HPLC法测定十一味养血消痛丸中丹参酮ⅡA的含量

李晓燕

（河南省商丘市第一人民医院，商丘476000）

HPLC法测定十一味养血消痛丸中丹参酮ⅡA的含量

李晓燕

（河南省商丘市第一人民医院，商丘476000）

目的建立HPLC法测定十一味养血消痛丸中丹参酮ⅡA含量的方法。方法采用Eclipse XDB-C18色谱柱，甲醇—水（75：25）为流动相；流速1.0ml·min-1；检测波长270nm。结果丹参酮ⅡA在34.04～238.28μg范围内线性关系良好（r=0.9999），平均回收率为98.05%，RSD=1.27%（n=6）。结论本方法操作简便，专属性强，结果准确，可用于十一味养血消痛丸的质量控制。

丹参酮ⅡA；高效液相色谱法；十一味养血消痛丸；含量测定

十一味养血消痛丸是由丹参、白芍、香附、秦艽、桂枝、川牛膝等药材加工制成的医院制剂，具有活血行气，温经通络，消肿止痛之功效，用于骨质增生引起的关节疼痛肿胀，活动受限，椎间盘突出，近关节损伤后遗症。［1］现行质量标准中未收载含量测定项目，不能有效地控制药品质量。丹参为方中主药，丹参酮ⅡA是丹参的主要有效成分［2］，本文以丹参酮ⅡA为指标成分，建立了十一味养血消痛丸中丹参酮ⅡA的高效液相色谱测定法，为该制剂的质量控制提供了客观的含量评价方法。

1 仪器与试药

1.1 仪器Agilent 1260型高效液相色谱仪，AUW-220D电子分析天平，5210DT超声处理器。

1.2 试药丹参酮ⅡA对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110766-200518）；甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂为分析纯。十一味养血消痛丸（由柘城县人民医院提供，批号：130121、130326、130622）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件色谱柱：Eclipse XDB-C18色谱柱（4.6 ×150mm）；流动相：甲醇—水（75：25）为流动相［3］；流速1.0ml·min-1；检测波长270nm；进样量10μl；理论板数应不低于2000。

2.2 线性关系考察取丹参酮ⅡA对照品约10mg，精密称定，置100ml量瓶中，加甲醇适量，振摇使完全溶解后，稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml置50 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。按照“2.1”项色谱条件，分别进样2、4、6、8、10、12、14μl，记录丹参酮ⅡA峰面积值，以峰面积积分值（Y）对对照品进样量（X）进行线性回归，得回归方程：Y=196.45X+0.0778 r= 0.9999。结果表明，丹参酮ⅡA对照品进样量在34.04～238.28μg范围内与峰面积值呈良好的线性关系。

2.3 对照品溶液的制备取丹参酮ⅡA对照品约10mg，精密称定，置100ml量瓶中，加甲醇适量，振摇使完全溶解后，稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液，精密量取10ml，置50 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2.4 供试品溶液及阴性对照溶液的制备取本品约4.0g，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。另取缺丹参的其他味药按处方工艺制成阴性制剂，按上述方法制备阴性对照溶液。

2.5 干扰试验取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各10μl，按照“2.1”项色谱条件，分别进样测定，记录色谱图，结果见图1。

2.6 精密度试验取同一对照品溶液，重复进样5次，每次10μl，记录峰面积，RSD=0.93%（n=5），表明精密度良好。

2.7 稳定性试验取同一对照品溶液，分别在0、1、2、3、4、5、6、8、10h，进样测定，RSD=0.88%，供试品溶液在10小时内峰面积基本稳定。

图高效液相色谱图

2.8 加样回收率试验称取6份已知含量为0.08mg／g的样品约2.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入对照品储备液2.00ml，按照“2.4”项下方法制备供试品溶液，按照“2.1”项色谱条件，分别进样测定，结果见表1。

表1 加样回收率试验结果

2.9 样品测定取3批样品，按“2.4”项下方法制备供试液，各进样10μl，按外标法计算丹参酮ⅡA的含量，结果见表2。

表2 3批样品中丹参酮ⅡA的含量

3 讨论

丹参酮ⅡA是丹参的有效成分，本文建立的高效液相色谱法测定丹参酮ⅡA的含量，该方法操作简便，杂质对测定无干扰，重复性好，对控制该制剂的内在质量具有重要意义。

本文参考有关文献［3-6］，针对本制剂的制备工艺及辅料的特性，通过试验比较了回流、超声、索式提取等提取方法，结果表明超声处理30分钟提取较为完全，且操作简便快捷，故采用超声提取。

［1］河南省食品药品监督管理局.河南省医疗机构制剂标准［S］.2004.

［2］国家药典委员会.中华人民共和国药典［M］.北京：中国医药科技出版社，2010：70-71.

［3］王湛.HPLC测定调经活血片中丹参的含量［J］.中外医学研究，2010，8（22）：68-69.

［4］严红，高杨，郭伟，等.不同产地丹参药材中丹参酮ⅡA及丹参素的含量比较［J］.天津药学，2003，15（3）：10-12.

［5］于百青，杨敏，孙鹏云.高效液相色谱法测定心舒丸中丹参酮ⅡA含量［J］.中国药业，2012，21（13）：36-37.

［6］郭志鹏，郭迎霞.HPLC法测定通神复脑丸中丹参酮ⅡA的含量［J］.中国药师，2009，12（11）：1666-1667.

De t e r mina tio n o f Tan s hino neⅡAin Shiyiw ei Yang x ue Xiao t o ng Pill b y HPL C

Li xiaoyan
（Shangqiu First People’s Hospital,Shangqiu,Henan Province,476000,China）

ObjectiveTo establish a HPLC method to determinate TanshinoneⅡAin Shixivei Yangwue Xiaotong pill.MethodsThe chromatographic sxstem consisted of C18 column，using methanol-vaters（75：25）as mobile phase.The content vas detected at a vaveleng of 270 nm，the flov rate vas 1.0ml·min-1.ResultsThe TanshinoneⅡAhad a good linear relation in the range of 34.04～238.28μg（r=0.9999），the average recoverx vas 98.05%and RSD=1.27%（n=6）.ConclusionThe established method vas accurate，sensitive and simple.It could be used for qualitx control of Shixivei Yangwue Xiaotong pill.

TanshinoneⅡA；HPLC；Shixivei Yangwue Xiaotong pill；Determination

10.3969／j.issn.1672-2779.2014.02.101

：1672-2779（2014）-02-0148-02

��杨 杰 本文校对：刘晓云

2013-10-14）