPLC 法测定蒙药连翘四味汤散剂中连翘苷含量

刘 芳 白玉华

(1.内蒙古自治区人民医院，内蒙古 呼和浩特 010017; 2.内蒙古自治区国际蒙医医院，内蒙古 呼和浩特 010063)

连翘四味汤散剂(苏龙嘎-4)收载于蒙药分册107页。由连翘、拳参、木通、麦冬组成。蒙医用于肠热，痢疾，腹痛，腹泻。方中连翘所占比例较大应为主要药材。原标准仅有薄层鉴别方法，无相对含量检测方法。本文参照《中国药典》2010 年版一部连翘相关品种含量测定方法，选择连翘苷作为指标性成分对本制剂中的连翘苷行高效液相色谱(HPLC)法含量测定。经分析验证，该方法重现性好，专属性强，方中其它组分对连翘苷测定无干扰。

1 仪器与试药

1.1 仪器: 1100 型高效液相色谱仪(美国安捷伦公司)，NC-2000 型色谱工作站(大连中北科学技术公司)，IN -180 型柱温箱(上海英泰科技研究所)，SH6150D 超生波清洗器(上海昆山)，梅特勒电子天平(d =0.1mg)，TG332A型光电天平(d=0.01mg)。

1.2 试剂与试药: 连翘苷对照品(批号: 0821 -200104 供含量测定用)由中国药品生物制品检定所提供;乙腈为色谱纯;水为高纯水;其他试剂均为分析纯。连翘四味汤散由内蒙古国际蒙医医院提供，模拟制剂由内蒙古中医药研究所药物研究室提供。

2 方法学考察

2.1 色谱条件: 色谱柱填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，试验采用非纳米C18 (4.6mm×200mm，5μm)色谱柱;流动相为乙腈-水-磷酸(28: 2: 0.1);柱温为30℃;检测波长为277nm;理论板数按连翘苷峰算应不低于3000。

2.2 测定溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备: 精密称取连翘苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL 含1.04mg 的溶液，即得。

2.2.2 供试品溶液的制备: 取本品2g，加甲醇10mL，称重，超生处理(功率250W，频率40kHz)40min，放冷，称重，补足减失重量，滤过，取续滤液蒸至近干，加中性氧化铝0.5g，搅拌，加到中性氧化铝柱(100 ～200 目，2.5g，内径1.2cm)上，用70%乙醇80mL 洗脱，洗脱液蒸至干，加甲醇溶解，转移至10mL 量瓶内稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液，即得。

2.3 线性关系考察: 精密吸取对照品溶液0.25、0.5、1、2、4、6(mL)，分别置10mL 量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取10μL 进样，按上述色谱条件测定，以峰面积积分值对进样量进行回归分析。结果，连翘苷在0.026μg～0.624μg 范围内呈良好的线性关系，回归方程为y =56070 +561423x r=0.9997。

2.4 精密度试验: 取同一供试品溶液，在上述色谱条件下，连续进样6 次，测定连翘苷峰面积积分值，RSD 为0.62%，精密度良好。

2.5 提取率的考察: 供试品分别进行20、30、40、50 (min)的超声提取考察，结果，30min 后连翘苷含量不再增加，确定40min 为最适合提取时间。

2.6 稳定性试验: 取同一份供试品溶液，分别于0、2、6、8(h)进行测定，结果，连翘苷在12h 内的峰面积积分值基本稳定不变。

2.7 重复性试验: 取同一批号供试品6 份，各约2.0g，精密称定，分别按［2.2］方法制备供试品溶液，按上述条件测定。结果供试品平均含量为0. 39 mg·g-1)，RSD 为1.82%。

2.8 回收率试验 取已知含量的供试品6 份，各约2g，精密称定，分别精密加入连翘苷对照品溶液(1.04mg·mL-1)1mL，加热挥去甲醇溶液，其余按［2.2］方法试验，测定每份的含量，计算回收率，结果见表1 。

表1 回收率测定结果

2.9 样品含量测定: 取医院制剂3 批次(20100405、20110602 、20121207 )与模拟样品3 批次(20121201、20121202、20121203)，按上述方法试验，含量分别为0.39、0.32、0.36(mg·g-1)，模拟供试品含量分别为0.45、0.46、0.42(mg·g-1)，6 批样品平均含量0.40mg·g-1。

2.10 专属性考察: 按［2.2］制备供试品溶液、对照品溶液、连翘阴性供试品溶液。在上述色谱条件下，分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10μL，分别注入液相色谱仪测定。结果表明，阴性对照在与连翘苷色谱峰相同的保留时间处无对应峰干扰。见图1、2、3

图1 对照品HPLC 图谱

图2 供试品HPLC 图谱

图3 阴性对照HPLC 图谱

2.11 耐用性实验: 以Hypersil BDSC18 色谱柱，按上述方法测定含量。测定结果与Kromasil C18 色谱柱一致。

3 讨 论

根据检索，蒙药连翘四味汤散剂暂无含量测定方法，本文在文献的基础上建立了制剂测定方法。方法学研究表明，该测定方法重现性好，杂质少干扰小，同时相对延长色谱柱使用时间。

对制剂使用的连翘测定表明，连翘苷含量在0.19 ～0.24%，连翘苷含量均超过药典要求标准0.15%。

有文献报道，用一定比例甲醇的水溶液为溶剂，对药材测定影响不大，对于复方制剂干扰成分多，不适宜本制剂的测定。